本文選題：鼻五度辨證 + 清膽泄熱法��； 參考：《成都中醫(yī)藥大學》2016年碩士論文

【摘要】：目的：采集“膽腑郁熱”型鼻淵患者及正常人竇口鼻道復合體處分泌物,分析二者鼻-鼻竇優(yōu)勢需氧菌的異同。觀察表皮葡萄球菌臨床分離株在實驗室環(huán)境下的生物膜形成能力、生長狀態(tài)及生長量。人工培養(yǎng)表皮葡萄球菌生物膜,觀察以清膽泄熱法為立方依據(jù)的中成藥鼻淵舒口服液對表皮葡萄球菌及其形成的生物膜的抑制作用,利用激光共聚焦顯微鏡觀察生物膜的形態(tài)變化�；凇氨俏宥缺孀C”理論,從鼻-鼻竇條件致病菌形成生物膜的角度進一步研究以“清膽泄熱法”為立方依據(jù)的鼻淵舒口服液治療CRS的效應機制,以期為“鼻五度辨證”理論的進一步研究提供更多的依據(jù)及研究思路。方法：1.采集“膽腑郁熱”型鼻淵患者及正常人竇口鼻道復合體處分泌物,進行需氧菌常規(guī)培養(yǎng),分離、鑒定優(yōu)勢菌。2.定性、定量表皮葡萄球菌產(chǎn)膜能力及生長量變化,篩選出PIA陽性表達株。3.檢測鼻淵舒口服液對表皮葡萄球菌的最小抑制菌濃度以及不同濃度鼻淵舒口服液對不同時期生物膜的抑制作用。4.體外培養(yǎng)表皮葡萄球菌生物膜,通過激光共聚焦熒光顯微鏡動態(tài)觀察鼻淵舒口服液抑制前后生物膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果：1.21例樣本中,9例優(yōu)勢菌為表皮葡萄球菌,約占需氧菌總數(shù)的42.9%。具有產(chǎn)膜能力的有6株,約占表皮葡萄球菌總數(shù)的66.7%,其中鼻竇炎組5株,正常組1株。2.表皮葡萄球菌游離菌含量從2h起逐漸升高,8h后出現(xiàn)下降趨勢。PIA+組黏附菌在4h后出現(xiàn),PIA-組黏附菌8h時開始增長。PIA+組、PIA-組與空白對照組均有顯著差異性(P0.05)。3.鼻淵舒口服液對鼻-鼻竇表皮葡萄球菌的體外最小抑菌濃度為64倍稀釋濃度。不同時間段,2倍和64倍稀濃度的抑制作用有顯著差異性(P0.01)。4.激光共聚焦下見：1d時,大量細菌黏附,部分有聚攏趨勢。3d時,可見膜狀物及通道樣改變,膜結(jié)構(gòu)較松散。7d時,為整齊的三維立體膜狀結(jié)構(gòu),菌團被包裹在其中,膜結(jié)構(gòu)整齊致密。經(jīng)鼻淵舒口服液作用后的成熟生物膜,隨著抑菌時間增加,三維膜狀結(jié)構(gòu)遭到破壞,并逐漸瓦解、分化。結(jié)論：1.表皮葡萄球菌是OMC處分離最多的需氧菌,在CRS中產(chǎn)膜能力較高。在判斷產(chǎn)膜能力上,定性和定量試驗無明顯差異性。2.黏附是表皮葡萄球菌形成生物膜的開始過程,并且4-8h間是形成生物膜的關鍵時期,此時表皮葡萄球菌生物膜進入成熟及維護期,大量游離菌被包裹其中,形成穩(wěn)定的膜結(jié)構(gòu)。3.在體外,64倍稀釋濃度的鼻淵舒口服液即可抑制表皮葡萄球菌的黏附,隨著濃度升高,抑制作用逐漸增強,當達到4倍稀釋濃度時,抑制作用不再發(fā)生明顯變化。4.鼻淵舒口服液對鼻-鼻竇表皮葡萄球菌生物膜的體外抑制作用可能表現(xiàn)為影響細菌的黏附,以及對細菌產(chǎn)生的多糖黏附素進行分解。
[Abstract]:Objective: to collect the secretion of sinoorhinal complex in patients with bilirubin and heat, and to analyze the similarities and differences of the dominant aerobic bacteria in the nasal and paranasal sinuses. To observe the biofilm forming ability, growth state and growth of Staphylococcus epidermidis clinical isolates in laboratory environment. The biofilm of Staphylococcus epidermidis was cultured artificially. The inhibitory effect of Biyuanshu oral liquid, a traditional Chinese patent medicine, on Staphylococcus epidermidis and its biofilm formation was observed. The morphological changes of biofilm were observed by laser confocal microscope. Based on the theory of "nasal fifth degree differentiation", the effect mechanism of Biyuanshu oral liquid on CRS was further studied from the perspective of biofilm formation of nasal and paranasal sinus conditional pathogens. In order to provide more basis and research ideas for the further study of the theory of syndrome differentiation of the fifth degree of nose. Method 1: 1. The secretions from sinoorhinal complex of patients with "gallbladder and heat" type and normal subjects were collected, and aerobic bacteria were cultured routinely, isolated and identified as dominant bacteria. Qualitative and quantitative changes of membrane production ability and growth of Staphylococcus epidermidis were identified and PIA positive expression strain. 3. 3. The minimal inhibitory bacteria concentration of Biyuanshu oral liquid on Staphylococcus epidermidis and the inhibitory effect of different concentration of Biyuanshu oral liquid on biofilm in different period were determined. Staphylococcus epidermidis biofilm was cultured in vitro. The morphology and structure of biofilm were observed by laser confocal fluorescence microscope before and after the inhibition of Biyuanshu oral liquid. Results Staphylococcus epidermidis accounted for 42.9% of the total number of aerobic bacteria. There were 6 strains with membrane producing ability, which accounted for 66.7% of the total number of Staphylococcus epidermidis, including 5 strains in sinusitis group and 1 strain in normal group. The content of free bacteria in Staphylococcus epidermidis increased gradually from 2 h to 8 h, and then decreased. The adhesion bacteria of PIA group began to increase at 8 h after the emergence of PIA-group. There was significant difference between PIA group and control group. The minimal inhibitory concentration of Biyuanshu oral liquid on Staphylococcus epidermidis in vitro was 64 times dilution concentration. The inhibitory effects of 2 times and 64 times of dilute concentration in different time periods were significantly different (P 0.01. 4). At 1: 1 d, a large number of bacteria adhered, some of them showed the change of membrane and channel at 3 d, the membrane structure was loose for 7 d, and it was a three dimensional membrane structure, in which the bacteria mass was wrapped in it. The membrane structure is neat and compact. The mature biofilm treated by Biyuanshu oral liquid, with the increase of bacteriostasis time, the three-dimensional membrane structure was destroyed, and gradually disintegrated and differentiated. Conclusion 1. Staphylococcus epidermidis is the most aerobic bacteria isolated from OMC and has higher membrane production ability in CRS. There was no significant difference between qualitative and quantitative tests in judging the ability of film production. Adhesion is the beginning process of biofilm formation of Staphylococcus epidermidis and the key period of biofilm formation is 4-8 h. When Staphylococcus epidermidis biofilm enters maturity and maintenance period, a large number of free bacteria are encapsulated in the biofilm, forming a stable membrane structure. Biyuanshu oral liquid with 64 times dilution concentration in vitro could inhibit the adhesion of Staphylococcus epidermidis. With the increase of concentration, the inhibitory effect was gradually enhanced. When the concentration reached 4 times, the inhibitory effect was no longer significantly changed .4. The inhibitory effect of Biyuanshu oral liquid on the biofilm of Staphylococcus epidermidis in vitro may be as follows: the adhesion of bacteria and the decomposition of polysaccharide adhesion produced by bacteria.
【學位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R276.1

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