發(fā)布時間：2019-10-13 03:34

【摘要】：目的:研究二至天癸顆粒對卵泡顆粒細(xì)胞Fas通路的影響,分析Fas通路關(guān)鍵蛋白表達水平與妊娠結(jié)局的關(guān)系,探討二至天癸顆粒改善妊娠結(jié)局可能的分子機制,為卵母細(xì)胞質(zhì)量評估及胚胎選擇提供可能的分子指標(biāo)。方法:一、臨床研究:選取行IVF-ET的腎氣虛證不孕患者72例,隨機分成治療組36例(二至天癸顆粒+IVF)和對照組36例(安慰劑顆粒+IVF)。采用標(biāo)準(zhǔn)長方案進行控制性超排卵(COH),治療組加用二至天癸顆粒、對照組加用安慰劑顆粒。取卵日收集卵泡GC,采用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測顆粒細(xì)胞Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3蛋白的含量,實時熒光定量PCR測定m RNA含量,記錄腎虛證候積分、獲卵數(shù)、優(yōu)質(zhì)卵率、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、生化妊娠率和臨床妊娠率,觀察組間差異。二、動物實驗:7周齡雌性昆明小鼠180只,隨機數(shù)字表法分三組,每組各60只:中藥組(二至天癸顆粒加HMG超排卵)、對照組(HMG超排卵)、空白組。第一部分:每組各30只取卵及顆粒細(xì)胞,Western Blot檢測顆粒細(xì)胞Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3蛋白的含量,RTPCR測定m RNA含量。記錄獲卵數(shù)、MⅡ卵數(shù)、計算優(yōu)質(zhì)卵率(MⅡ卵數(shù)/獲卵數(shù)),熒光素酶法檢測每只小鼠MⅡ卵ATP,計算單卵平均ATP含量,觀察組間差異。第二部分:每組剩余30只取胚,記錄胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、計算優(yōu)質(zhì)胚胎率,熒光素酶法檢測每只小鼠所獲胚胎ATP,計算單胚平均ATP含量,觀察組間差異。分別將4個蛋白及m RNA含量與MⅡ卵平均ATP、和胚胎平均ATP進行相關(guān)性分析。結(jié)果:一、臨床研究:(一)治療組治療后腎氣虛癥狀明顯改善,腎虛證候積分明顯低于治療前(P0.01)及對照組(P0.01),治療前后腎氣虛證候積分差值明顯高于對照組(P0.01)。(二)治療組超排卵Gn用量及天數(shù)小于對照組(P0.05);HCG日E2/獲卵數(shù)高于對照組(P0.05)、P低于對照組(P0.05),LH無明顯差異(p0.05);優(yōu)卵數(shù)、優(yōu)質(zhì)卵率、優(yōu)質(zhì)胚胎率均高于對照組(P0.05);獲卵數(shù)和受精率無明顯差異(p0.05)。(三)治療組和對照組生化妊娠率無明顯差異(p0.05);治療組臨床妊娠率高于對照組(P0.05)。(四)兩組患者GC中均有Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3的m RNA和蛋白表達,且在治療組的表達均低于對照組(P0.05);與未妊娠者相比,妊娠者GCFas L、Fas、Caspase8、Caspase3的m RNA和蛋白表達均較低(P0.05)。二、動物實驗:(一)三組獲卵數(shù)和MⅡ卵數(shù)比較,結(jié)果均為中藥組對照組空白組,但中藥組和對照組之間無明顯差異(p0.05),兩組與空白組之間均有顯著差異(p0.01);三組優(yōu)質(zhì)卵率和MII卵平均ATP含量比較,結(jié)果均為中藥組空白組對照組,且中藥組明顯高于對照組(P0.05),但中藥組和空白組相比、空白組和對照組相比均無明顯差異(p0.05)。(二)三組胚胎數(shù)比較,中藥組對照組空白組,但對照組和空白組相比無明顯差異(p0.05);優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)中藥組空白組對照組,但中藥組和空白組相比、空白組和對照組相比均無明顯差異(p0.05);優(yōu)質(zhì)胚胎率和胚胎平均ATP空白組和中藥組之間無明顯差異(p0.05),兩組均明顯高于對照組(p0.01)。(三)中藥組Fas和Caspase3蛋白和m RNA的表達均低于對照組(P0.05),與空白組無明顯差異(p0.05);Fas L蛋白和m RNA在三組的表達均無明顯差異(p0.05);中藥組Caspase8m RNA與對照組之間無明顯差異,但是Caspase8蛋白的表達低于對照組。(四)Caspase3蛋白和m RNA的表達與MII卵平均ATP含量和胚胎平均ATP含量均呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:一、二至天癸顆粒不影響誘導(dǎo)排卵的療效,可明顯改善患者腎虛癥狀,改善HCG日激素水平,提高優(yōu)質(zhì)卵率、優(yōu)質(zhì)胚胎率,進而提高臨床妊娠率。二、二至天癸顆粒可以下調(diào)顆粒細(xì)胞Fas通路關(guān)鍵蛋白Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3及m RNA的表達量,推測為其改善卵細(xì)胞質(zhì)量的可能機制之一。三、二至天癸顆粒可以提高小鼠卵細(xì)胞和胚胎線粒體活性,推測為其提高卵細(xì)胞質(zhì)量和胚胎質(zhì)量的可能機制之一。四、小鼠顆粒細(xì)胞Caspase3的表達與卵細(xì)胞和胚胎質(zhì)量呈負(fù)相關(guān),推測可作為評價卵細(xì)胞和胚胎質(zhì)量的客觀指標(biāo)之一。
【圖文】：

圖 1 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 mRNA 表達的比較表 10 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 蛋白的相對表達量比較指標(biāo) 治療組 對照組 t pFasL 0.74±0.19 0.85±0.07 -3.050 0.003（P<0.01）Fas 0.80±0.07 0.84±0.06 -2.484 0.015（P<0.05）Caspase8 0.73±0.15 0.79±0.08 -2.005 0.049（P<0.05）Caspase3 0.76±0.06 0.79±0.07 -2.263 0.027（P<0.05）

圖 1 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 mRNA 表達的比較表 10 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 蛋白的相對表達量比較指標(biāo) 治療組 對照組 t pFasL 0.74±0.19 0.85±0.07 -3.050 0.003（P<0.01）
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R271.9

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本文編號：2548448