本文選題：博來霉素 + 活性氧簇��； 參考：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：硬皮病(Scleroderma)作為一種累及皮膚和內(nèi)臟器官的自身免疫性結(jié)締組織病,纖維化是其病理改變的核心環(huán)節(jié),TGF-p是目前被公認(rèn)最強(qiáng)的致纖維化因子之一,它能促進(jìn)體內(nèi)組織活性氧(ROS)異常合成,形成的氧化應(yīng)激反應(yīng),此反與膠原合成增加密切相關(guān)。PDGFA作為纖維化進(jìn)程的上游因子,在硬皮病患者的血清高度表達(dá),其與受體特異性結(jié)合可誘使成纖維細(xì)胞和肌纖維母細(xì)胞增殖,造成膠原組織沉積及纖維化,同時(shí)ROS通過抑制硬皮病患者體內(nèi)磷酸酶活性,促使PDGF與其受體持續(xù)結(jié)合,加強(qiáng)纖維化增生。此外,PDGFA與TGF-β誘導(dǎo)的纖維化過程存在交互作用,兩者通過協(xié)同作用可誘導(dǎo)結(jié)締組織生長因子(CTGF)的高表達(dá)從而促進(jìn)纖維化的發(fā)生。因此對硬皮病纖維化的治療成為硬皮病硬化期治療的關(guān)鍵,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對硬皮病的治療主要是對癥治療,段師段行武教授自擬活血除痹湯,以養(yǎng)血活血、通絡(luò)除痹之法治療硬皮病硬化期,取得了良好的臨床療效。為進(jìn)一步研究活血除痹湯治療硬皮病硬化期纖維化的作用機(jī)制,我們以模擬硬皮病硬化期皮損的小鼠為實(shí)驗(yàn)對象,觀察活血除痹湯對其纖維化的抑制效果,以及對致纖維化相關(guān)性因子的調(diào)控作用。以期為活血除痹湯治療硬皮病纖維化的具體作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)室理論的基礎(chǔ)。本研究由文獻(xiàn)綜述、段師治療經(jīng)驗(yàn)介紹及實(shí)驗(yàn)研究三部分構(gòu)成。其中文獻(xiàn)綜述三篇,綜述一主要論述了西醫(yī)對硬皮病發(fā)病機(jī)制的研究及硬皮病臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)的演化,綜述二主要論述了西醫(yī)對硬皮病的治療及相關(guān)研究,綜述三主要論述了中醫(yī)對硬皮病病因病機(jī)的理解及治療方面的研究。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察活血除痹湯對硬皮病硬化期皮損的干預(yù)效果,通過數(shù)據(jù)比較證明：①異常氧化應(yīng)激反應(yīng)存在于硬皮病硬化期皮損中②活血除痹湯能有效緩解皮膚增厚,降低膠原指數(shù),抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)③活血除痹湯能有效抑制致纖維化相關(guān)性因子TGF-β/PDGFA及對纖維化的發(fā)生。方法：(1)實(shí)驗(yàn)一將18只BALB/c小鼠小鼠隨機(jī)分組為①空白組②模型低劑量組③模型高劑量組(每組6只)后以PBS 0.1ml/日對①進(jìn)行皮下注射；分別以濃度400μg/0.1ml、800μg/0.1ml的博來霉素溶液0.1ml/日對②③組進(jìn)行皮下注射4周后處死小鼠采取皮膚組織進(jìn)行HE染色及Masson染色觀察比較皮膚增厚程度及皮膚膠原指數(shù)以掌握最合適模擬硬皮病硬化期皮損的博來霉素造模濃度。(2)實(shí)驗(yàn)二將30只BALB/c小鼠隨機(jī)分為①空白組②模型組③中藥高劑量組④中藥中劑量組⑤中藥低劑量組(每組6只)；以PBS 0.1ml/日對①進(jìn)行皮下注射；以400μg/0.1ml的博來霉素溶液0.1m1/日對②至⑤組進(jìn)行為期4周的造模,于5-8周分別以不同濃度的活血除痹湯藥液(按成人體重?fù)Q算濃度為：44.8、22.4、11.2g/(kg·d)) 2ml/日對③④⑤灌喂；①②以同比體積的蒸餾水進(jìn)行灌胃。于第8周末處死小鼠采取皮膚組織進(jìn)行觀察皮膚厚度、膠原指數(shù)以及皮損中ROS含量的變化。(3)實(shí)驗(yàn)三對硬皮病硬化期小鼠進(jìn)行造模及不同濃度的中藥干預(yù)后,對各組的硬皮病纖維增生相關(guān)因子TGF-β/PDGFA以及它們的下游產(chǎn)物COL-Ⅰ及COL-Ⅲ進(jìn)行免疫組化染色后測量其變化。結(jié)果：(1)實(shí)驗(yàn)一：結(jié)果顯示②造模低劑量組與③造模高劑量組與①空白組比較,皮膚厚度及膠原指數(shù)均增加明顯,具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。②與③相比,②的皮膚厚度及膠原指數(shù)均高于③,具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。小鼠皮膚外觀表現(xiàn)為硬化增厚、披毛脫失、毛囊萎縮消失；顯微鏡下觀察病理變化可見真皮層明顯增厚,膠原纖維束數(shù)量增加、增粗膨大,纖維間隙變窄,毛囊萎縮,真皮血管周圍和間質(zhì)內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤,血管壁明顯增厚,脂肪層減少甚則消失,皮膚附屬器減少明顯等符合硬皮病臨床皮膚病理變化的表現(xiàn)。(2)實(shí)驗(yàn)二：結(jié)果顯示②模型組①空白組比較,皮膚厚度、膠原指數(shù)以及皮損ROS含量均明顯升高,具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。③中藥高劑量組④中藥中劑量組⑤中藥低劑量組與②模型組比較,皮膚厚度、膠原指數(shù)均明顯降低,具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)；其中③的皮膚厚度與膠原指數(shù)明顯低于④⑤(P0.01)。皮損ROS含量方面③與④⑤間存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05,P0.01),④與⑤ROS含量差異不明顯(P0.05)。相關(guān)性分析表示：皮損ROS含量與皮損厚度呈正相關(guān)(r=0.891,P0.01)、皮損ROS含量與皮膚膠原指數(shù)呈正相關(guān)(r=0.866,P0.01)、皮膚厚度與膠原指數(shù)呈正相關(guān)(r=0.942,P0.01)。(3)實(shí)驗(yàn)三：結(jié)果顯示②模型組①空白組比較,致纖維化相關(guān)因子TGF-β/PDGFA含量及COL-Ⅰ/Ⅲ生成均明顯升高,具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。③中藥高劑量組④中藥中劑量組⑤中藥低劑量組與②模型組比較,致纖維化相關(guān)因子TGF- β/PDGFA含量及COL-Ⅰ/Ⅲ生成均明顯降低,具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)；其中③的各項(xiàng)指標(biāo)明顯低于④⑤,存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。④在各項(xiàng)指標(biāo)之間明顯低于⑤存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。相關(guān)性分析表示TGF-β含量與皮損ROS濃度呈強(qiáng)相關(guān)性(r=0.87,P0.01)、PDGFA含量與ROS濃度呈強(qiáng)正相關(guān)性(r=0.88,P0.01)、TGF-β含量與COL-Ⅰ/Ⅲ含量呈強(qiáng)相關(guān)(r=0.96,P0.01, r=0.95,P0.01).PDGFA含量與COL-Ⅰ/Ⅲ含量呈強(qiáng)相關(guān)(r= 0.96,P0.01,,r=0.97,P0.01)結(jié)論：(1)博來霉素皮下注射誘發(fā)硬皮病硬化期小鼠模型的最佳濃度為400μg/0.1ml,為期4周；模型小鼠的皮膚外觀及顯微鏡下的病理變化皆符合硬皮病硬化期的皮膚損害。(2)硬皮病硬化期模型小鼠的皮損中有大量的ROS生成,且ROS濃度與皮損的厚度及膠原指數(shù)呈正相關(guān),說明氧化應(yīng)激反應(yīng)與皮膚纖維增生有較強(qiáng)的關(guān)系；隨著活血除痹湯干預(yù)的濃度增加,ROS含量、皮膚厚度及膠原指數(shù)呈同比下降,說明活血除痹湯抑制皮膚纖維增生可能通過減少ROS的生成產(chǎn)生作用。(3)硬皮病硬化期模型小鼠的皮損中致纖維化因子TGF-β、PDGFA與皮損中COL-Ⅰ/Ⅲ的表達(dá)呈正相關(guān),隨著活血除痹湯干預(yù)的濃度增加,TGF-β、PDGFA與COL-Ⅰ/Ⅲ呈同比下降,說明活血除痹湯能抑制模型小鼠皮膚中TGF-β、PDGFA的含量達(dá)到抑制纖維化的目的,且對COL-Ⅰ/Ⅲ的生成可能有直接或(與)間接抑制的作用。(4)模型小鼠皮膚中的ROS含量與與TGF-β及PDGFA含量呈強(qiáng)相關(guān)性,說明在纖維化的過程中,ROS、TGF-β、PDGFA之間有較密切的關(guān)系。(5)活血除痹湯在干預(yù)硬皮病硬化期模型小鼠皮損效果確切,且在高濃度下效果最佳。
[Abstract]:Objective : To study the effect of promoting blood circulation and activating blood - removing obstruction in the treatment of hard - skin diseases .
( 2 ) 30 BALB / c mice were randomly divided into two groups : 鈶，

本文編號：2013120