發(fā)布時間：2018-12-29 14:50

【摘要】：目的:研究意大利牛舌草抗補體的活性成分,并對其進行了初步的質(zhì)量研究,為尋找天然來源的高效低毒的補體抑制劑奠定物質(zhì)基礎(chǔ)以及該藥材進一步的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。方法:采用體外細(xì)胞溶血試驗,以補體經(jīng)典途徑的溶血活性(CH50)為指標(biāo)考察了意大利牛舌草醇提物的不同萃取部位對補體系統(tǒng)的抑制作用,確定了活性部位;利用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20色譜、ODS等柱色譜和半制備HPLC技術(shù),從意大利牛舌草乙酸乙酯萃取部位分離得到10個單體化合物,根據(jù)理化性質(zhì)和1H-NMR、13C-NMR等波譜學(xué)數(shù)據(jù)進行結(jié)構(gòu)鑒定;以補體經(jīng)典途徑(CH50)和旁路途徑(AP50)的溶血活性為指標(biāo),測定單體成分的活性;采用UPLC-PDA法,色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18(100mm × 2.1 mm,1.7 μm);流動相為甲醇(A)-0.4%甲酸(B);洗脫程序(0-3 min,5-31%A;3-10 min,31%-37%A;10-12 min,37%-40%A;12-30 min,40%-40%A),柱溫30℃;檢測波長366 nm,測定意大利牛舌草中蘆丁和山奈酚的含量。結(jié)果:(1)體外細(xì)胞溶血試驗結(jié)果表明意大利牛舌草醇提物對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑的激活有較強的抑制作用,進一步對醇提物進行萃取,所得到的乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位的活性均較強,而石油醚萃取部位較弱,水提取物無抗補體活性。因此,確定乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位為意大利牛舌草的抗補體活性部位。(2)以抗補體活性為導(dǎo)向,采用多種色譜分離方法,結(jié)合波譜分析技術(shù)從乙酸乙酯部位活性較強的4個組分中分離得到了 10個單體化合物,鑒定出8個化合物的結(jié)構(gòu)。(3)單體化合物的抗補體活性測試結(jié)果表明,山奈酚、蘆丁、2,6,10,14-tetramethyl-18-butanecarboxymethylene-henecos-12-en-17β-ol和苯甲酸壬酯對補體系統(tǒng)顯示了不同程度的抑制活性(CH500.085～1.23 mg/mL;AP50 0.45～0.96 mg/mL);而鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二(2-甲基)丙酯和鄰苯二甲酸二(2-乙基)癸酯對補體系統(tǒng)的抑制作用較弱;2-糠酸則無補體抑制作用。(4)意大利牛舌草中蘆丁和山奈酚的含量分別在1.25～3.34 mg/g和2.86～6.05 mg/g范圍內(nèi),平均回收率分別為100.09%和97.78%,精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性的RSD均小于2.0%。結(jié)論:得到的8個化合物中,鄰苯二甲酸二(2-乙基)癸酯為首次從該植物中分離得到,2-糠酸、2,6,10,14-tetramethyl-18-butanecarboxymethylene-henecos-12-en-17β-ol和苯甲酸壬酯均為首次從本屬植物中分離得到。萜類化合物 2,6,10,14-tetramethyl-18-butanecarboxy-methylene-henecos-12-en-17β-ol的體外抗補體活性最好,接近于陽性藥肝素鈉,其次是2個黃酮類化合物蘆丁和山奈酚,這為尋找天然來源的新型補體抑制劑奠定了基礎(chǔ)。2個主要活性成分蘆丁和山奈酚的含量同地區(qū)之間差異較小,不同地區(qū)之間存在差異,為進一步完善該藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。
[Abstract]:Objective: to study the anti-complement active components of Tauricus Italia, and to study its quality. It provides a scientific basis for searching for natural sources of high efficiency and low toxicity complement inhibitors and for the further development and utilization of this medicine. Methods: in vitro cell hemolysis test was used to investigate the inhibitory effect of different extraction sites of ethanol extract of Tauricus Italia on complement system using the hemolytic activity (CH50) of the classical pathway of complement as the index, and the active sites were determined. Ten monomers were isolated by silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 chromatography, ODS column chromatography and semi-preparative HPLC. 13C-NMR isospectral data were used to identify the structure. The hemolytic activity of monomers was determined by using the hemolytic activity of the classical complement pathway (CH50) and the bypass pathway (AP50) as the index, and the ACQUITY UPLC BEH C18 (100mm 脳 2.1 mm,1.7 渭 m);) column was used for the determination of the activity of the monomers by UPLC-PDA. Mobile phase methanol (A) 0.4% formic acid (B); elution process (0-3 min,5-31%A;3-10 min,31%-37%A;10-12 min,37%-40%A;) The column temperature was 30 鈩，

本文編號：2394975