發(fā)布時(shí)間：2020-05-05 20:29

【摘要】：目的:以胃潰瘍模型大鼠為觀察對象,采用免疫熒光技術(shù),通過觀察疾病狀態(tài)下,相關(guān)“同功穴”穴區(qū)肥大細(xì)胞的形態(tài)、功能變化,及其表達(dá)的化學(xué)成分如5-HT、HA、CGRP、SP等的變化,探討“同功穴”敏化反應(yīng)和針刺發(fā)揮效應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ);并進(jìn)一步觀察電針足三里穴及合募配穴對應(yīng)激性胃潰瘍模型大鼠胃組織蛋白翻譯后修飾的差異,為今后針刺治療本病的穴位優(yōu)選及配伍提供科學(xué)依據(jù)。方法:選取胃脘痛的“同功穴”中出現(xiàn)頻次最高,且分別位于腹部、背部、上肢和下肢的4個(gè)腧穴,即中脘穴、胃俞穴、內(nèi)關(guān)穴、足三里穴,另取4個(gè)分別分布于腹部、背部、上肢和下肢的非胃脘痛的“同功穴”作為對照,即關(guān)元穴、肝俞穴、曲池穴、三陰交穴。根據(jù)實(shí)驗(yàn)步驟:麻醉→點(diǎn)穴→灌流→取皮膚組織→冷凍切片→免疫熒光染色→封片,觀察8個(gè)穴位在正常大鼠、胃潰瘍模型大鼠穴區(qū)皮膚組織中存在的肥大細(xì)胞(MC)與降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、五羥色胺(5-HT)、組胺(HA)和P物質(zhì)(SP)等化學(xué)成分的陽性表達(dá)情況,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。進(jìn)一步選取胃脘痛“同功穴”中常用于治療胃腑病的足三里穴,對胃潰瘍模型大鼠進(jìn)行電針刺激,并與模型組進(jìn)行對照,探討針刺效應(yīng)與腧穴敏化之間的聯(lián)系。最后,通過蛋白翻譯后修飾技術(shù),根據(jù)實(shí)驗(yàn)步驟:蛋白提取→蛋白定量→電泳→轉(zhuǎn)膜→膜封閉→孵育一抗→孵育二抗→曝光→結(jié)果分析,從蛋白層面探索針刺單穴與配伍腧穴對臟腑的效應(yīng)差異。結(jié)果:1.在生理狀態(tài)下,腹部和背部腧穴局部皮膚組織中MC含量較少,而四肢上的腧穴局部皮膚組織中MC含量相對較多;5-HT和HA廣泛存在于皮膚組織中,且往往與MC呈現(xiàn)共同陽性表達(dá);不同部位的腧穴,其局部皮膚組織中CGRP陽性表達(dá)有差異:腹部較少,背部極少,四肢部位相對較多;不同部位的腧穴,其局部皮膚組織中SP陽性表達(dá)有差異:腹部和背部極少,四肢部位相對較多;部位相近的腧穴,其局部皮膚組織中化學(xué)物質(zhì)的成分相同、數(shù)量相近。2.與正常大鼠相比,胃潰瘍模型大鼠的中脘穴、關(guān)元穴、胃俞穴、內(nèi)關(guān)穴、曲池穴、足三里穴、三陰交穴的MC、5-HT、HA、CGRP、SP的陽性表達(dá)多有明顯增加,而肝俞穴MC變化不明顯,但肝俞穴的5-HT、HA顯著增加。胃脘痛的“同功穴”——中脘穴、胃俞穴、內(nèi)關(guān)穴、足三里穴與部位相近的非“同功穴”相比,其中中脘穴、胃俞穴、足三里穴MC、5-HT、HA的陽性表達(dá)數(shù)量更多,中脘穴和足三里穴CGRP和SP的陽性表達(dá)纖維更長。此外,胃潰瘍模型大鼠穴區(qū)皮膚組織部分MC有脫顆�，F(xiàn)象發(fā)生。3.與胃潰瘍模型大鼠“足三里穴”區(qū)MC陽性表達(dá)含量相比,電針干預(yù)胃潰瘍模型大鼠“足三里穴”后,能夠使MC進(jìn)一步富集,數(shù)量增加,且MC脫顆粒率亦增加;5-HT和HA的陽性表達(dá)數(shù)量增加;穴區(qū)皮膚組織中CGRP和SP的纖維長度增加。說明MC、5-HT、HA和CGRP、SP等是針刺發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。4.在電針單穴與配伍腧穴干預(yù)胃潰瘍模型大鼠的實(shí)驗(yàn)中,空白組、模型組、單穴組、腧穴配伍組之間從WB修飾篩選譜圖中可看到差異顯著,且受到2-羥基異丁�；�、丙二�；�、琥珀�；�、乙�；⒘姿峄娘@著調(diào)控。結(jié)論:1.疾病狀態(tài)下,與病癥相關(guān)的“同功穴”會(huì)發(fā)生特異性的敏化反應(yīng)。2.MC、5-HT、HA、CGRP、SP是腧穴發(fā)生敏化反應(yīng)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。3.MC、5-HT、HA、CGRP、SP是針灸發(fā)揮效應(yīng)的重要載體。4.針刺單穴與配伍腧穴對臟腑組織具有不同的調(diào)控作用。
【圖文】：

長春中醫(yī)藥大學(xué) 2019 屆博士學(xué)位論文30圖1 大鼠“足三里”穴區(qū)皮膚組織肥大細(xì)胞與血管的分布特征3.2 正常大鼠穴區(qū)皮膚組織肥大細(xì)胞及相關(guān)化學(xué)物質(zhì)的表達(dá)3.2.1 正常大鼠“中脘穴”與“關(guān)元穴”皮膚組織肥大細(xì)胞及相關(guān)化學(xué)物質(zhì)的表達(dá)觀察發(fā)現(xiàn)，正常大鼠 中脘穴 和 關(guān)元穴 穴區(qū)MC主要分布在皮下組織，且數(shù)量較少；穴區(qū)皮下組織中有少量CGRP呈陽性表達(dá)；5-HT在真皮層和皮下組織均有陽性表達(dá)；HA主要分布在皮下組織；5-HT和HA常與肥大細(xì)胞呈現(xiàn)共同表達(dá)；腹部穴區(qū)SP的表達(dá)極少。如圖2所示。圖2 正常大鼠“中脘穴”與“關(guān)元穴”皮膚組織MC及相關(guān)化學(xué)物質(zhì)的表達(dá)注：圖中箭頭所指為MC（綠色），方框中是與MC相關(guān)的CGRP、5-HT、HA的陽性表達(dá)（紅

少；穴區(qū)皮下組織中有少量CGRP呈陽性表達(dá)；5-HT在真皮層和皮下組織均有陽性表達(dá)；HA主要分布在皮下組織；5-HT和HA常與肥大細(xì)胞呈現(xiàn)共同表達(dá)；腹部穴區(qū)SP的表達(dá)極少。如圖2所示。圖2 正常大鼠“中脘穴”與“關(guān)元穴”皮膚組織MC及相關(guān)化學(xué)物質(zhì)的表達(dá)注：圖中箭頭所指為MC（綠色），，方框中是與MC相關(guān)的CGRP、5-HT、HA的陽性表達(dá)（紅
【學(xué)位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R245.97;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2650710