發(fā)布時間：2019-05-13 21:42

【摘要】：實驗一痰濕體質(zhì)DNA甲基似表達譜研究目的：1、在全基因組范圍內(nèi)比較痰濕體質(zhì)和平和體質(zhì)外周血單個核細胞中DNA甲基化表達水平,進行DNA甲基化表達譜構(gòu)建。2、篩選痰濕體質(zhì)特異的DNA甲基化位點,為痰濕體質(zhì)的微觀辨識提供生物學(xué)依據(jù),探討DNA甲基化在痰濕體質(zhì)形成中的潛在作用。方法：1、通過收集痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)8例和平和體質(zhì)健康狀態(tài)4例外周血樣本,分離單個核細胞提取DNA進行Illumina Human Methylation 450K BeadChip高通量基因芯片檢測。2、通過對表達譜數(shù)據(jù)進行分析,篩選出差異表達DNA甲基化位點。3、對差異表達位點所注釋到的基因進行功能富集分析。結(jié)果：1、兩組樣本間性別、年齡、BMI等基本情況無統(tǒng)計學(xué)差異。2、痰濕體質(zhì)與平和體質(zhì)共篩選出288個DNA甲基化差異位點,包括187個高甲基化位點和101個低甲基化位點。這些差異位點可注釋到256個基因,其中有169個高甲基化基因和87個低甲基化基因。3、Δβ差異最大位點為cg21498547(Δβ=0.495)被注釋到基因DLGAP2經(jīng)1PA注釋顯示與非胰島素依賴型糖尿病相關(guān)。另外通過曼哈頓圖分析我們篩選出了差異表達位點(p1e-04),依據(jù)△β進行排序,差異最明顯的CpG位點是cgl 7796323,被注釋到基因N4BP3。另外在總共288個差異位點中cg22151-4和cg18473521兩個位點都被注釋到基因HOXC4,文獻報道顯示HOXC4基因與脂肪積累和肥胖具有相關(guān)性。4、IPA分析揭示高甲基化差異基因如B4GALNT1, ST6GALNAC5, DHCR24, MVK, STARD3, PRKCZ與脂類代謝密切相關(guān),另外IPA分析顯示高甲基化差異基因的分子和細胞功能主要與免疫和炎癥反應(yīng)性疾病相關(guān),與前期研究相符合。結(jié)論：1、痰濕體質(zhì)與平和體質(zhì)在全基因組層面存在系統(tǒng)性的DNA甲基化表達譜差異。2、在性別、年齡、BMI等基本情況無統(tǒng)計學(xué)差異并且兩組樣本皆為未病狀態(tài)下,發(fā)現(xiàn)痰濕體質(zhì)存在DNA甲基化表達差異,證明痰濕體質(zhì)是有別于肥胖的-種獨立致病因素。3、痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)下即存在著DNA甲基化層面的異常改變,并且注釋到的基因可富集到代謝相關(guān)的分子通路,顯示痰濕體質(zhì)具有易發(fā)代謝性疾病的分子基礎(chǔ)。4、本研究初步構(gòu)建了痰濕體質(zhì)DNA甲基化表達譜,并篩選了差異表達位點,為后續(xù)的痰濕體質(zhì)微觀辨識和分子機制研究奠定了基礎(chǔ)。實驗二痰濕體質(zhì)miRN A表達譜研究目的：1、在全基因組范圍內(nèi)比較痰濕體質(zhì)和平和體質(zhì)外周血單個核細胞中miRNA表達水平,進行]miRNA表達譜構(gòu)建。2、篩選痰濕體質(zhì)的差異表達]miRNA,為痰濕體質(zhì)的微觀辨識提供生物學(xué)依據(jù),探討miRNA在痰濕體質(zhì)形成中的潛在作用。方法：1、本實驗共招募平和體質(zhì)組健康狀態(tài)3例、痰濕體質(zhì)組未病狀態(tài)3例以及痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者4例共10名志愿者,空腹采集外周血,分離單個核細胞提取RNA進行Human miRNA OneArray(?)高通量基因芯片檢測。2、通過對miRNA表達譜數(shù)據(jù)進行分析,篩選出差異表達miRNA。3、對差異表達miRNA進行靶基因分析,并對靶基因進行功能富集分析。結(jié)果：1、本研究發(fā)現(xiàn)痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)與平和體質(zhì)健康組相比共有73個差異表達miRNA包括32個上調(diào)差異miRNA和41個下調(diào)差異]miRNA。另外痰濕體質(zhì)代謝綜合征組與痰濕體質(zhì)未病組比餃,共篩選出14個差異表達miRNA,包括8個上調(diào)差異miRNA和6個下調(diào)差異miRNA。2、痰濕體質(zhì)差異表達miRNA上調(diào)最顯著者為!hsa-miR-1228-5p,下調(diào)最顯著者為1isa-miR-363-5p,可為痰濕體質(zhì)分子辨識提供潛在生物標記物。3、通過對差異表達：miRNA的靶基因進行功能分析發(fā)現(xiàn),靶基因可富集到多個代謝相關(guān)的GO生物過程條目,以及多個KEGG腫瘤相關(guān)通路。結(jié)論：1、痰濕體質(zhì)與平和體質(zhì)在全基因組層面存在系統(tǒng)性的miRNA表達譜差異。2、痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)下即存在著miRNA層面的異常改變,并且差異miRNA的靶基因可富集到代謝相關(guān)的分子通路,顯示痰濕體質(zhì)具有易發(fā)代謝性疾病的分子基礎(chǔ)。3、本研究初步構(gòu)建了痰濕體質(zhì)miRNA表達譜,并篩選了差異表達miRNA,為后續(xù)的痰濕體質(zhì)微觀辨識和分子機制研究奠定了基礎(chǔ)。實驗三痰濕體質(zhì)IncRNA表達譜研究目的：1、在全基因組范圍內(nèi)比較痰體質(zhì)和平和體質(zhì)外周血單個核細胞中l(wèi)ncRNA表達水平,進行IncRNA表達譜構(gòu)建。2、篩選痰濕體質(zhì)的差異表達IncRNA,為痰濕體質(zhì)的微觀辨識提供生物學(xué)依據(jù),探討IncRNA在痰濕體質(zhì)形成中的潛在作用。3、通過比較痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)與痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者的lncRNA差異表達以及mRNA的功能富集,探討痰濕體質(zhì)與疾病在分子層面的區(qū)別。方法：1、本實驗共招募平和體質(zhì)組健康狀態(tài)8例、痰濕體質(zhì)組未病狀態(tài)10例以及痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者10例共28名志愿者,空腹采集外周血,分離單個核胞提取RNA進行Agilent Human LncRNA高通量基因芯片檢測,可同時檢測lncRNA和mRNA的表達。2、通過分析lncRNA和mRNA表達譜數(shù)據(jù),并對三組間數(shù)據(jù)進行兩兩比較,篩選各組差異表達的lncRNA和mRNA。3、對差異表達mRNA進行功能富集分析。結(jié)果：1、本研究發(fā)現(xiàn)痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)與平和體質(zhì)健康組相比共有597個差異表達lncRNA和311個差異表達mRNA。痰濕體質(zhì)代謝綜合征組與平和體質(zhì)健康組相比,篩選出705個差mRNA和2045個差異lncRNA。另外痰濕體質(zhì)代謝綜合征組與痰濕體質(zhì)未病組比較,篩選出275個差異mRNA和854個差異lncRNA。2、痰濕體質(zhì)差異表達lncRNA_蝴差異最顯著者為TCONS_00015846,下調(diào)最顯著者為NONHSAT009226。差異表達mRNA上調(diào)差異最顯著者為ZSWM5,下調(diào)最顯著者為IL1B,可為痰濕體質(zhì)分子辨識提供潛在生物標記物。3、通過對痰濕體質(zhì)差異表達mRNA的靶基因進行功能分析發(fā)現(xiàn),可富集到多個涉及糖脂代謝、炎癥反應(yīng)以及免疫應(yīng)答的分子通路。結(jié)論：1、痰濕體質(zhì)與平和體質(zhì)在全基因組層面存在系統(tǒng)性的lncRNA表達譜差異。2、痰濕體質(zhì)未病狀態(tài)下即存在著lncRNA層面的異常改變,并且差異mRNA可富集到代謝相關(guān)的分子通路,顯示痰濕體質(zhì)具有易發(fā)代謝燃的分子基礎(chǔ)。3、痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者與平和體質(zhì)健康人群相比表現(xiàn)出比痰濕體質(zhì)未病人群更大的差異,并且基因功能分析顯示痰濕體質(zhì)代謝綜合征患者組比痰濕體質(zhì)未病組相比,除了炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答和糖脂代謝等共同的病理特點以外,更具有較高的罹患心血管疾病的風險,顯示了痰濕體質(zhì)是介于健康與代謝性疾病的中間狀態(tài)。4、本研究初步構(gòu)建了痰濕體質(zhì)lncRNA表達譜,并篩選了差異表達lncRNA,為后續(xù)的痰濕體質(zhì)微觀辨識和分子機制研究奠定了基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R229
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本文編號：2476208