【摘要】：近年來研究表明,疼痛感知的形成是腦內(nèi)廣泛分布且等級性強(qiáng)的多個(gè)大腦皮層和皮層下中樞結(jié)構(gòu)間相互聯(lián)系的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)參與編碼、加工和調(diào)節(jié)的。現(xiàn)代疼痛研究已從單一模式研究轉(zhuǎn)變?yōu)榇竽X的疼痛感知-情緒-認(rèn)知多維模式(The neural network associated with the sensory, affective and cognitive dimensions of pain,NNSACP)研究。頭痛作為直接的中樞性疼痛,與知覺、情緒和認(rèn)知腦功能屬性緊密相連。眾所周知,突觸傳遞與疼痛研究具有密切關(guān)系。近年來,海馬作為邊緣系統(tǒng)的一個(gè)關(guān)鍵組成部分,除了與學(xué)習(xí)記憶及情緒有關(guān),海馬也被認(rèn)為在疼痛傳導(dǎo)通路中也占有重要地位,參與各種疼痛信息的處理,多數(shù)的錐體細(xì)胞可對各類傷害性刺激做出反應(yīng)。而且疼痛引起了海馬的形態(tài)改變和一些生理機(jī)制變化,影響了海馬的記憶和情緒功能。因此,我們選擇正天丸對海馬神經(jīng)回路突觸傳遞的影響作為本研究的重點(diǎn)之一,以具有代表性的哺乳動物內(nèi)嗅區(qū)-齒狀回-CA3側(cè)枝-CA1海馬三級神經(jīng)回路為研究靶點(diǎn)。從不同的視角來揭示了正天丸對頭痛治療作用的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)共分為四個(gè)部分：第一部分正天丸對硝酸甘油所致大鼠頭痛模型的行為學(xué)作用研究目的研究正天丸對硝酸甘油誘發(fā)的實(shí)驗(yàn)性頭痛大鼠行為學(xué)的影響。方法SD大鼠共分為5組：空白組,硝酸甘油模型組,正天丸低、高劑量(0.54,1.08g/kg),陽性藥物西比靈組。連續(xù)灌胃給藥10天,末次給藥半小時(shí)后,采用皮下注射硝酸甘油來復(fù)制模型,通過觀察大鼠耳紅出現(xiàn)及消失的時(shí)間,前肢撓頭,后肢撓頭,爬籠,甩頭等指標(biāo)來評價(jià)正天丸對其一般行為學(xué)的影響。結(jié)果1.基本行為表現(xiàn)：注射硝酸甘油后動物立即出現(xiàn)活動增加,前肢頻繁撓頭,煩躁不安,于造模后30 min達(dá)到頂峰,60 min以后動物活動逐漸減少,出現(xiàn)倦臥狀態(tài)。2.耳紅：正常組始終沒有出現(xiàn)耳紅現(xiàn)象,而模型組在注射硝酸甘油最早2.1 min出現(xiàn)耳紅現(xiàn)象,平均在4 min出現(xiàn)耳紅；耳紅消失時(shí)間最早在63 min,平均消失時(shí)間為76.2 min。3.撓頭次數(shù)：模型組大鼠的前肢、后肢撓頭次數(shù)均顯著性的增加(P0.001,P0.001)；正天丸高劑量組也可顯著降低前肢、后肢撓頭次數(shù)(P0.001,P0.01)；正天丸低劑量組可顯著降低前肢撓頭次數(shù)(P0.05),但對后肢撓頭次數(shù)沒有顯著影響(P0.05)；西比靈作為陽性對照,表現(xiàn)出了與正天丸低劑量相似的作用。4.爬籠次數(shù)：正天丸高劑量可減少大鼠爬籠次數(shù),但無顯著性差異(P0.05),正天丸低及西比靈組沒有減少大鼠的爬籠次數(shù),與模型組相較無顯著性差異(P0.05,P0.05)。5.甩頭次數(shù)：正天丸低、高劑量及西比靈組均可以顯著性減少大鼠的甩頭次數(shù)(P 0.05, P 0.01, P 0.001)。結(jié)論硝酸甘油成功構(gòu)建了大鼠頭痛模型,且正天丸可顯著緩解硝酸甘油誘發(fā)的頭痛基本癥狀。第二部分正天丸對海馬內(nèi)嗅區(qū)前穿質(zhì)-齒狀回通路突觸傳遞的作用研究目的研究正天丸對大鼠海馬內(nèi)嗅區(qū)前穿質(zhì)-齒狀回突觸傳遞的影響。方法采用在體場電位記錄方法,大鼠烏來糖麻醉后,將其頭部于耳桿0.5-06 cm處固定在腦立體定位儀上,參照大鼠腦立體定位圖譜定位PP及DG區(qū)位置,用顱鉆按照圖譜位置在大鼠腦上打孔,用來放置記錄電極R和刺激電極S。以Dur: 100 μs, Interl:30s的刺激方波記錄基礎(chǔ)刺激誘發(fā)出穩(wěn)定的PS波形。穩(wěn)定記錄30min后,給予高頻刺激誘導(dǎo)突觸長時(shí)程增強(qiáng)(LTP)形成,并研究正天丸低、高劑量(0.54,108 g/kg)及陽性藥物西比靈對海馬前穿質(zhì)-齒狀回通路突觸傳遞的影響。結(jié)果與空白組相比較,模型組高頻刺激后各個(gè)時(shí)間段PS增幅值均降低(P0.05)：與模型組比較,正天丸高、低劑量組及西比靈組的高頻刺激后各個(gè)時(shí)間段PS增幅值均明顯增加(P0.001,P0.01,P0.05)。結(jié)論整體大鼠電生理實(shí)驗(yàn)中,硝酸甘油誘發(fā)的頭痛可明顯降低海馬前穿質(zhì)-齒狀回通路PS增幅值；正天丸低、高劑量和西比靈可顯著性增加前穿質(zhì)-齒狀回通路PS增幅值；結(jié)果顯示正天丸對海馬前穿質(zhì)-齒狀回通路突觸傳遞有顯著的增強(qiáng)作用。第三部分正天丸對海馬腦片Shaffer側(cè)枝-CA1通路突觸傳遞的作用研究目的采用離體胞外記錄海馬區(qū)場電位的方法,利用急性腦片,觀察正天丸對大鼠海馬Shaffer側(cè)枝-CA1通路突觸傳遞的作用。方法用振動切片機(jī)將海馬切成厚度為350μm的腦片,通過離體胞外記錄海馬區(qū)場電位的方法,調(diào)節(jié)微操縱器將刺激電極置于由海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞發(fā)出而投射于CA1區(qū)的Schaffer側(cè)支纖維上,記錄電極置于CA1區(qū)的錐體細(xì)胞胞體層下方。腦片置于持續(xù)灌流的通以混合氧的人工腦脊液(artificial cerebrospinal fluid, ACSF)液中,通過AxoScope系統(tǒng)記錄正天丸低、高劑量(0.54,108 g/kg)及陽性藥物西比靈對大鼠海馬Shaffer側(cè)枝-CA1通路突觸傳遞的作用。結(jié)果與空白組相較,模型組高頻刺激后各個(gè)時(shí)間段fEPSP斜率增幅值均降低(P0.05)；與模型組比較,正天丸高、低劑量組及西比靈組高頻刺激后各個(gè)時(shí)間段fEPSP斜率增幅值均明顯增加(P0.001,P0.01,P0.01)。結(jié)論急性海馬腦片電生理實(shí)驗(yàn)中,硝酸甘油誘發(fā)的頭痛可明顯降低腦片Shaffer側(cè)枝-CA1區(qū)fEPSP斜率增幅值；正天丸低、高劑量和西比靈組可顯著性增加腦片Shaffer側(cè)枝-CA1通路fEPSP斜率增幅值。結(jié)果顯示正天丸能顯著增強(qiáng)海馬腦片Shaffer側(cè)枝-CA1通路突觸傳遞。第四部分正天丸頭痛治療中TRP V1的作用機(jī)制研究目的研究正天丸對大鼠海馬、皮層中TRPV1蛋白表達(dá)的影響,以探索正天丸對頭痛臨床治療作用的分子機(jī)制。方法將大鼠分為3組,空白組、硝酸甘油模型組和正天丸給藥組。連續(xù)灌胃給藥10天,末次給藥結(jié)束后斷頭取腦,分離海馬及皮層。通過Western Blotting技術(shù),研究正天丸對海馬結(jié)構(gòu)和皮層中TRPV1蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果與空白組相比,模型組大鼠海馬和皮層中TRPV1蛋白表達(dá)水平均明顯升高(P0.01,P0.01)；與模型組相比,正天丸高劑量組大鼠海馬組織和皮層中TRPV1蛋白表達(dá)量都顯著性降低(P0.01,P0.05)。結(jié)論正天丸能降低海馬和皮層中TRPV1蛋白的表達(dá),這可能是正天丸對頭痛臨床治療作用的重要分子作用機(jī)制。
[Abstract]:In recent years , it has been shown that the formation of pain perception is widely distributed in the brain and the neural network associated with the central structures in the cortex is involved in coding , processing and regulation .
The disappearance time of the ear was at least 63 minutes , the average disappearance time was 76.2 min . 3 . The number of deflection of the front and hind limbs of the model group was significantly increased ( P0.001 , P0.001 ) .
In the high dose group , the number of deflection of the forelimbs and hind limbs could be significantly decreased ( P0.001 , P0.01 ) .
There was no significant influence on the number of deflection of the forelimbs ( P0.05 ) .
4 . There was no significant difference ( P 0.05 , P 0.01 , P 0.001 ) . Objective To study the effect of Zhengtian Pill on the synaptic transmission of preperal - dentate gyrus in the hippocampus of rats . The results were compared with blank group . Conclusion In the electrophysiological experiment of the whole rat , glyceryl trinitrate - induced headache can significantly reduce the amplitude of PS in the pre - hippocampal puncture - dentate gyrus ;
Low , high and Sibianling could significantly increase the value of PS in the pre - wear - dentate gyrus ;
The effect of Zhengtian Pill on the synaptic transmission of Shaffer ' s side branch - CA1 pathway in hippocampus was studied .
Compared with model group , the slope of fEPSP increased significantly after high frequency stimulation ( P 0.001 , P0.01 , P0.01 ) . Conclusion In the electrophysiological experiment of acute hippocampal slices , glyceryl trinitrate - induced headache can significantly decrease the slope amplitude of fEPSP in the Shaffer - CA1 region of the brain slices .
In the fourth part , the effects of Zhengtian Pill on the expression of TRPV protein in hippocampus and cortex of rat hippocampus were studied . The results showed that the expression level of TRpv1 protein in hippocampus and cortex of rats was significantly higher than that in blank group ( P0.01 , P0.01 ) .
Compared with the model group , the expression of TRpv1 protein in hippocampus and cortex of the high - dose group was significantly lower than that in model group ( P0.01 , P0.05 ) . Conclusion It may be an important molecular mechanism for the clinical treatment of headache .
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R277.7

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本文編號：2137408