【摘要】：動脈粥樣硬化(Atherosclerosis AS)是心腦血管疾病的共同病理基礎(chǔ),內(nèi)皮細胞功能障礙則是AS的始動因素并貫穿全過程；血小板作為血液成分之一,通過活化后釋放諸多生物活性物質(zhì)或膜糖蛋白,介導(dǎo)血小板與內(nèi)皮細胞相互作用,參與到AS免疫、炎癥、血栓形成等病理階段。導(dǎo)師傳承《內(nèi)經(jīng)》“血脈”理論,系統(tǒng)構(gòu)建脈絡(luò)學(xué)說,提出“脈絡(luò)一血管系統(tǒng)病”概念,并提出其核心理論一營衛(wèi)理論,AS及其相關(guān)心腦血管病即屬于脈絡(luò)病變范疇�；跔I氣與血管內(nèi)皮相關(guān)性,血液成分與營血相關(guān)性,本研究探討血小板活化對內(nèi)皮細胞損傷致AS的影響及通絡(luò)代表性藥物通心絡(luò)膠囊的干預(yù)作用,繼而豐富發(fā)展脈絡(luò)學(xué)說指導(dǎo)AS防治的科學(xué)內(nèi)涵。目的：以脈絡(luò)學(xué)說營衛(wèi)理論為指導(dǎo),闡釋營血病變對脈絡(luò)一血管系統(tǒng)功能結(jié)構(gòu)影響在AS發(fā)病中的作用及通心絡(luò)干預(yù)效應(yīng)。以“營血”中血小板為研究對象,采用在體動物和離體細胞實驗,研究血小板活化CD40L/CD40對內(nèi)皮細胞損傷的影響,同時探討通絡(luò)代表藥物通心絡(luò)對血小板活化誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞損傷的保護作用機制。方法：(1)動物實驗：70只新西蘭大白兔隨機分為正常組、模型組、通心絡(luò)低、中、高劑量組、阿托伐他汀組和阿司匹林組,每組10只。除正常組外,其余各組均喂飼高脂飼料,用藥組在給予高脂飼料的同時給予相應(yīng)藥物灌胃,每日1次,連續(xù)灌胃12周。實驗結(jié)束時留取主動脈標本及血清進行指標檢測。圍繞血管內(nèi)皮相關(guān)指標：采用全自動生化分析儀檢測血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平；ELISA法檢測腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)含量；油紅O染色和HE染色觀察主動脈脂質(zhì)沉積、內(nèi)膜病理改變。圍繞血小板結(jié)構(gòu)和功能指標：采用透射電鏡觀察血小板超微結(jié)構(gòu)；血細胞分析儀檢測血小板參數(shù)變化；流式細胞儀觀察血小板胞內(nèi)Ca2+變化；ELISA法檢測血小板分泌血小板因子4(PF4)、可溶性CD62P (sCD62P)表達變化；ELISA法檢測0、2、4、8、12周兔血清可溶性CD40L (sCD40L)表達變化；免疫組化定位檢測主動脈CD40L、CD40表達情況；Western blot檢測主動脈CD40L、CD40、caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表達水平,RT-PCR檢測主動脈CD40L、CD40mRNA:表達變化。(2)細胞實驗：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC),采集健康人靜脈血分離血小板,①制備靜息血小板懸液、活化血小板懸液、通心絡(luò)血小板懸液,分別與內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)。采用動態(tài)活細胞成像系統(tǒng)觀察血小板聚集、粘附及釋放過程,觀察血小板對內(nèi)皮細胞凋亡與增殖的影響,同時觀察內(nèi)皮細胞線粒體膜電位動態(tài)變化過程；流式細胞儀檢測血小板膜CD40L、CD62P表達變化；ELISA法檢測血小板分泌sCD40L表達變化。②為探討CD40L/CD40在活化血小板損傷內(nèi)皮細胞中的作用,采用CD40蟬克隆抗體阻斷活化血小板上清液中CD40L與內(nèi)皮細胞CD40結(jié)合,實驗分為正常組、ADP陰性對照組,靜息血小板組、活化血小板組、通心絡(luò)組、CD40L配體單克隆抗體組,采用MTS法檢測內(nèi)皮細胞生存活性改變,熒光法檢測內(nèi)皮細胞線粒體膜電位改變。③為驗證CD40璉誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞凋亡中的作用,采用重組可溶性人CD40L (rshCD40L)建立內(nèi)皮細胞損傷模型,實驗分為正常組、rshCD40L模型組、通心絡(luò)低、中、高劑量組,采用Western blot檢測內(nèi)皮細胞ERK1/2相關(guān)信號通路ERK1/2、p-ERK1/2、CyclinD、C-Myc、Cytc、Bax、Bcl-2、Caspase3蛋白表達變化。④為探討通心絡(luò)抑制CD40L誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞凋亡的可能機制,采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默ERK1/2基因表達,實驗分為正常組、siRNA對照組、siRNA組、通心絡(luò)組、通心絡(luò)+siRNA組,采用Western blot檢測內(nèi)皮細胞ERK1/2相關(guān)信號通路p-ERK1/2、CyclinD、C-Myc、Cytc蛋白表達變化。結(jié)果：(1)動物實驗：①高脂喂養(yǎng)建立兔AS模型中血管內(nèi)膜增厚,血清血脂TC、TG、LDL-C升高,炎癥因子TNF-α、IL-1β、hs-CRP表達增多,主動脈內(nèi)皮細胞caspase3、Bax蛋白表達增多,Bcl-2蛋白表達降低。通心絡(luò)能夠降低血脂水平,減少TNF-α、IL-1β、hs-CRP含量,抑制內(nèi)膜增生,同時降低caspase3、Bax蛋白表達,升高Bcl-2蛋白表達(P0.05R0.01)。②AS模型中血小板結(jié)構(gòu)改變,分泌sCD40L、PF4、sCD62P明顯增多,細胞內(nèi)鈣離子水平增加。免疫組化、Western blot及RT-PCR結(jié)果顯示主動脈CD40L、CD40蛋白和基因表達增強。通心絡(luò)明顯改善血小板結(jié)構(gòu),降低血小板分泌sCD40L、PF4、sCD62P水平,同時降低胞漿內(nèi)鈣離子含量,并可下調(diào)CD40L、CD40蛋白和基因表達(P＜0.05,P＜0.01)。(2)細胞實驗：①血小板活化后發(fā)生聚集、粘附和釋放反應(yīng),CD62P、CD40L、sCD40L水平表達增高,降低內(nèi)皮細胞NO水平、升高ET-1、表達,同時降低內(nèi)皮細胞生存活性,促進線粒體膜電位下降(P0.05,P0.01)。②血小板CD40L/CD40軸通過抑制ERK1/2活性在活化血小板誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞線粒體凋亡途徑中發(fā)揮重要作用,增加Cytc、caspase3、Bax蛋白表達,降低CyclinD、Bcl-2蛋白表達(P0.05,0.01)③通心絡(luò)抑帶CD62P、CD40L、sCD40L表達,同時降低活化血小板與內(nèi)皮細胞的粘附能力。通心絡(luò)可能通過激活ERK1/2信號相關(guān)通路抑制活化血小板CD40L/CD40誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞凋亡(P0.05,P0.01)。結(jié)論：①通心絡(luò)對活化血小板誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞損傷具有一定的治療及保護作用,可能與其抑制血小板活化,減少血小板與內(nèi)皮細胞粘附能力,下調(diào)CD40L/CD40活性有關(guān)。②通心絡(luò)抑常CD40L/CD40誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞凋亡,其機制可能與激活ERK1/2活性、減少Cytc、C-Myc蛋白表達,上調(diào)CyclinD蛋白表達有關(guān)。
【圖文】：

各組主動脈CD40L表達情況

逡逑結(jié)果逡逑１．內(nèi)皮細胞調(diào)亡動態(tài)觀察逡逑利用活細胞成像系統(tǒng)觀察血小板活化對內(nèi)皮細胞調(diào)亡影響的動態(tài)過程，結(jié)果示：靜息逡逑血小板上清液作用于內(nèi)皮細胞連續(xù)觀察１化，內(nèi)皮細胞細胞核完整，邊緣清晰，夷光強度逡逑均一彌散，并可看到細胞分裂增殖（呁色為細胞核）。將經(jīng)ＡＤＰ活化處理的血小板上清液逡逑作用于內(nèi)皮細胞同樣連續(xù)觀察ｌＯｈ，則見內(nèi)皮細胞核濃染、固縮和邊緣化，細胞核體積變逡逑小，，核碎裂，出現(xiàn)調(diào)亡小體。將通必絡(luò)預(yù)處理的血小板上清液作用于內(nèi)皮細胞觀察１化，逡逑與活化血小板組比較，可觀察到通屯、絡(luò)能明顯促進細胞核完整，并促進內(nèi)皮細胞分裂。（圖逡逑５－１）逡逑圖５－１血小板對內(nèi)皮細胞調(diào)亡及增值動態(tài)過程觀察逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 丁茹,吳宗貴,潘曉明,張路,甄奕;通心絡(luò)對急性冠狀動脈綜合征病人血管細胞黏附分子-1水平影響的研究[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2005年05期

2 裴桃枝;連建學(xué);;通心絡(luò)治療無癥狀性心肌缺血82例[J];陜西中醫(yī);2006年05期

3 楊大為;閆瑞萍;陳景麗;;通心絡(luò)治療肺心病療效觀察[J];臨床肺科雜志;2006年04期

4 王忠東;鄭家善;;通心絡(luò)治療椎-基底動脈供血不足性眩暈療效觀察[J];中國當代醫(yī)藥;2009年11期

5 張波,王輝,牛建海,宋春林;通心絡(luò)治療冠心病無癥狀心肌缺血的臨床觀察[J];中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2000年12期

6 王琳;急性冠狀動脈綜合征早期應(yīng)用通心絡(luò)的療效觀察[J];衛(wèi)生職業(yè)教育;2005年14期

7 賈高鎖;中醫(yī)辨證及通心絡(luò)治療血栓閉塞性脈管炎68例療效觀察[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2005年07期

8 王少萍,高煥民,柳耀泉;通心絡(luò)改善心血管神經(jīng)官能癥患者抑郁狀態(tài)的臨床研究[J];臨床薈萃;2005年16期

9 尹國幸,楊杰;通心絡(luò)治療糖尿病性末梢神經(jīng)炎55例臨床觀察[J];時珍國醫(yī)國藥;2005年11期

10 石海莉,王子超,孫漾麗;通心絡(luò)對急性冠脈綜合征患者的療效及安全性研究[J];心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 吳宗貴;張路;;通心絡(luò)對急性冠狀動脈綜合征患者血清血管內(nèi)皮生長因子水平影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病分會第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2004年

2 陳穎敏;徐瑾;臧敏華;丁泓毅;謝秀蘭;徐依敏;王彬堯;沈惠風(fēng);;急性冠脈綜合征早期通心絡(luò)治療對血清sCD40L的影響[A];第七次全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

3 王雯霞;胡新央;虞敏佳;王建安;;通心絡(luò)促進骨髓間充質(zhì)干細胞血管新生和遷移能力的研究[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

4 尤士杰;楊躍進;陳可冀;高潤霖;吳永健;張健;荊志誠;白東峰;王燕武;陳紀林;;通心絡(luò)對急性心肌梗死再灌注后心肌和微血管的保護性研究[A];全國中西醫(yī)結(jié)合治療心血管病及血瘀證高級論壇和研修班論文匯編[C];2004年

5 張海濤;楊躍進;吳以嶺;程宇彤;康晟;趙京林;孟亮;田毅;張燕婉;葉玨;孟憲敏;;通心絡(luò)預(yù)給藥2h對豬急性心肌梗死再灌注后心肌微血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)完整和無再流的保護作用[A];首屆中西醫(yī)血管病學(xué)大會論文匯編[C];2013年

6 陳紅;楊士偉;任景怡;徐成斌;武蓓;;通心絡(luò)改善2型糖尿病患者血管內(nèi)皮功能及相關(guān)機理的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

7 滕書文;水瑞英;;通心絡(luò)聯(lián)合六味地黃丸治療糖尿病性末梢神經(jīng)炎療效觀察[A];第三屆全國中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2000年

8 夏玉葉;盛雨晨;章蘭芳;閔fy;;通心絡(luò)對血管閉塞性脈管炎的治療研究[A];中國制藥工業(yè)藥理學(xué)會20周年學(xué)術(shù)會議論文集[C];2002年

9 常麗萍;張秋燕;韓建科;魏聰;賈振華;;通心絡(luò)超微粉對缺血性腦卒中大鼠微血管新生影響的實驗研究[A];首屆中西醫(yī)血管病學(xué)大會論文匯編[C];2013年

10 紀祥輝;;通心絡(luò)治療糖尿病合并無癥狀性心肌缺血42例療效觀察[A];首屆中西醫(yī)血管病學(xué)大會論文匯編[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 通訊員 楊叁平;中藥通心絡(luò)獲國際認可[N];科技日報;2011年

2 ;以嶺通心絡(luò)開辟心腦血管病防治新途徑[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

3 易曉;依靠科技創(chuàng)新打造超微粉通心絡(luò)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

4 陳國東;超微粉技術(shù)成就通心絡(luò)優(yōu)秀品質(zhì)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

5 王志芳　曾荇 曾燦榮 鄭華 滕中華 馬立勤;通心絡(luò)治療冠心病研究進展[N];中國中醫(yī)藥報;2010年

6 記者 任壯;通心絡(luò)保護血管內(nèi)皮作用論文在美雜志發(fā)表[N];中國中醫(yī)藥報;2011年

7 記者 熊昌彪;通心絡(luò)保護內(nèi)皮抑制動脈硬化獲國際認可[N];中國醫(yī)藥報;2011年

8 ;通心絡(luò)膠囊有效保護血管內(nèi)皮功能[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

9 本報記者 任壯;通絡(luò)中藥研究成果蜚聲海外[N];中國中醫(yī)藥報;2012年

10 沈興;中成藥“通心絡(luò)”治冠心病有重大突破[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王思穎;通心絡(luò)對大鼠心肌梗死缺血區(qū)微血管新生及纖維化的作用機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 劉紅利;以脈絡(luò)學(xué)說為指導(dǎo)探討內(nèi)皮細胞損傷對AS發(fā)病影響及通心絡(luò)干預(yù)作用研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 游敏生;通心絡(luò)抗急性心肌梗死后心肌炎性反應(yīng)的作用及機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

4 張若楠;通心絡(luò)抑制血管內(nèi)膜增生的作用和機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

5 崔賀賀;通心絡(luò)對心臟微血管內(nèi)皮缺血再灌注損傷的保護機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

6 張子新;通心絡(luò)抑制家兔血管成形術(shù)后內(nèi)膜增殖及血管重構(gòu)的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2002年

7 王洪巨;血管內(nèi)皮功能與動脈粥樣硬化的關(guān)系及通心絡(luò)干預(yù)作用的研究[D];浙江大學(xué);2004年

8 郭勇英;通心絡(luò)聯(lián)合外周血間充質(zhì)干細胞移植治療糖尿病足的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 吳正國;通心絡(luò)對實驗性腦缺血保護作用的理論探討和機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

10 劉美之;動脈粥樣硬化早期管壁微血管新生的相關(guān)機制及通絡(luò)干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 宋莉莉;通心絡(luò)改善缺氧引起內(nèi)皮細胞損傷的作用機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 金李雙;通心絡(luò)調(diào)節(jié)急性缺氧誘導(dǎo)的腸系膜微血管滲出及其分子機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張宇;通心絡(luò)改善缺氧性腦損傷的作用機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 史亦男;通心絡(luò)對糖尿病合并冠心病氧化應(yīng)激的影響[D];承德醫(yī)學(xué)院;2015年

5 王國良;通心絡(luò)干預(yù)動脈粥樣硬化炎癥的研究[D];河南大學(xué);2015年

6 孫善美;通心絡(luò)和他汀類藥物治療頸動脈粥樣硬化斑塊療效的Meta分析[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 霍巖;通心絡(luò)及聯(lián)合他汀類藥物治療頸動脈斑塊的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 鄭翠影;通心絡(luò)改善慢性缺氧誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞的損害及其作用機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

9 董霄;通心絡(luò)對冠心病患者內(nèi)皮細胞功能的研究[D];大理學(xué)院;2012年

10 楊貴志;通心絡(luò)對2型糖尿病患者的動脈粥樣硬化病變的影響研究[D];青島大學(xué);2007年

本文編號：2546254