【摘要】：目的:基于毒損腦絡(luò)學(xué)說,通過制作大鼠永久性大腦中動脈阻塞模型(MCAO middle cerebral artery occlusion),觀察缺血性腦卒中后應(yīng)用清開靈注射液對α-syn、Tau、Bcl-2三種蛋白表達(dá)含量的影響,探求清開靈發(fā)揮腦保護(hù)作用的可能機(jī)制,為缺血性腦卒中的治療尋找新的靶點(diǎn)。方法:將大鼠隨機(jī)分為清開靈組、依達(dá)拉奉組、模型組、空白組并制作大鼠永久性大腦中動脈阻塞模型(MCAO middle cerebral artery occlusion),在造模手術(shù)后分別對清開靈組與依達(dá)拉奉組進(jìn)行藥物注射,4小時后進(jìn)行第二次注射。24小時后進(jìn)行行為學(xué)檢測,并麻醉斷頭取腦,以HE染色觀察腦皮質(zhì)組織形態(tài)學(xué)變化。對腦皮質(zhì)進(jìn)行免疫組化統(tǒng)計α-syn蛋白陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá);對腦皮質(zhì)與缺血半暗帶采用蛋白免疫印跡法(Western blot),分別統(tǒng)計腦皮質(zhì)與缺血半暗帶α-syn蛋白、Tau蛋白、Bcl-2蛋白表達(dá)量;并探討α-syn蛋白、Tau蛋白、Bcl-2蛋白三者間相關(guān)性。結(jié)果:1.MCAO模型大鼠行為鑒定:大腦中動脈阻塞術(shù)后,大鼠表現(xiàn)左側(cè)前爪不能完全伸展,行走時向癱瘓側(cè)甚至傾倒,小便失禁等癥狀表明模型成功。2.腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化:取出完整大腦時,患側(cè)腦部水腫膨大。腦組織形態(tài)MCAO組大鼠腦皮結(jié)構(gòu)紊亂,排列極不規(guī)則,凋亡細(xì)胞可見核固縮及致密深染的核,細(xì)胞腫脹碎裂,神經(jīng)纖維網(wǎng)呈海綿狀,并且出現(xiàn)大量空泡;清開靈組大鼠可見缺血損傷,與模型組相比細(xì)胞數(shù)量較多,排列較整齊,神經(jīng)纖維空泡較少,核不規(guī)則較少。3.α-syn蛋白結(jié)果:免疫組化:大鼠腦皮質(zhì)α-syn蛋白陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)相對減少;清開靈組腦皮質(zhì)α-syn蛋白陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)增加;Western blot結(jié)果:缺血半暗帶中模型組與空白組相比,α-syn蛋白表達(dá)量升高,具有差異(P0.05);在皮質(zhì)中模型組與空白組相比,α-syn蛋白表達(dá)降低,具有顯著差異(P0.01);經(jīng)清開靈與依達(dá)拉奉治療后,缺血半暗帶與皮質(zhì)中α-syn表達(dá)量均升高且高于模型組,具有統(tǒng)計學(xué)意義。4.Tau蛋白結(jié)果:缺血半暗帶/皮質(zhì)模型組與空白組相比,Tau蛋白表達(dá)量升高,具有差異(P0.05);經(jīng)清開靈與依達(dá)拉奉治療后,缺血半暗帶與皮質(zhì)中Tau蛋白表達(dá)量均降低具有統(tǒng)計學(xué)意義。5.Bcl-2蛋白結(jié)果:缺血半暗帶/皮質(zhì)模型組與空白組相比,Bcl-2蛋白表達(dá)量升高,具有差異(P0.05);經(jīng)清開靈與依達(dá)拉奉治療后,半暗帶與皮質(zhì)中Bcl-2蛋白表達(dá)量均降低且低于模型組,具有統(tǒng)計學(xué)意義。6.α-syn蛋白、Tau蛋白、Bcl-2蛋白表達(dá)量及灰度值關(guān)系比較結(jié)果:α-syn蛋白與Tau蛋白:模型組中大鼠腦內(nèi)α-syn蛋白與Tau蛋白含量均增加,經(jīng)過治療后大鼠半暗帶及皮質(zhì)中,隨α-syn蛋白表達(dá)量的增高Tau蛋白表達(dá)量降低具有正相關(guān)的趨勢。α-syn蛋白與Bcl-2蛋白:模型組中大鼠腦內(nèi)α-syn蛋白與Bcl-2蛋白含量均增加,經(jīng)過治療后大鼠半暗帶及皮質(zhì)中,隨α-syn蛋白表達(dá)量的增高Bcl-2蛋白表達(dá)量降低這具有負(fù)相關(guān)趨勢。Tau蛋白與Bcl-2蛋白:模型組中大鼠腦內(nèi)Tau蛋白與Bcl-2蛋白含量均增加,經(jīng)過治療后大鼠半暗帶及皮質(zhì)中,具有隨Tau蛋白表達(dá)量的降低Bcl-2蛋白表達(dá)量降低這一趨勢。結(jié)論:1.MCAO模型鼠在24小時后腦組織發(fā)生缺血損傷。2.帕金森致病標(biāo)志性蛋白α-syn蛋白含量經(jīng)清開靈治療后明顯升高,皮質(zhì)缺血半暗帶均有這一趨勢,提示在本實驗缺血性腦卒中后α-syn蛋白升高可能發(fā)生腦保護(hù)作用。3.阿爾茨海默病標(biāo)志性致病蛋白Tau蛋白含量經(jīng)清開靈治療后降低,皮質(zhì)缺血半暗帶均有這一趨勢,提示在本實驗缺血性腦卒中后Tau蛋白含量降低可能減少細(xì)胞凋亡。4.抗凋亡基因Bcl-2蛋白含量經(jīng)清開靈治療后降低,皮質(zhì)缺血半暗帶均有這一趨勢,提示在本實驗中Bcl-2并未發(fā)揮抗凋亡作用,與以往實驗結(jié)果不符合,其原因需進(jìn)一步探討。5.本實驗經(jīng)清開靈治療后Tau蛋白含量隨α-syn蛋白含量升高而降低,皮質(zhì)缺血半暗帶均有這一趨勢,提示過高量的α-syn蛋白可能抑制Tau含量升高,從而減少缺血后細(xì)胞凋亡。6.本實驗經(jīng)清開靈治療后Bcl-2蛋白含量隨α-syn蛋白含量升高而降低,皮質(zhì)缺血半暗帶均有這一趨勢,提示過高表達(dá)的α-syn蛋白抑制Bcl-2蛋白表達(dá),兩者間存在一定關(guān)系,與缺血性腦卒中細(xì)胞凋亡增多有相關(guān)性。7.本實驗中經(jīng)清開靈治療后Bcl-2蛋白含量隨Tau蛋白含量降低而降低,皮質(zhì)缺血半暗帶均有這一趨勢,按照以往研究推測Tau蛋白降低并非通過Bcl-2蛋白發(fā)揮抗凋亡作用兩者本實驗中可能相關(guān)性不大。
【圖文】：

圖１蛋白配平標(biāo)準(zhǔn)曲線圖逡逑（８）將樣品標(biāo)記分成兩份，分裝在１．５ｍｌ的離心管當(dāng)中，凍存－８０°Ｃ冰箱，，實驗時逡逑

清開靈組（ＨＥ邋Ｘ邋４００）邐依達(dá)拉奉組（ＨＥ邋Ｘ邋４００）逡逑圖２邋ＭＣＡＯ大鼠腦皮質(zhì)組織形態(tài)逡逑３．邋２免疫組化測定ＭＣＡ０大鼠腦皮質(zhì)ａ邋－ｓｙｎ蛋白結(jié)果逡逑空白組大鼠皮質(zhì)能見到較少數(shù)Ｍ的ａ邋＿ｓｙｎ陽性細(xì)胞數(shù)量表達(dá)；經(jīng)過大
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R277.7

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本文編號：2671048