本文選題：動脈粥樣硬化 + 外膜滋養(yǎng)血管新生�。� 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:本研究以中醫(yī)脈絡(luò)學(xué)說及營衛(wèi)理論為指導(dǎo),采用單純高脂飲食建立兔AS早期病變高脂血癥模型,高脂飲食疊加右側(cè)頸動脈硅膠管包裹術(shù)建立復(fù)合模型,通過觀察3天、1周、2周和4周時(shí)間節(jié)點(diǎn)各組頸動脈病理形態(tài)、血脂、外膜滋養(yǎng)血管新生變化情況,探討外膜滋養(yǎng)血管新生在AS早期病變中的作用;根據(jù)模型制備成功時(shí)間,選擇術(shù)后4周為時(shí)間節(jié)點(diǎn),圍繞交感/副交感神經(jīng)和氧化應(yīng)激,深入探討AS早期外膜滋養(yǎng)血管新生相關(guān)機(jī)制及通絡(luò)藥物的干預(yù)作用。方法:1外膜滋養(yǎng)血管新生在動脈粥樣硬化早期病變中的作用180只健康新西蘭兔適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后隨機(jī)分為正常組、高脂組及復(fù)合模型組,每組60只。正常組給予普通飼料,高脂組給予高脂飲食喂養(yǎng)建立AS早期高脂血癥模型,復(fù)合模型組給予高脂飲食疊加右側(cè)頸動脈硅膠管包裹術(shù),實(shí)驗(yàn)周期為4周。于術(shù)后3天、1周、2周和4周末行左心室灌注Microfil造影劑進(jìn)行Micro-CT檢查;DYE-TRAK彩色微球檢測術(shù)側(cè)頸動脈管壁微血管血流量;生化法檢測血脂水平;HE染色觀察頸動脈病理形態(tài)學(xué)變化;Western Blot檢測頸動脈外膜新生微血管CD34蛋白表達(dá)。2交感/副交感神經(jīng)和氧化應(yīng)激損傷在外膜滋養(yǎng)血管新生中的作用及通絡(luò)干預(yù)研究90只健康新西蘭兔隨機(jī)分為正常組、高脂組、復(fù)合模型組、復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組、復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)低劑量組和復(fù)合模型+阿托伐他汀組,各組15只。造模同第一部分。各治療組實(shí)施高脂飲食復(fù)合右側(cè)頸動脈硅膠管包裹,于造模當(dāng)天同時(shí)給予藥物干預(yù),用0.5%羧甲基纖維素鈉混懸液將藥物配成所需濃度,給藥劑量為:桂芍通絡(luò)高劑量0.6g/kg/d、低劑量為0.3g/kg/d(相當(dāng)于臨床等效量),阿托伐他汀2.5mg/kg/d,灌胃容積為3ml/kg,其他組別同第一部分,給藥4周后取材。生化法檢測血脂水平、黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶(sod);tba法檢測丙二醛(mda);化學(xué)比色法檢測總抗氧化能力(t-aoc);he染色檢測術(shù)側(cè)頸動脈形態(tài)學(xué)變化;原位雜交檢測外膜p22phox、gp91phox雜交信號;micro-ct檢測術(shù)側(cè)頸動脈外膜微血管密度;彩色微球檢測微血管灌注血流量變化;免疫組化檢測頸動脈外膜ngf、th表達(dá)情況;westernblot檢測頸動脈組織ngf、th、ache、vegf、vegfr-2、erk及p-erk蛋白表達(dá)水平。3ngf/trka/erk1/2通路在外膜滋養(yǎng)血管新生中的作用及通絡(luò)干預(yù)研究90只健康新西蘭兔隨機(jī)分為正常組、高脂組、復(fù)合模型組、復(fù)合模型+pd98059(erk抑制劑)組、復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組、復(fù)合模型+pd98059+桂芍通絡(luò)高劑量組,各組15只。提前將100ulpd98059溶解液置于25ml25%pluronic@f-127凝膠液中,制成pd98059載藥凝膠(終濃度為200μmol/l)。將0.5ml緩釋凝膠導(dǎo)管注入硅膠管,包裹于右側(cè)頸動脈,抑制外膜局部erk信號通路。于造模當(dāng)天同時(shí)給予桂芍通絡(luò)灌胃,實(shí)驗(yàn)周期為4周。he染色觀察動物術(shù)側(cè)頸動脈形態(tài)學(xué)變化;彩色微球檢測微血管血流量變化;免疫組化檢測頸動脈外膜ngf表達(dá)情況;westernblot檢測頸動脈外膜中ngf、trka、vegf、erk及p-erk蛋白表達(dá)。結(jié)果:1外膜滋養(yǎng)血管新生在動脈粥樣硬化早期病變中的作用1.1各組不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)血脂水平變化與正常組比較,高脂組血清tc、tg、ldl-c水平于高脂喂養(yǎng)2周到4周逐漸升高,復(fù)合模型組tc、tg、ldl-c水平于1周到4周逐漸升高,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。與高脂組相比,復(fù)合模型組血清tc、tg、ldl-c水平于1周時(shí)明顯升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異具有顯著性(p0.01),2周和4周時(shí)仍有升高趨勢。1.2各組頸動脈形態(tài)學(xué)變化(he染色)正常組頸動脈內(nèi)膜光滑呈波浪狀,內(nèi)皮細(xì)胞完整連續(xù),中膜以平滑肌細(xì)胞為主;高脂組和復(fù)合模型組3天、1周內(nèi)皮細(xì)胞完整,胞核扁平,中膜平滑肌走形清晰,2周內(nèi)膜輕微增厚,4周內(nèi)膜增生,中膜間隙增寬;而復(fù)合模型組4周內(nèi)膜彌漫性增生,可見少量泡沫狀巨噬細(xì)胞,血管中膜間隙增寬,平滑肌和彈力纖維排列紊亂,損傷程度較高脂組更重。1.3各組頸動脈壁微血管密度比較正常血管滋養(yǎng)管沿頸動脈規(guī)則的縱向排列,高脂組和復(fù)合模型組頸動脈術(shù)側(cè)血管壁面積及微血管密度自術(shù)后1周開始持續(xù)升高,與同期正常組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05,p0.01);與高脂組相比,復(fù)合模型組術(shù)側(cè)血管壁面積及微血管密度從實(shí)驗(yàn)1周后出現(xiàn)增加趨勢,2周和4周微血管密度明顯增加,外膜滋養(yǎng)血管呈致密的微血管叢分布,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05,p0.01)。1.4各組頸動脈術(shù)側(cè)管壁微血管血流量比較與同期正常組相比,高脂組術(shù)側(cè)管壁微血管血流量自術(shù)后2周開始升高(p0.05);復(fù)合模型組在1周時(shí)已出現(xiàn)升高趨勢,2周后呈進(jìn)行性升高(p0.01);相較于高脂組,復(fù)合模型組管壁微血管血流量在1周和2周時(shí)即出現(xiàn)升高趨勢,4周時(shí)管壁微血管血流量明顯升高(p0.05)。1.5各組頸動脈外膜cd34蛋白表達(dá)比較正常頸動脈外膜新生微血管cd34蛋白表達(dá)量較少;高脂組cd34蛋白表達(dá)量自1周至4周呈進(jìn)行性升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05,p0.01);而復(fù)合模型組cd34蛋白表達(dá)量從3天至4周呈進(jìn)行性升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05,p0.01)。2交感/副交感神經(jīng)和氧化應(yīng)激損傷在外膜滋養(yǎng)血管新生中的作用及通絡(luò)干預(yù)研究2.1各組血脂水平變化與正常組比較,高脂組和復(fù)合模型組血清tc、tg和ldl-c水平顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);與復(fù)合模型組比較,復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組、復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)低劑量組和復(fù)合模型+阿托伐他汀組給藥后血清tc、tg和ldl-c水平明顯降低,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01);各用藥組之間兩兩比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。2.2各組血清mda、sod及t-aoc含量變化與正常組比較,高脂組和復(fù)合模型組血清mda水平顯著升高,血清sod及t-aoc水平下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);與復(fù)合模型組比較,復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組、復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)低劑量組和復(fù)合模型+阿托伐他汀組給藥后血清mda水平下降(p0.01),血清sod和t-aoc水平明顯升高(p0.01),各用藥組之間兩兩比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。2.3各組動脈形態(tài)學(xué)變化2.3.1頸動脈形態(tài)學(xué)變化(he染色)正常組頸動脈內(nèi)膜光滑,內(nèi)皮細(xì)胞平整連續(xù),與內(nèi)彈力板貼合緊密,中膜以平滑肌細(xì)胞為主,走行清晰,外膜可見少量微血管;高脂組內(nèi)膜增生,中膜間隙增寬,外膜微血管數(shù)量增多;復(fù)合模型組內(nèi)膜彌漫性增生,可見少量泡沫狀巨噬細(xì)胞,血管中膜間隙增寬,平滑肌和彈力纖維排列紊亂,外膜微血管數(shù)量豐富;各用藥組頸動脈病理損傷不同程度減輕:內(nèi)膜增生減輕,部分彈力纖維排列紊亂,中膜平滑肌走行較清晰,外膜微血管數(shù)量不同程度減少。2.3.2主動脈形態(tài)學(xué)變化(油紅o染色)正常組主動脈呈乳白色,內(nèi)膜光滑,未見油紅著色;高脂組主動脈彈性較差,可見少量斑片狀紅色區(qū)域;復(fù)合模型組主動脈彈性差,胸主動脈下段、腹主動脈及分支部分可見斑片狀紅色,即脂質(zhì)條紋;各藥物干預(yù)組內(nèi)膜斑片狀紅色分布減少,內(nèi)膜較光滑。2.4nadph氧化酶亞單位gp91phox和p22phox分布與表達(dá)正常組中g(shù)p91phox和p22phox基因雜交信號表達(dá)量極少,高脂組和復(fù)合模型組gp91phox和p22phoxmrna雜交顆粒廣泛分布,尤以內(nèi)膜和外膜部位顯著,各用藥組gp91phox和p22phoxmrna雜交信號在內(nèi)膜、外膜分布均有不同程度減弱。2.5各組術(shù)側(cè)頸動脈管壁微血管血流量比較與正常組比較,高脂組和復(fù)合模型組管壁微血管血流量明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);與復(fù)合模型組比較,復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組、復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)低劑量組和復(fù)合模型+阿托伐他汀組頸動脈管壁微血管血流量均明顯減少,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05,p0.01),各用藥組之間兩兩比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。2.6免疫組化法檢測頸動脈外膜ngf、th的分布與表達(dá)與正常組相比,高脂組和復(fù)合模型組的頸動脈中膜-外膜區(qū)域ngf、th抗體染色陽性表達(dá)增多,與復(fù)合模型組比較,復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組、復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)低劑量組和復(fù)合模型+阿托伐他汀組均能減少頸動脈中膜-外膜區(qū)域分布的ngf、th蛋白表達(dá)量。2.7頸動脈外膜ngf、th、ache、vegf、vegfr-2、erk、p-erk蛋白表達(dá)比較正常組、高脂組、復(fù)合模型組及各用藥組總erk蛋白表達(dá)未見明顯差異(p0.05)。與正常組比較,高脂組ngf、th、ache、vegf、vegfr-2、p-erk蛋白表達(dá)上調(diào)(p0.01);與高脂組比較,復(fù)合模型組ngf、th、ache、vegf、vegfr-2、p-erk蛋白表達(dá)顯著上調(diào),有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01);與復(fù)合模型組比較,復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組、復(fù)合模型+低劑量組和復(fù)合模型+阿托伐他汀組ngf、th、ache、vegf、vegfr-2、p-erk蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(p0.01),各用藥組間兩兩比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。3ngf/trka/erk1/2通路在外膜滋養(yǎng)血管新生中的作用及通絡(luò)干預(yù)研究3.1頸動脈形態(tài)學(xué)變化(he染色)正常組頸動脈內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)平整,與內(nèi)彈力板貼合緊密,平滑肌走形清晰,外膜可見少量微血管;高脂組、復(fù)合模型組及復(fù)合模型+pd98059+桂芍通絡(luò)高劑量組內(nèi)膜增厚,中膜間隙增寬,平滑肌和彈力纖維排列紊亂,外膜微血管數(shù)量豐富;復(fù)合模型+pd98059組和復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組內(nèi)膜增生較輕,中膜平滑肌走形較清晰,外膜微血管數(shù)量也不同程度減少。3.2各組術(shù)側(cè)頸動脈管壁微血管血流量與正常組相比,高脂組頸動脈管壁微血管血流量增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);與高脂組相較,復(fù)合模型組管壁微血管血流量明顯增加(p0.01);與復(fù)合模型組相比,復(fù)合模型+pd98059組和復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組管壁微血管血流量顯著減少,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01);與pd98059組比較,pd98059+桂芍通絡(luò)高劑量組微血管血流量明顯增加(p0.01)。3.3頸動脈外膜ngf、trka、vegf、erk及p-erk蛋白表達(dá)正常組、高脂組、復(fù)合模型組及各用藥組總erk蛋白表達(dá)未見明顯差異(p0.05)。與正常組相比,高脂組ngf、trka、vegf、p-erk蛋白表達(dá)上調(diào)(p0.01);與高脂組相比,復(fù)合模型組ngf、trka、vegf、p-erk蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(p0.05,p0.01);與復(fù)合模型組比較,復(fù)合模型+pd98059組和復(fù)合模型+桂芍通絡(luò)高劑量組頸動脈外膜組織中ngf、trka、vegf、p-erk蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(p0.01),與復(fù)合模型+pd98059組比較,復(fù)合模型+pd98059+桂芍通絡(luò)高劑量組對ngf、trka、vegf、p-erk蛋白表達(dá)的干預(yù)作用有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01)。結(jié)論:1本研究以營衛(wèi)理論與脈絡(luò)學(xué)說為指導(dǎo),探討動脈管壁vv新生在as早期病變中的作用。基于營行脈中與血管內(nèi)皮相關(guān),衛(wèi)行脈外與血管外膜相關(guān),“孫絡(luò)”與“微血管”在解剖形態(tài)學(xué)上的同一性,以高脂飲食損傷內(nèi)皮建立高脂血癥兔模型,高脂飲食疊加右側(cè)頸動脈硅膠管包裹術(shù)損傷外膜建立復(fù)合模型,探討動脈管壁vv新生在as早期病變中的作用及營衛(wèi)通絡(luò)方藥干預(yù)作用,不僅有助于揭示營衛(wèi)“由絡(luò)以通,交會生化”異常的病理生理學(xué)基礎(chǔ),對于闡明as“由外向內(nèi)”的發(fā)病機(jī)制,尋找有效的干預(yù)藥物具有重要意義。2以高脂飲食建立高脂血癥兔模型,高脂飲食疊加右側(cè)頸動脈硅膠管包裹術(shù)建立復(fù)合模型,與正常組比較,高脂組1周時(shí)微血管新生cd34蛋白表達(dá)量上調(diào),微血管密度增加,2周時(shí)微血管灌注血流量升高;而復(fù)合模型組3天時(shí)cd34蛋白表達(dá)量較正常組上調(diào),3天及1周時(shí)cd34蛋白表達(dá)量明顯高于高脂組,1周時(shí)微血管密度較高脂組出現(xiàn)升高趨勢,2周和4周時(shí)升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,微血管灌注血流量1周時(shí)出現(xiàn)較高脂組升高趨勢,4周較高脂組明顯升高;頸動脈形態(tài)學(xué)示高脂組及復(fù)合模型組2周時(shí)內(nèi)膜輕微增厚,4周時(shí)明顯增生,而復(fù)合模型組4周時(shí)內(nèi)膜增生程度較高脂組嚴(yán)重,以上結(jié)果表明高脂可引起外膜vv新生,且先于內(nèi)膜增生發(fā)生;復(fù)合模型可引起外膜vv新生程度加重,最終影響并加重as病變程度。3與正常組比較,高脂組和復(fù)合模型組血管內(nèi)膜和外膜均可見明顯的gp91phox和p22phoxmrna雜交顆粒分布,血清mda水平顯著升高,血清sod及t-aoc水平下降;高脂組ngf,trka,th,ache,vegf,vegfr-2,p-erk1/2蛋白表達(dá)量上調(diào),ne表達(dá)量增加,微血管密度及灌注血流量增加,而復(fù)合模型組除NE及微血管密度外,其余上述指標(biāo)均較高脂組升高,表明高脂組和復(fù)合模型組在引起外膜VV新生的同時(shí)伴有氧化應(yīng)激損傷及交感神經(jīng)過度激活,復(fù)合模型組交感神經(jīng)激活程度較高脂組嚴(yán)重;NGF/TrkA/ERK1/2通路參與交感神經(jīng)過度激活促進(jìn)外膜VV新生的病理過程。4以營衛(wèi)理論與脈絡(luò)學(xué)說指導(dǎo)研制的營衛(wèi)通絡(luò)方—桂芍通絡(luò)能夠抑制AS早期外膜VV新生,減少外膜VV密度及血液灌注量,其具體機(jī)制可能與抑制NGF/TrkA/ERK1/2通路,抑制交感神經(jīng)過度激活,改善交感/副交感神經(jīng)表達(dá)失衡,降低頸動脈外膜局部及血清氧化應(yīng)激損傷有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1823202