【摘要】：研究目的：研究健脾疏肝抗毒方對三陰性乳腺癌荷瘤鼠抗腫瘤作用及其可能的機(jī)制。研究方法：應(yīng)用Fugene HD Transfection Reagent轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白的乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231-pAcGFP).流式細(xì)胞儀檢測熒光細(xì)胞百分率。采用皮下接種法建立MDA-MB-231-pAcGFP細(xì)胞異種移植瘤裸鼠,觀察移植瘤的生長情況,熒光成像技術(shù)觀察各臟器轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)目和大小。應(yīng)用免疫組化法檢測不同空白組別：對照組(A組)、健脾疏肝抗毒方組(B組)、ADM3100(CXCR4抑制劑)組(C組)、健脾疏肝抗毒方聯(lián)合ADM3100組(D組)腫瘤微環(huán)境中的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞浸潤,蛋白印跡方法檢測各組腫瘤組織CXCR4/CXCL12軸相關(guān)分子的表達(dá)。研究結(jié)果：流式細(xì)胞儀檢測乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染率高達(dá)96.5%,表達(dá)有綠色熒光蛋白的MDA-MB-231-pAcGFP細(xì)胞成瘤率為100%。對照組(A組)、健脾疏肝抗毒方組(B組)、CXCR4抑制劑組(C組)、健脾疏肝抗毒方聯(lián)合CXCR4抑制劑組([D組)。瘤體平均重量分別為：1.30±0.11g,0.75g±0.12g,0.48g±0.09g,0.44g±0.07g,瘤體平均體積分別為：6.635±0.5cm3,4.017±0.466 cm3,2.664±0.7 cm3,2.323±0.492 cm3(P0.05).三組的抑瘤率分別為42.18%、62.95%、66.28%。A組、C組肝臟可見散在熒光轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié),B組及D組肝臟未見有熒光結(jié)節(jié)。健脾疏肝抗毒方能顯著抑制腫瘤微環(huán)境中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的浸潤,抑制CXCR4/CXCL12軸相關(guān)分子CXCR4.CXCL12、HIFα, NF-κB,VEGF的表達(dá),且與ADM3100聯(lián)合后抑制作用顯著增強(qiáng)。結(jié)論：健脾疏肝抗毒方可以通過改變腫瘤微環(huán)境,調(diào)節(jié)CXCR4、CXCL12軸相關(guān)分子的表達(dá)而發(fā)揮抑制乳腺癌荷瘤鼠異種移植瘤的生長的作用。
[Abstract]:Objective: to study the anti-tumor effect and possible mechanism of Jianpi Shugan Kangdu recipe on triple-negative breast cancer bearing mice. Methods: breast cancer cells (MDA-MB-231-pAcGFP) expressing green fluorescent protein (GFP) were obtained by G418 screening after transfection of MDA-MB-231 cells with Fugene HD Transfection Reagent. The percentage of fluorescent cells was detected by flow cytometry. Nude mice with xenotransplantation of MDA-MB-231-pAcGFP cells were established by subcutaneous inoculation. The growth of xenografts was observed and the number and size of metastatic tumors in various organs were observed by fluorescence imaging. Immunohistochemical method was used to detect different blank groups: control group (A group), Jianpi Shugan Kangdu prescription group (B group), ADM3100 (CXCR4 inhibitor) group (C group). Tumor-associated macrophages and tumor-associated fibroblasts infiltrated in tumor microenvironment in group D combined with Jianpi Shugan Kangdu recipe and ADM3100 group. Western blot method was used to detect the expression of CXCR4/CXCL12 axis related molecules in tumor tissues. Results: the transfection rate of breast cancer cells was 96. 5% by flow cytometry, and the tumor forming rate of MDA-MB-231-pAcGFP cells expressing green fluorescent protein was 100%. Control group (A group), Jianpi Shugan Kangdu prescription group (B group), CXCR4 inhibitor group (C group), Jianpi Shugan Kangdu prescription combined with CXCR4 inhibitor group (group D). The mean weight of tumor was 1.30 鹵0.11g / g 0.75g 鹵0.12g / g 0.48g 鹵0.09g / L 0.44g 鹵0.07g respectively, and the average volume of tumor was 6.635 鹵0.5cm34.017 鹵0.466 cm3,2.664 鹵0.7 cm3,2.323 鹵0.492 cm3 (P0.05). The tumor inhibition rates of the three groups were 42.18 and 62.95 and 66.28.A respectively. The liver of group C could be seen in fluorescent metastatic nodules, but there were no fluorescent nodules in the liver of group B and group D. Jianpi Shugan Kangdu prescription could significantly inhibit the infiltration of tumor-associated macrophages, tumor-associated fibroblasts, and the expression of CXCR4.CXCL12,HIF 偽 and NF- 魏 B in tumor microenvironment. In combination with ADM3100, the inhibitory effect was significantly enhanced. Conclusion: Jianpi Shugan Kangdu recipe can inhibit the growth of breast cancer xenotransplantation by changing the tumor microenvironment and regulating the expression of CXCR4,CXCL12 axis related molecules.
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R273

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本文編號：2305436