【摘要】：研究目的:應用代謝組學方法分析脾虛瘀毒型腸癌患者代謝產(chǎn)物變化規(guī)律,利用分子生物學技術(shù)對異常代謝通路進行驗證,為健脾化瘀方治療脾虛瘀毒型腸癌提供客觀科學依據(jù)。研究方法:1)選取我院83例脾虛瘀毒型腸癌患者和90例健康志愿者,利用液相色譜/質(zhì)譜(LC-MS)對收集血清標本進行檢測,所得數(shù)據(jù)輸入SIMCA-13軟件進行多變量統(tǒng)計分析,將找到的潛在差異化合物在數(shù)據(jù)庫進行檢索與確認,得到最終匹配內(nèi)源性化合物,并進行拓撲分析和富集分析篩選異常代謝通路。2)對篩選出的代謝通路進行動物實驗驗證,采用人結(jié)腸癌LOVO細胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,觀察給藥后裸鼠日�；顒印⒕駹顟B(tài)及腫瘤生長變化,計算瘤體體積抑制率,采用Western Blot法、免疫組織化學方法檢測移植瘤組織中糖酵解相關蛋白的變化。采用乳酸脫氫酶測定試劑盒和葡萄糖含量測定試劑盒檢測健脾化瘀方對裸鼠血清中LDH及葡萄糖含量的影響。研究結(jié)果:1)將83例腸癌患者和90例健康志愿者血清進行LC-MS代謝組學研究,進行多變量分析,發(fā)現(xiàn)兩組血清產(chǎn)物水平呈現(xiàn)完全不同的分布。通過數(shù)據(jù)分析出的差異代謝物有19種,其中在HMDB中鑒定出結(jié)構(gòu)的有14種,10種代謝物表達下降,4種代謝物表達升高。拓撲分析和富集分析顯示其中糖酵解通路受到影響。2)健脾化瘀方能有效改善裸鼠生存狀態(tài),給藥后健脾化瘀方組裸鼠種植瘤體積明顯小于空白對照。健脾化瘀方給藥組裸鼠血清乳酸脫氫酶活性及葡萄糖含量下降。Western Blot及免疫組化結(jié)果顯示,與空白對照組相比,健脾化瘀方組GLUT-1、PKM2、HIF-1 α、C-Myc的表達下調(diào)。Western Blot結(jié)果顯示,健脾化瘀方給藥組PI3K、P-PI3K、AKT、mTOR、P-mTOR、P-mTOR蛋白表達下調(diào)。研究結(jié)論:1)基于LC-MS技術(shù)對晚期腸癌患者和健康志愿者血清代謝組學研究,脾虛瘀毒型腸癌的患者血清代謝物發(fā)生了變化,代謝通路分析顯示,其作用機制可能與糖酵解代謝通路改變有關。2)健脾化瘀方能明顯抑制人結(jié)腸癌LOVO細胞增殖,抑制裸鼠皮下移植瘤的生長。3)健脾化瘀方給藥組乳酸脫氫酶活性、葡萄糖含量及糖酵解相關蛋白表達下調(diào),提示其抗腫瘤機制與抑制腫瘤細胞糖酵解相關。4)健脾化瘀方給藥組PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表達下調(diào),提示健脾化瘀方可能是通過抑制PI3K/AKT/mTOR/HIF-1 α介導的糖酵解信號轉(zhuǎn)導通路,為探討健脾化瘀方抗腫瘤的異常代謝的機制提供了新思路。
【圖文】：

ＰＬＳ－ＤＡ方法再次進行分析。不同顏色符號在此種建模中分散的越開說明兩組之間的成分逡逑差異越顯著。圖例１綠色代表腸癌組，圖例２藍色代表健康組，本研究ＰＬＳ－ＤＡ得分圖如逡逑圖２－２所示，顯示腸癌組和健康組血清樣本具有差異。逡逑１２逡逑

圖２－２．正離子模式下基于腸癌組和健康組血清代謝輪廓的ＰＬＳ－ＤＡ得分圖逡逑３．３運用０ＰＬＳ－ＤＡ分析方法去除與樣品分類無關的信息，對血清全譜進行模式判別分逡逑析，發(fā)現(xiàn)兩組樣本能得到分離。圖２－３為正離子模式檢測所得數(shù)據(jù)經(jīng)０ＰＬＳ－ＤＡ簡化降逡逑維后的得分圖。逡逑ＣＶＳ－腸癌－１－１．Ｍ４邋（ＯＰＬＳ－ＤＡ）邐＿邋１逡逑Ｓｃａｌｅｄ邋ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌｌｙ邋ｔｏ邋Ｒ２Ｘ邐■邋２逡逑Ｃｏｌｏｒｅｄ邋ａｃｃｏｒｄｉｎｇ邋ｔｏ邋ｃｌａｓｓｅｓ邋ｉｎ邋Ｍ４逡逑？ｌ邋邐－—邐邐邐￣逡逑４０－邐？逡逑＿６0邐ｒ邐ｉ邐；邐ｊ邋＇￣￣＇＞邐＇邐＇邐＼邐＇？邐＇邐！邐’‘邐：邐！邐！邐１邐１邐１邐！邐１邐＇邐１邋￣逡逑－６０邐－４０邐－２０邐０邐２０邐４０逡逑１．００１０９邋＊邋ｔ［ｌ］逡逑：［１］邋＝邋０．１０１邐Ｒ２ｘ［ｘｓｉｄｅ邋Ｃｏｍｐ．邋１］邋＝邋０．０９５８邋Ｅｌｌｉｐｓｅ：邋Ｈｏｔｅｌｌｉｎｇ＇ｓ邋Ｔ２邋（９５％）逡逑ＳＳＭＣＡ邋：Ｇ邋０邋－邐ｎ：２ｉＳ：Ｋ邋（ＵＴＯＨ）逡逑圖２－３．正離子模式下基于腸癌組和健康組血清代謝輪廓的ＯＰＬＳ－ＤＡ得分圖逡逑１３逡逑
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R273

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本文編號：2653906