【摘要】：研究目的多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎性脫髓鞘疾病,具有致殘、復(fù)發(fā)、進(jìn)展、致死的特點(diǎn),極大的危害生命健康,且世界醫(yī)學(xué)尚無治愈的方法。近年來中醫(yī)治療MS顯示出較好的臨床療效,但是中醫(yī)治療MS的相關(guān)機(jī)制尚不明確,影響其在世界的推廣和應(yīng)用。本研究觀察針刺對MS的動物模型--實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠脊髓內(nèi)鈣離子接頭蛋白-1(IBA-1)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)及血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平的影響,探究針刺治療EAE小鼠可能的作用機(jī)制。研究方法將8-10周齡的36只雌性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為4組,分別為空白對照組、模型組、激素組、針刺組,每組各9只。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,空白對照組小鼠不做任何處理,其余小鼠均使用MOG35-55多肽建立EAE模型。造模后第14天開始,空白對照組、模型組:每天抓取小鼠一次;激素組:醋酸潑尼松灌胃;針刺組:針刺“大椎穴”以及雙側(cè)“腎俞”、“足三里”穴。至造模后28天取材,檢測各組小鼠血清TNF-α含量、脊髓COX-2、IBA-1免疫組化陽性表達(dá)。研究結(jié)果1.與空白對照組相比,EAE造模小鼠12天開始,模型組小鼠最先出現(xiàn)輕度動作笨拙、步態(tài)不穩(wěn)癥狀,神經(jīng)損傷癥狀出現(xiàn)。14天時各組造模小鼠均出現(xiàn)神經(jīng)損傷的癥狀,神經(jīng)功能評分與空白對照組相比,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。造模小鼠Kono神經(jīng)功能評分在1-4分之間,造模成功。2.與空白對照組相比,模型組小鼠血清TNF-α含量、脊髓COX-2、IBA-1平均光密度均顯著升高(均P0.01)。3.與模型組相比,針刺組EAE小鼠免疫后第14天出現(xiàn)神經(jīng)功能損傷癥狀,晚于模型組(免疫后第12天出現(xiàn)癥狀),針刺組EAE小鼠神經(jīng)功能評分水平亦低于模型組(P0.01);針刺組EAE小鼠血清TNF-α含量22.16±2.12,顯著低于模型組26.31±2.65(P0.01);針刺組EAE小鼠脊髓COX-2陽性表達(dá)平均光密度(2.86±1.18)×10-3低于模型組(12.57±3.76)X10-3(P0.01);此外,針刺組小鼠脊髓IBA-1陽性表達(dá)平均光密度(4.16±2.01)×10-3也低于模型組(5.47±1.67)×10-3(P0.05)。4.與模型組相比,激素組EAE小鼠神經(jīng)功能評分較低,免疫第14天小鼠出現(xiàn)神經(jīng)功能損癥狀,晚于模型組;激素組EAE小鼠血清TNF-α含量22.37±1.62,顯著低于模型組26.31±2.65(P0.01);激素組EAE小鼠脊髓COX-2陽性表達(dá)平均光密度(0.74±0.61)×10-3低于模型組(12.57±3.76)X10-3(P0.01);此外,激素組小鼠脊髓IBA-1陽性表達(dá)平均光密度(0.56±0.23)×10-3也低于模型組(5.47±1.67)×10-3(P0.01)。激素組EAE小鼠血清TNF-α含量、脊髓COX-2、IBA-1表達(dá)含量均低于模型組,二者相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(均P0.01)。5.與針刺組相比,激素組較EAE小鼠神經(jīng)功能評分水平更低;激素組EAE小鼠血清TNF-α含量稍高于針刺組,二者相比無統(tǒng)計學(xué)差別(P0.05);激素組EAE小鼠脊髓COX-2陽性表達(dá)平均光密度(0.74±0.61)×10-3低于針刺組(P0.05);激素組小鼠脊髓IBA-1陽性表達(dá)平均光密度(0.56±0.23)X10-3也低于針刺組(P0.01)。結(jié)論1.本研究采用MOG35-55多肽和完全弗氏佐劑誘導(dǎo)雌性C57BL/6小鼠,成功建立EAE模型。2.針刺可以減輕EAE小鼠神經(jīng)損傷,改善神經(jīng)功能評分,且作用優(yōu)于激素組。3.針刺降低EAE小鼠血清TNF-α含量效果與激素治療相當(dāng),但針刺降低EAE小鼠脊髓COX-2、IBA-1陽性表達(dá)程度較激素治療差。4.針刺能夠改善減輕EAE小鼠神經(jīng)損傷,這可能與針刺降低EAE小鼠血清TNF-α含量,減少脊髓COX-2、IBA-1陽性表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

圖１各組小鼠不同時間神經(jīng)功能評分逡逑如表１可見，第０天，小鼠神經(jīng)功能評分均為０分；第１２天時模型組ＥＡＥ小鼠現(xiàn)輕度動作笨拙、步態(tài)不穩(wěn)癥狀，神經(jīng)功能評分為（0．１１±0．邋２２）分，其余組別化；模型組第２０天時評分達(dá)到峰值（３．邋１１邋±０．４２）分，之后評分逐漸減少；針Ｅ小鼠第１４天出現(xiàn)動物尾部張力降低或無力，輕度步態(tài)不穩(wěn)，神經(jīng)功能評分為（０．邋１２５）分，第２４天評分達(dá)到峰值（１．６７±（）．邋３５）分。激素組ＥＡＥ小鼠第１４天時出力降低或無力，動作笨拙等神經(jīng)功能異常癥狀，神經(jīng)功能評分為（０．４４±０．邋３９）逡逑第２４天時神經(jīng)功能評分最高（２．邋０６±０．邋３０）分，之后評分有所下降；通過統(tǒng)計，各組小鼠神經(jīng)功能評分具有統(tǒng)計學(xué)差異。逡逑

圖２各組小鼠不同時間神經(jīng)功能評分估算邊際均值逡逑主體內(nèi)效應(yīng)的檢驗(yàn)，時間：Ｆ＝３４５．邋１０３，邋Ｋ０．邋０１，，不同時間各組小鼠神經(jīng)功能評分有統(tǒng)計學(xué)差異：逡逑＊干預(yù)：Ｆ＝５８．邋８０４，邋Ｐ＜０．邋０１，時間與干預(yù)的交互作用具有統(tǒng)計學(xué)差異。主體間效應(yīng)的檢驗(yàn)，逡逑５９．邋１７８，邋Ｋ０．邋０１，說明組間存在統(tǒng)計學(xué)差異。逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245

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本文編號：2656105