【摘要】：背景：我國2010年的高血壓防治指南及2015年歐洲心臟病學會科學年會高血壓研究新進展中指出,近50年國內(nèi)高血壓病的患病率一直呈現(xiàn)上升態(tài)勢,到現(xiàn)在為止我國高血壓病的患者總數(shù)已經(jīng)逾越國外達到2億人,呈現(xiàn)出大約每十個成人中就有二人患有高血壓病的嚴峻狀況。在眾多患病人群中,大多數(shù)以輕、中度高血壓為主,比例大約占90%以上,這其中輕度高血壓患者約占60%左右。目前國內(nèi)高血壓患病特點主要表現(xiàn)在：①患病幾率與年齡呈正相關(guān),伴隨年齡增加而上升；②患病率存在一定的性別差異,往往絕經(jīng)期前女性的患病率略微低于男性,但在更年期后就會迅速升高并超過男性；③有明顯的地域性,由南到北高血壓的患病率逐漸增高；④有一定的種族差異,不同民族間高血壓患病率也不同；⑤多鹽多脂飲食、肥胖與超重、飲酒與經(jīng)常性緊張等不良的生活方式正逐漸成為高血壓病的主要危險因素；⑥患者的自身患病知曉率低于50%,接受治療的比率低于40%,高血壓合理控制率甚至低于10%,這與患者的經(jīng)濟程度和文化水平有著密切的關(guān)系,與發(fā)達國家相比仍有一定的差距。本實驗的立題依據(jù)來源于經(jīng)穴特異性的假說,即認為,腧穴的治療作用體現(xiàn)在局部針刺得氣后,通過腧穴部位或人體整體狀態(tài),借助于針刺補瀉手法,將信息傳遞到人體的高級中樞——腦,腦作為神明之腑,整合正邪盛衰的信息和針刺的治療作用,進而發(fā)揮經(jīng)穴的治療效應(yīng)。小腦參與調(diào)節(jié)心血管功能活動。當通過電刺激小腦頂核的嘴側(cè)部時,能夠引起明顯的心血管反應(yīng)癥狀,如引起動脈壓明顯的升高,心律異常改變,心率增加,從這個頂核升壓反應(yīng)中可以推斷出通過某些途徑小腦會影響血壓的變化,小腦亦存在與心血管功能活動相關(guān)的神經(jīng)元；近年來較多證據(jù)證明,中樞系統(tǒng)的整合作用是影響血壓的主要因素,除此之外,內(nèi)分泌因素亦會影響血壓波動,如腎上腺素、垂體分泌激素等；同時,腎功能的狀態(tài)對人體水液平衡等因素的影響也會影響血壓情況。近年來,人們對神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)對常見病的影響逐漸重視,現(xiàn)代社會生活方式的改變也增加了疊加血壓、血脂、血糖代謝失常的患病率。延髓是為呼吸、消化、心跳活動的中樞,與小腦解剖位置相近,神經(jīng)纖維相互鏈接,或存在作用類似的神經(jīng)元,在調(diào)節(jié)肌緊張等功能協(xié)同作用。我們認識到,高血壓、血脂代謝異常、血糖調(diào)節(jié)受損的病理環(huán)節(jié)中各有相互重合的部分,發(fā)展到一定程度后常常相互影響,根據(jù)臨床對照、試驗數(shù)據(jù)的查閱,調(diào)節(jié)血壓的效應(yīng)可歸納在對神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的影響。目的：我國的患高血壓病的病人數(shù)量增加迅速,在未能理想地控制血壓波動和幅度的前提下,很多病患在高血壓基礎(chǔ)上發(fā)展成更為嚴重的疾病,合理的控制血壓、平穩(wěn)血壓波動能夠大幅度降低嚴重性心腦血管疾病的致死率,從而延長患者的生存期、提高患者的生活質(zhì)量。目前中藥、針灸在臨床治療高血壓相關(guān)癥狀方面應(yīng)用廣泛,針刺治療高血壓時根據(jù)中醫(yī)辨證發(fā)現(xiàn)臨床癥狀與肝、腎功能,陰虛、風動等病因相關(guān),在此基礎(chǔ)上最常使用的腧穴為太沖穴�；诮�(jīng)穴特異性的思考,經(jīng)穴作用通過針刺后在腦部不同腦區(qū)電、生理活動的發(fā)生,繼而影響人體生理、病理反應(yīng),起到經(jīng)穴的治療作用。為驗證這一假說,采用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)針刺后檢測相關(guān)腦區(qū)的蛋白表達情況,分析其中經(jīng)穴治療疾病的規(guī)律,以此驗證經(jīng)穴特異性的理論,為臨床選穴組方提供理論依據(jù)和思路。方法：選用SHR大鼠55只,隨機分為5組,每組11只,分別為曲泉組,模型組,太沖組,非穴組,沖陽組。另取Wistar大鼠8只,作為正常組。前7日每日針刺一次,模型組和正常組只抓取不針刺,其余4組相應(yīng)針刺曲泉穴、太沖穴、非穴和沖陽穴。結(jié)束針刺后將小鼠取材,獲得小腦組織；將小腦組織經(jīng)過雙向電泳和質(zhì)譜檢測后獲得蛋白表達結(jié)果。結(jié)果：通過ImageMaster 2D platinum 5.0比對分析,共監(jiān)測出364個表達差異的蛋白點,具體如下：模型組與正常組相比,上調(diào)的蛋白點有56個,下調(diào)的蛋白點有36個；曲泉組與模型組相比,上調(diào)的蛋白點有7個,下調(diào)的蛋白點有15個；太沖組與模型組相比,上調(diào)的蛋白點有47個,下調(diào)的蛋白點有90個；非穴組與模型組相比,上調(diào)的蛋白點有7個,下調(diào)的蛋白點有39個；沖陽組與模型組相比,上調(diào)的蛋白點有7個,下調(diào)的蛋白點有60個。各組間卡方檢驗X 2=22.151,p=0.000,差異明顯,有統(tǒng)計學意義。利用美國ABI4800 MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜分析,根據(jù)結(jié)果搜索NCBI數(shù)據(jù)庫,共鑒定出36個差異斑點蛋白,如下所示：模型組與Wistar組相比,小腦區(qū)表達上調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：共8個蛋白點,分別為B03、B08、B19、B31、B38、B41、B45、B49。B03(甘氨酸-tRNA連接酶)、B08(蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3)、B19(蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3)、B31(NADH脫氫酶[輔酶]1 a-亞復(fù)合亞基10,線粒體)、B38(甘油-3-磷酸脫氫酶[NAD(+)],細胞質(zhì))、B41(膽綠素還原酶)、B45(單磷酸肌醇)、B49(Metaxin 2)。模型組與Wistar組相比,小腦區(qū)表達下調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：共7個蛋白點,分別為A01、A02、A10、A12、A21、A22、A23。A01(胞漿10-甲酰脫氫酶)、A02(單向復(fù)合物亞基mic60(片段))、A10(蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3)、A12(蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3)、A21(肌醇多磷酸-1-磷酸)、A22(前列腺素還原酶-2)、A23 (NADH脫氫酶[輔酶]1(?)-亞復(fù)合亞基10,線粒體)。曲泉組小腦區(qū)表達上調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：檢測出1個蛋白點,C02(Protein Sf3a3)。曲泉組小腦區(qū)表達下調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：檢測出1個蛋白點,D01(突觸結(jié)合蛋白)。太沖組小腦區(qū)表達上調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：共8個蛋白點,分別為F14、F15、F18、F23、F28、F33、F35、F47。F14(核糖核蛋白)、F15(Protein Tom112)、F18(Protein Usp14)、F23(V型質(zhì)子ATP酶亞基B,腦亞型)、F28(Protein Sept4)、F33(膜聯(lián)蛋白)、F35(轉(zhuǎn)錄激活蛋白-α(片段))、F47(過氧化物酶)。太沖組小腦區(qū)表達下調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：共3個蛋白點,分別為E20、E31、E43。E20(鈣網(wǎng)蛋白)、E31(Protein Setd7).E43(Hsp90 co-chaperone Cdc37);非穴組小腦區(qū)表達上調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：共1個蛋白點,H01(Thimet寡肽)；非穴組小腦區(qū)表達下調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：共4個蛋白點,分別為G10、G11、G24、G39。 G10(Group specific component)、G11(神經(jīng)絲蛋白輕鏈多肽)、G24(蛋白磷酸酶1調(diào)節(jié)亞基7)、G39(Uncharacterized protein);沖陽組小腦區(qū)表達上調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：共1個蛋白點,J01(Thimet寡肽)；沖陽組小腦區(qū)表達下調(diào)蛋白鑒定結(jié)果：共2個蛋白點,分別為109、131。I09(Endophilin-B2)、131(血影蛋白α鏈,非紅細胞1)。分別檢索36個蛋白點的功能,結(jié)果表明,A01：胞漿10-甲酰脫氫酶,在調(diào)節(jié)細胞內(nèi)葉酸池代謝中起重要作用,并能在腫瘤細胞的抗增值過程中發(fā)揮功能；A02:MICOS complex subunit Mic60(Fragment),是單向復(fù)合物Mic60的組成部分,作為線粒體內(nèi)膜上的大分子復(fù)合物,在維持界堵聯(lián)合處能量代謝方面起到重要作用,也是線粒體內(nèi)外膜間的接觸點；A10：蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3,此酶在催化蛋白質(zhì)的折疊過程與免疫反應(yīng)中共同發(fā)揮作用；A12:Protein disulfide-isomerase A3,同上；A21:Inositol polyphosphate-1-phosphatase,肌醇多磷酸-1-磷酸,已有研究報道INPP 1基因的表達上調(diào)可能與人類大腸癌的發(fā)生有關(guān)；從肥大細胞,以及因血壓高灌注造成的心室肥大組織中,都可發(fā)現(xiàn)其高水平前體；月經(jīng)稀發(fā)、肥胖癥、頻繁神經(jīng)功能紊亂等病中INPP 1表達也有顯著增高。A22:Prostaglandin reductase 2,前列腺素還原酶2,其過度表達可抑制PPARG的轉(zhuǎn)錄活性和抑制脂肪細胞分化；A23:NADH dehydrogenase [ubiquinone]1 alpha subcomplex subunit 10, mitochondrial,是線粒體內(nèi)膜呼吸鏈NADH脫氫酶亞基配件(復(fù)合物Ⅰ),一般認為其與呼吸作用無關(guān),復(fù)合物1作用體現(xiàn)在將電子從NADH轉(zhuǎn)移到呼吸鏈上,酶的即刻電子受體是泛醌。B03:Glycine--tRNA ligase (Fragment),甘氨酸-tRNA的連接酶(片段),催化甘氨酸的附件成為tRNA(甘氨酸)；并且可以產(chǎn)生AP4A四磷酸,后者作為通用的多效性信號分子,通過將2個ATP直接縮合,參與細胞調(diào)控途徑；B08:Protein disulfide-isomerase A3,司A10的功能；B19:Protein disulfide-isomerase A3,同A10的功能；B31:NADH dehydrogenase[ubiquinone] 1 alpha subcomplex subunit 10, mitochondrial,司A23的功能。B38:Glycerol-3-phosphate dehydrogenase [NAD(+)], cytoplasmic,甘油醛-3-磷酸脫氫酶[NAD(+)],細胞質(zhì)：在酶學領(lǐng)域,該酶催化化學反應(yīng)sn-甘油-3-磷酸+NAD+(?)磷酸甘油+NADH+H+。改酶歸屬于氧化還原酶家族,參與甘油磷脂代謝；B41:Biliverdin reductase A,膽綠素還原酶,可在正常條件下的所有組織中發(fā)現(xiàn),尤常見于肝臟和脾臟的網(wǎng)狀巨噬細胞中。BVR通過減少第二和第三吡咯環(huán)之間雙鍵轉(zhuǎn)化為單鍵,促進了膽綠素像膽紅素的轉(zhuǎn)變。近年來認為BVR在調(diào)節(jié)葡萄糖代謝、細胞生長及細胞調(diào)往中發(fā)揮作用。B45:Inositol monophosphatase 1,肌醇單磷酸酶1,負責為磷脂酰肌醇和多磷脂酰肌醇的合成提供單磷酸肌醇,并且與鋰在腦部的藥物學代謝有關(guān)；B49:Metaxin2,參與蛋白質(zhì)到線粒體內(nèi)的運輸。C02:Protein Sf3a3,重組蛋白人類剪切因子3a。D01:Syntaxin-binding protein 1,突觸結(jié)合蛋白,可能通過GTP結(jié)合蛋白共同作用于調(diào)控突觸囊泡的對接與融合。在神經(jīng)傳遞與突觸結(jié)合時必不可缺,在突觸小泡一對一融合時,該蛋白參與其融合機制的發(fā)生,它決定某個突觸可以與哪些突觸融合,或與哪些突觸不融合,在測定胞內(nèi)聚變反應(yīng)的特異性可以發(fā)揮作用。F14:Hnrpk protein,核糖核蛋白,似乎影響mRNA的前處理和mRNA代謝和轉(zhuǎn)運的其他方面。具有不同核酸結(jié)合性質(zhì)；F15:Protein Tom112、F18:Protein Usp14,此二者未有發(fā)現(xiàn)；F23:V-type proton ATPase subunit B, brain isoform,V型質(zhì)子ATP酶亞基B,腦型；為液泡ATP酶外周V1復(fù)合物的非催化亞基。V-ATP酶負責酸化多種在真核細胞胞內(nèi)隔室。F28:Protein Sept4,未有明顯發(fā)現(xiàn)；F33:AnnexinA7,膜聯(lián)蛋白A7,鈣-磷脂結(jié)合蛋白,功能為促進膜融合,并參與胞吐過程。F35:Transcriptional activator protein Pur-alpha(Fragments),轉(zhuǎn)錄激活蛋白-α(片段),推測其為一種轉(zhuǎn)錄激活點,位置可能特異性結(jié)合于c-Myc基因上游PUR部分富含嘌呤的單鏈,通過其相似性,可在DNA復(fù)制的開始和重組過程中可以發(fā)揮作用；F47:Peroxiredoxin-2,過氧化物酶-2,參與細胞的氧化還原調(diào)節(jié)過程,通過減少硫氧還原蛋白提供的相似物來減少過氧化物的量。該酶不能從谷氧還原蛋白那里接受電子,在消除代謝過程中產(chǎn)生的過氧化物時,該酶起到了重要作用。亦認為其可能通過調(diào)節(jié)過氧化氫的細胞內(nèi)濃度,進而參與生長因子和腫瘤壞死因子-α的信號級聯(lián)。G10:Group specific component,特殊基團成分蛋白；G11:Neurofilament light polypeptide,神經(jīng)絲蛋白輕多肽,神經(jīng)絲蛋白包括3種中間絲蛋白,根據(jù)其維持神經(jīng)元口徑的不同分為L型、M型和H型：G24:Protein phosphatase 1 regulatory subunit 7,蛋白磷酸酶1調(diào)節(jié)亞基7,為蛋白磷酸酶1的調(diào)節(jié)亞基,可以調(diào)節(jié)蛋白磷酸酶1的活性；G39:Uncharacterized protein.H01:Thimet oligopeptidase,Thimet寡肽,參與不多于20個神經(jīng)肽氨基酸殘基的代謝,并參與細胞質(zhì)肽鏈的降解。還可參與降解β-淀粉樣蛋白前體蛋白和產(chǎn)生淀粉樣片段。109:Endophilin-B2未有發(fā)現(xiàn);131:Spectrin alpha chain, non-erythrocytic1,血影α鏈,非紅細胞1,為胞襯蛋白,可能參與細胞分泌過程,與鈣調(diào)蛋白呈現(xiàn)出鈣依賴性的交互協(xié)同作用,因此在細胞膜處可以作為鈣依賴轉(zhuǎn)運的候選蛋白載體。J01:Thimet oligopeptidase,同H01的作用。結(jié)論：1.太沖穴作為足厥陰肝經(jīng)的原穴,具有治療肝經(jīng)疾病的優(yōu)勢,這是其經(jīng)穴特異性的基礎(chǔ)特性,在治療高血壓疾病時,降壓效果與其他穴位對照具有明顯差異。2.通過將小腦組織蛋白電泳、質(zhì)譜分析后,發(fā)現(xiàn)太沖穴組針刺后小腦區(qū)蛋白表達點上調(diào)明顯多于曲泉組、沖陽組及非穴組,提示降壓效應(yīng)的發(fā)生與小腦活動有相關(guān)性,太沖穴加強小腦蛋白表達與其他對照穴位相比有差異。3.SHR大鼠與正常大鼠相比,參與調(diào)節(jié)遺傳信息代謝、抗腫瘤細胞增生、能量代謝與免疫應(yīng)答的蛋白表達下降,由此推斷SHR大鼠血壓升高或與遺傳信息的改變、腦區(qū)能量不足與免疫缺陷病有關(guān),且SHR大鼠相較正常大鼠,其腫瘤患病率、代謝病、免疫功能缺陷易感性升高。4.針刺太沖穴后促使小腦組織蛋白表達發(fā)生差異性變化,其中已經(jīng)分析出的差異蛋白點功能包括促進代謝產(chǎn)物如過氧化物的消除,加快遺傳信息轉(zhuǎn)化,催化神經(jīng)元能量代謝、促進神經(jīng)再生等,符合高血壓小腦組織微環(huán)境改變,為神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)假說提供佐證。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R245

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4 李曉U，

本文編號：2202395