【摘要】：目的:研究二至天癸顆粒對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞Fas通路的影響,分析Fas通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平與妊娠結(jié)局的關(guān)系,探討二至天癸顆粒改善妊娠結(jié)局可能的分子機(jī)制,為卵母細(xì)胞質(zhì)量評(píng)估及胚胎選擇提供可能的分子指標(biāo)。方法:一、臨床研究:選取行IVF-ET的腎氣虛證不孕患者72例,隨機(jī)分成治療組36例(二至天癸顆粒+IVF)和對(duì)照組36例(安慰劑顆粒+IVF)。采用標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)方案進(jìn)行控制性超排卵(COH),治療組加用二至天癸顆粒、對(duì)照組加用安慰劑顆粒。取卵日收集卵泡GC,采用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測(cè)顆粒細(xì)胞Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3蛋白的含量,實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定m RNA含量,記錄腎虛證候積分、獲卵數(shù)、優(yōu)質(zhì)卵率、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、生化妊娠率和臨床妊娠率,觀察組間差異。二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn):7周齡雌性昆明小鼠180只,隨機(jī)數(shù)字表法分三組,每組各60只:中藥組(二至天癸顆粒加HMG超排卵)、對(duì)照組(HMG超排卵)、空白組。第一部分:每組各30只取卵及顆粒細(xì)胞,Western Blot檢測(cè)顆粒細(xì)胞Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3蛋白的含量,RTPCR測(cè)定m RNA含量。記錄獲卵數(shù)、MⅡ卵數(shù)、計(jì)算優(yōu)質(zhì)卵率(MⅡ卵數(shù)/獲卵數(shù)),熒光素酶法檢測(cè)每只小鼠MⅡ卵ATP,計(jì)算單卵平均ATP含量,觀察組間差異。第二部分:每組剩余30只取胚,記錄胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、計(jì)算優(yōu)質(zhì)胚胎率,熒光素酶法檢測(cè)每只小鼠所獲胚胎ATP,計(jì)算單胚平均ATP含量,觀察組間差異。分別將4個(gè)蛋白及m RNA含量與MⅡ卵平均ATP、和胚胎平均ATP進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果:一、臨床研究:(一)治療組治療后腎氣虛癥狀明顯改善,腎虛證候積分明顯低于治療前(P0.01)及對(duì)照組(P0.01),治療前后腎氣虛證候積分差值明顯高于對(duì)照組(P0.01)。(二)治療組超排卵Gn用量及天數(shù)小于對(duì)照組(P0.05);HCG日E2/獲卵數(shù)高于對(duì)照組(P0.05)、P低于對(duì)照組(P0.05),LH無明顯差異(p0.05);優(yōu)卵數(shù)、優(yōu)質(zhì)卵率、優(yōu)質(zhì)胚胎率均高于對(duì)照組(P0.05);獲卵數(shù)和受精率無明顯差異(p0.05)。(三)治療組和對(duì)照組生化妊娠率無明顯差異(p0.05);治療組臨床妊娠率高于對(duì)照組(P0.05)。(四)兩組患者GC中均有Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3的m RNA和蛋白表達(dá),且在治療組的表達(dá)均低于對(duì)照組(P0.05);與未妊娠者相比,妊娠者GCFas L、Fas、Caspase8、Caspase3的m RNA和蛋白表達(dá)均較低(P0.05)。二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn):(一)三組獲卵數(shù)和MⅡ卵數(shù)比較,結(jié)果均為中藥組對(duì)照組空白組,但中藥組和對(duì)照組之間無明顯差異(p0.05),兩組與空白組之間均有顯著差異(p0.01);三組優(yōu)質(zhì)卵率和MII卵平均ATP含量比較,結(jié)果均為中藥組空白組對(duì)照組,且中藥組明顯高于對(duì)照組(P0.05),但中藥組和空白組相比、空白組和對(duì)照組相比均無明顯差異(p0.05)。(二)三組胚胎數(shù)比較,中藥組對(duì)照組空白組,但對(duì)照組和空白組相比無明顯差異(p0.05);優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)中藥組空白組對(duì)照組,但中藥組和空白組相比、空白組和對(duì)照組相比均無明顯差異(p0.05);優(yōu)質(zhì)胚胎率和胚胎平均ATP空白組和中藥組之間無明顯差異(p0.05),兩組均明顯高于對(duì)照組(p0.01)。(三)中藥組Fas和Caspase3蛋白和m RNA的表達(dá)均低于對(duì)照組(P0.05),與空白組無明顯差異(p0.05);Fas L蛋白和m RNA在三組的表達(dá)均無明顯差異(p0.05);中藥組Caspase8m RNA與對(duì)照組之間無明顯差異,但是Caspase8蛋白的表達(dá)低于對(duì)照組。(四)Caspase3蛋白和m RNA的表達(dá)與MII卵平均ATP含量和胚胎平均ATP含量均呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:一、二至天癸顆粒不影響誘導(dǎo)排卵的療效,可明顯改善患者腎虛癥狀,改善HCG日激素水平,提高優(yōu)質(zhì)卵率、優(yōu)質(zhì)胚胎率,進(jìn)而提高臨床妊娠率。二、二至天癸顆粒可以下調(diào)顆粒細(xì)胞Fas通路關(guān)鍵蛋白Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3及m RNA的表達(dá)量,推測(cè)為其改善卵細(xì)胞質(zhì)量的可能機(jī)制之一。三、二至天癸顆�？梢蕴岣咝∈舐鸭�(xì)胞和胚胎線粒體活性,推測(cè)為其提高卵細(xì)胞質(zhì)量和胚胎質(zhì)量的可能機(jī)制之一。四、小鼠顆粒細(xì)胞Caspase3的表達(dá)與卵細(xì)胞和胚胎質(zhì)量呈負(fù)相關(guān),推測(cè)可作為評(píng)價(jià)卵細(xì)胞和胚胎質(zhì)量的客觀指標(biāo)之一。
【圖文】：

圖 1 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 mRNA 表達(dá)的比較表 10 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 蛋白的相對(duì)表達(dá)量比較指標(biāo) 治療組 對(duì)照組 t pFasL 0.74±0.19 0.85±0.07 -3.050 0.003（P<0.01）Fas 0.80±0.07 0.84±0.06 -2.484 0.015（P<0.05）Caspase8 0.73±0.15 0.79±0.08 -2.005 0.049（P<0.05）Caspase3 0.76±0.06 0.79±0.07 -2.263 0.027（P<0.05）

圖 1 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 mRNA 表達(dá)的比較表 10 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 蛋白的相對(duì)表達(dá)量比較指標(biāo) 治療組 對(duì)照組 t pFasL 0.74±0.19 0.85±0.07 -3.050 0.003（P<0.01）
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R271.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 連方,孫振高,張建偉,張寧,劉延荷,穆琳,張鵬;二至天癸方對(duì)小鼠卵細(xì)胞質(zhì)量影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2004年07期

2 董瑞霞;唐書生;;二至功血湯治療青春期功能失調(diào)性子宮出血臨床療效[J];中醫(yī)學(xué)報(bào);2010年06期

3 黃仲陽;黃昕;;“氣交變”之二至[J];家庭中醫(yī)藥;2008年06期

4 鄭里翔;張玉仁;鄧科穗;趙益;朱衛(wèi)豐;劉紅寧;;二至湯對(duì)陰虛陽虛荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響[J];陜西中醫(yī);2008年12期

5 王澤森;;習(xí)慣影響成敗[J];中國(guó)食品藥品監(jiān)管;2011年03期

6 張春敏;;自擬二至四草湯治療更年期功能失調(diào)性子宮出血臨床觀察[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2014年03期

7 蘇林;幫助孩子克服辦事拖延[J];心理與健康;1998年02期

8 張孟林;;加味二至湯應(yīng)用體會(huì)[J];陜西中醫(yī);1980年04期

9 朱曉薇;不同提取方法對(duì)二至提取液中總多糖及齊墩果酸的影響[J];中成藥;1996年06期

10 劉洪峰;郭長(zhǎng)江;;四物二至湯加減治療眩暈68例[J];中醫(yī)臨床研究;2011年13期

相關(guān)會(huì)議論文 前4條

1 郭穎;連方;;二至天癸顆粒對(duì)年老小鼠卵母細(xì)胞質(zhì)量及早期胚胎發(fā)育潛能的影響[A];2010全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合圍絕經(jīng)期專題學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2010年

2 黎慧賢;謝清蘭;;“無煙家庭·我做得到!”動(dòng)員市民建立無煙生活環(huán)境的社會(huì)平臺(tái)[A];第15屆全國(guó)控制吸煙學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

3 王琳;連方;馬鳳梅;劉延荷;孫振高;張艷萍;滕懷香;;二至天癸顆粒含藥血清對(duì)初老小鼠卵巢顆粒細(xì)胞分泌功能的影響[A];第九次全國(guó)中醫(yī)婦科學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2009年

4 王琳;連方;馬鳳梅;劉延荷;孫振高;張艷萍;滕懷香;;二至天癸顆粒含藥血清對(duì)初老小鼠卵巢顆粒細(xì)胞分泌功能的影響[A];全國(guó)第八次中醫(yī)婦科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前6條

1 天津南開 韓德承;二至二妙皆為丸，一字之差功效異[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

2 連方；孫振高；張建偉;二至天癸方可提高卵細(xì)胞質(zhì)量[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

3 云南副主任醫(yī)師 傅淑芳;治軟組織損傷驗(yàn)方[N];家庭醫(yī)生報(bào);2004年

4 王巖;目前在南方可重點(diǎn)種植的藥材及投資效益分析[N];中國(guó)特產(chǎn)報(bào);2001年

5 記者 楊世智;我省首季氣溫偏低降雨偏少[N];甘肅日?qǐng)?bào);2011年

6 ;外籍高層次人才入境居留更便利[N];人民公安報(bào);2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 李婷婷;二至天癸顆粒對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞Fas通路的影響[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 王琳;行IVF-ET高齡婦女腎氣虛的機(jī)理探討與二至天癸顆粒療效評(píng)估[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前8條

1 郭穎;二至天癸顆粒對(duì)衰老卵母細(xì)胞質(zhì)量及早期胚胎發(fā)育潛能的影響[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2010年

2 劉佳;歸參二至片的藥學(xué)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

3 王紅霞;加味二至煎治療便秘型腸易激綜合征的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

4 孫振高;二至天癸方提高體外受精—胚胎移植卵細(xì)胞質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2003年

5 鄭軼芬;二至升板方治療陰虛血瘀證難治性ITP的臨床觀察[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2014年

6 穆琳;二至天癸方提高卵細(xì)胞質(zhì)量與顆粒細(xì)胞IGF-1R m RNA表達(dá)量相關(guān)性研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2004年

7 王蘇霞;加味二至煎治療便秘型腸易激綜合征作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

8 劉新苑;二至天癸顆粒對(duì)LPD患者著床期子宮內(nèi)膜VEGF影響的研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：2548448