【摘要】：目的觀察芪冬活血飲對急性肺損傷小鼠及人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用,并探討小窩蛋白-1及細(xì)胞因子等在其中的可能機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法本實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)部分：1.芪冬活血飲對急性肺損傷小鼠的干預(yù)作用及機(jī)制研究：將60只雌性小鼠隨機(jī)分為5組：空白組,模型組,芪冬活血飲低劑量組,芪冬活血飲高劑量組,地塞米松組,用不同濃度及藥物灌胃小鼠5天后行LPS氣管滴注造模ALI,24h后處死小鼠取血清、肺泡灌洗液及肺組織,分別行液相芯片多細(xì)胞因子檢測法及ELISA法檢測細(xì)胞因子濃度,RT-PCR、免疫組化檢測Caveolin-1 等信號通路mRNA及平均光密度值,病理鏡下觀察療效；2.芪冬活血飲藥物血清對脂多糖刺激下人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞E-selectin和P-10表達(dá)的影響：將細(xì)胞隨機(jī)分為5組,空白組,LPS組,正常大鼠血清+LPS組,5%藥物血清+LPS組,10%藥物血清+LPS組,用不同濃度的藥物血清培養(yǎng)]HPMEC4h后,再加入1μg/ml LPS刺激HPMEC,用RT-PCR方法檢測E-selectin和IP-10的mRNA表達(dá),ELISA法檢測細(xì)胞上清液中E-selectin和IP-10蛋白水平。結(jié)果1病理結(jié)果示模型組小鼠肺充血、水腫嚴(yán)重,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,肺泡內(nèi)廣泛積液水腫,肺泡變小伴出血,肺泡間隔增厚,肺實(shí)質(zhì)間質(zhì)內(nèi)均見大量炎性細(xì)胞浸潤,治療組小鼠肺充血、水腫減輕,肺泡結(jié)構(gòu)破壞減輕,炎性細(xì)胞浸潤減少,地塞米松組優(yōu)于芪冬活血飲高劑量組,高劑量組優(yōu)于低劑量組；2.ELISA法及液相芯片多細(xì)胞因子檢測結(jié)果示肺泡灌洗液及血清中G-CSF、GM-CSF、IFN-γ、IL-1β、IL-5、IL-6、IL-7、IL-15、IL-17、P-10、KC、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、RANTES、TNF-α、IL-12p70、IL-12、IL-1α等促炎因子及IL-10、IL-13等抑炎因子模型組高于空白組(P0.05),治療組有抑制作用,地塞米松作用強(qiáng)于高劑量組,高劑量組強(qiáng)于低劑量組(P0.05)；3RT-PCR檢測示IL-6、TNF-α、IL-1β、caveolin-1 mRNA模型組高于空白組(P0.05),治療組有抑制作用,IL-6、TNF-α地塞米松組作用最佳,低劑量組作用最弱,IL-1β地塞米松組作用最佳,高劑量組作用最弱(P0.05)；4.免疫組化結(jié)果示MyD88、caveolin-1在組織上表現(xiàn)為強(qiáng)陽性,空白組較弱,模型組較強(qiáng),平均光密度值較高(P0.05),治療組略有減弱,平均光密度值降低,各組之間無明顯差異(P0.05),eNOS在組織上表現(xiàn)為強(qiáng)陽性,鏡下及平均光密度值各組間無明顯差別(P0.05)；5.LPS刺激]HPMEC細(xì)胞后E-selectin和IP-10的表達(dá)和分泌明顯高于空白對照(P0.05),而芪冬活血飲藥物血清則能降低該類細(xì)胞因子的表達(dá)和釋放(P0.05)。結(jié)論1.LPS氣道滴注可誘導(dǎo)并成功建立急性肺損傷小鼠模型,并引起炎癥因子／抗炎因子失衡,激活TLR4/Caveolin-1信號通路；2.芪冬活血飲可減輕急性肺損傷小鼠的肺損傷程度；3.芪冬活血飲可抑制急性肺損傷小鼠血清、肺泡灌洗液及肺組織中G-CSF、 GM-CSF、IFN-γ、IL-1β、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-15、IL-17、IP-10、KC、MCP-1、MEP-1α、MIP-1β、RANTES、TNF-α、IL-13、IL-12p70、IL-12、IL-1α等細(xì)胞因子的釋放；4.芪冬活血飲可通過抑制caveolin-1和MyD88的表達(dá)從而阻導(dǎo)ALI TLR4/Caveolin-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；5.芪冬活血飲藥物血清能明顯抑制HPMEC的活化,降低E-selectin和IP-10的釋放,減輕炎癥損傷,保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259

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本文編號：2400275