【摘要】：蒙藥材特穆日-敖日陽古為毛茛科鐵線蓮屬植物芹葉鐵線蓮(Clematis aethusifolia Turcz.)的干燥帶花葉枝條,是蒙醫(yī)常用的破痞去滯藥,《衛(wèi)生部藥品標準》(蒙藥分冊)收載。具破痞,燥“協(xié)日烏素”,止腐,消腫,止瀉之功效,常用于治療各種寒痞、食積、水腫、創(chuàng)瘍、痔瘡等,現(xiàn)代臨床用于治療各種腫瘤,包括癌癥。目的通過對蒙藥特穆日-敖日陽古抗腫瘤活性部位和成分的研究,尋找蒙藥破痞去滯功效與抗腫瘤活性之間的內在聯(lián)系,用現(xiàn)代醫(yī)學理論闡釋特穆日-敖日陽古破痞去滯功效的物質基礎及作用機理,為傳統(tǒng)蒙藥臨床合理用藥提供新思路。方法及結果(1)化學成分分離及鑒定:采用Sephadex LH-20、大孔樹脂、反相C_(18)柱色譜和制備高效液相等方法,對蒙藥特穆日-敖日陽古的醇提物進行分離純化,并運用1D,2D-NMR,HRMS等波譜分析法和文獻對照法鑒定化合物結構。從特穆日-敖日陽古的正丁醇及乙酸乙酯萃取層分離得到15個化合物,分別為(3R)-6,7,8-trimethoxy-2,3,4,5-tetrahydrobenz-1-oxepin-3-ol(1),3-O-p-coumaroyl-2-C-methyl-D-erythrono-1,4-lactone(2),4-O-caffeoyl-2-C-methyl-D-erythrono acid(3),4-O-Caffeoyl-2-C-methyl-D-erythrono-1,4-lactone(4),(-)-4-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy-2(5H)-furanone(5),咖啡酸(6),1-O-咖啡�；�-α-D-吡喃葡萄糖苷(7),苯基-a-L-呋喃阿拉伯糖(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(8),七葉內酯(9),東莨菪內酯(10),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(11),3'-氧甲基-芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(12),香草酸(13),原兒茶酸(14),正丁基-β-D-呋喃果糖苷(15)。(2)細胞毒活性檢測:采用CCK-8細胞染色法檢測課題組分離得到的從特穆日-敖日陽古中的38個單體化合物對5株常見人體實體瘤細胞系(人肺癌細胞系A549、人卵巢癌細胞系SK-OV-3、人黑色素瘤細胞系A-375、人神經(jīng)母細胞瘤細胞系SH-SY5Y和人結直腸腺癌細胞系HCT-15)的生長抑制作用。其中1-O-咖啡�；�-α-D-吡喃葡萄糖苷(7)、七葉內酯(9)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(11)、3'-氧甲基-芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(12)和芹菜素(16)對部分腫瘤細胞系有顯著的細胞毒活性,IC_(50)值范圍在15-60μM之間,其余化合物對所測試的五種癌細胞系均無明顯細胞毒活性,IC_(50)值100μM。(3)計算機腫瘤靶標數(shù)據(jù)庫靶點篩選:通過DellPower Edge R900分子模擬服務器將特穆日-敖日陽古中分離得到的單體化合物上傳,使用Auto Dock程序進行對14種臨床常見腫瘤靶標進行分子對接,篩選出具有活性抑制作用的癌癥相關靶標。通過靶點分子對接得知從特穆日-敖日陽古分離得到的單體化合物大部分對腫瘤細胞內信號通路蛋白激酶BRAF和PI3K抑制作用較強。(4)抗腫瘤機制研究:采用熒光定量PCR法,檢測單體化合物七葉內酯、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素刺激腫瘤細胞后PI3K-AKT-m TOR和RAS-RAF-MEK信號通路上相關基因ERK_2、RAF、PDK_1和AKT的m RNA變化,結果顯示用七葉內酯處理腫瘤細胞后,A-375細胞內ERK_2基因的m RNA表達量顯著降低,其他檢測基因的m RNA表達量無變化;SH-SY5Y細胞內PDK_1基因的m RNA表達量顯著降低,其他基因的m RNA表達量無變化。用芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷處理腫瘤細胞后,A-375細胞內四種檢測基因的m RNA表達量均無變化;SH-SY5Y細胞內PDK_1基因的m RNA表達量顯著降低,其他基因的m RNA表達量無變化。用芹菜素處理腫瘤細胞后,A-375細胞內ERK_2基因的m RNA表達量顯著降低,其他檢測基因的m RNA表達量無變化;SH-SY5Y細胞內ERK_2、PDK_1和AKT基因的m RNA表達量顯著降低,其他檢測基因的m RNA表達量無變化。采用Western blot檢測單體化合物七葉內酯、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素刺激腫瘤細胞后PI3K-AKT-m TOR及RAS-RAF-MEK信號通路上相關蛋白phospho-AKT、AKT、phospho-PDK1、PDK1、phospho-ERK(1/2)和ERK(1/2)表達的變化。結果顯示用七葉內酯處理腫瘤細胞后,A-375細胞內六種檢測蛋白的表達量均無變化;SH-SY5Y細胞內phospho-AKT、AKT和phospho-PDK1蛋白表達量顯著降低,其他檢測的蛋白表達量無變化。用芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷處理腫瘤細胞后,A-375細胞內phospho-AKT、AKT、PDK1、phospho-ERK(1/2)和ERK(1/2)的蛋白表達量顯著降低,其他檢測的蛋白表達量無變化;SH-SY5Y細胞內AKT蛋白表達量顯著降低,其他檢測的蛋白表達量無變化。用芹菜素處理腫瘤細胞后,A-375細胞內phospho-AKT、AKT、phospho-PDK1、PDK1、phospho-ERK(1/2)和ERK(1/2)的蛋白表達量均顯著降低;SH-SY5Y細胞內phospho-PDK1、PDK1和phospho-ERK(1/2)蛋白表達量顯著降低,其他檢測的蛋白表達量無變化。結論化合物1 15均從特穆日-敖日陽古中首次分離得到,其中化合物1 3為新化合物,4,5,8,15為毛茛科內首次分離,7,9,12為鐵線蓮屬內首次分離;細胞毒活性檢測與抗腫瘤機制研究結果提示七葉內酯(9)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(11)和芹菜素(16)具有抗腫瘤活性,并通過PI3K-AKT-m TOR和/或RAS-RAF-MEK信號通路抑制腫瘤細胞生長。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：內蒙古醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R29

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李輝敏;殷嫦嫦;姜登釗;;刺頭復葉耳蕨總黃酮體內抗腫瘤作用初探[J];中成藥;2015年11期

2 趙晨;夏春光;于敏;潘月;王輅;;分子對接軟件在藥物設計中的應用[J];中國抗生素雜志;2015年03期

3 張屏;包溫根其其格;吉日木巴圖;青格勒;包保全;;蒙藥材細葉鐵線蓮薄層鑒別和含量測定方法研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2015年02期

4 譚興起;郭良君;鄭巍;譚昌恒;;白槍桿的化學成分研究(Ⅰ)[J];中國藥房;2013年43期

5 張屏;吉日木巴圖;趙德力格爾呼;付明海;包保全;;蒙藥材特木日-敖日秧古的研究進展[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2013年03期

6 HAO DaCheng;GU XiaoJie;XIAO PeiGen;PENG Yong;;Chemical and biological research of Clematis medicinal resources[J];Chinese Science Bulletin;2013年10期

7 晏永明;呂青;董小萍;李艷;程永現(xiàn);;彝族蟲類藥日本琵琶甲的化學成分研究[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2012年12期

8 廖崢嶸;沈永青;趙娟;呂品;王忠海;雷宇華;;山奈酚對人小細胞肺癌H446細胞凋亡的影響[J];河北師范大學學報(自然科學版);2011年05期

9 賈陸;郭海波;敬林林;周勝安;孔德云;;地桃花化學成分研究.Ⅱ.酚酸類等化學成分[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2009年10期

10 張志;吳海健;皮恩浩;張tq;袁文越;侯愛君;劉全海;;柘樹黃酮體內外抗腫瘤作用研究[J];世界臨床藥物;2009年10期

相關博士學位論文 前7條

1 王培軍;地錦草黃酮醇抗腫瘤作用及其機理的研究[D];燕山大學;2013年

2 弓唯一;黃芩黃酮類組分對尼古丁誘導的肺癌進展的影響及機制[D];復旦大學;2013年

3 朱航;染料木黃酮聯(lián)合吉非替尼抑制獲得性耐藥突變非小細胞肺癌分子機制的研究[D];南方醫(yī)科大學;2011年

4 邱培菊;5-羥基多甲氧基黃酮抗結腸癌活性及其分子機制研究[D];中國海洋大學;2010年

5 逄秀鳳;四種天然化合物抑制腫瘤血管生成及沙棘總黃酮降血壓作用的研究[D];華東師范大學;2009年

6 任冰如;烏蕨（Stenoloma chusanum）化學成分研究及其資源利用評價[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2008年

7 劉春宇;沙苑子黃酮對實驗性肝癌的抑制作用及其機制研究[D];蘇州大學;2007年

相關碩士學位論文 前1條

1 張艷霞;黃芩黃酮類化合物體外抗宮頸癌作用的研究[D];燕山大學;2013年

，

本文編號：2448090