本文選題：骨關(guān)節(jié)炎 + 淫羊藿苷��； 參考：《重慶大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)是一種以骨關(guān)節(jié)軟骨的退行性病變和繼發(fā)骨質(zhì)增生為特點(diǎn)的慢性關(guān)節(jié)疾病,其病理性進(jìn)程中滑膜的病變會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)腔微環(huán)境穩(wěn)態(tài)發(fā)生紊亂進(jìn)而使疾病惡化,其病理特征主要包括:組織中蛋白酶活性的增加導(dǎo)致胞外基質(zhì)(ECM)的降解,細(xì)胞分泌大量炎癥因子促進(jìn)OA的發(fā)生進(jìn)程,細(xì)胞的凋亡惡化關(guān)節(jié)腔微環(huán)境等。因此,OA疾病中ECM的降解、細(xì)胞因子的分泌及細(xì)胞凋亡是研究其發(fā)病機(jī)制的重要靶點(diǎn)。在OA的治療方面,藥物治療的方式具有使用方便、治療效果較好、成本較低等特點(diǎn),尋找安全性更高藥效更好的藥物對(duì)OA進(jìn)行治療受到了極大的關(guān)注。作為一種傳統(tǒng)中藥類物質(zhì)淫羊藿苷能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖,成骨細(xì)胞分化,降低炎癥因子及基質(zhì)金屬蛋白酶等。OA疾病發(fā)展過(guò)程中滑膜組織會(huì)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)并繼發(fā)性增生,而淫羊藿苷是否能夠通過(guò)對(duì)OA滑膜細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控從而達(dá)到治療OA的目的尚不清楚。因此,本文以O(shè)A滑膜細(xì)胞為研究對(duì)象,以細(xì)胞活力、增殖、遷移以及不同細(xì)胞因子表達(dá)情況為指標(biāo),探索淫羊藿苷對(duì)OA滑膜細(xì)胞的調(diào)控作用及其機(jī)制,為OA的藥物治療途徑提供參考。本課題主要研究工作和結(jié)果如下:(1)采用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行OA滑膜細(xì)胞的提取,并對(duì)所提細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。(2)淫羊藿苷處理OA滑膜細(xì)胞后運(yùn)用MTS方法檢測(cè)不同濃度的淫羊藿苷對(duì)于細(xì)胞的活性影響及探討該藥物的毒性作用,并篩選出最佳藥物作用濃度:0nM,100nM,500nM,1μM;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淫羊藿苷處理OA滑膜細(xì)胞后細(xì)胞周期的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)進(jìn)入S期和G2/M期的細(xì)胞量增多,細(xì)胞出現(xiàn)增殖;采用EdU法檢測(cè)淫羊藿苷處理OA滑膜細(xì)胞后細(xì)胞增殖的情況,結(jié)果顯示在一定濃度范圍內(nèi)淫羊藿苷能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖。(3)淫羊藿苷處理OA滑膜細(xì)胞后收集總RNA和總蛋白,采用Real-time PCR法檢測(cè)MMP14和GRP78 mRNA表達(dá)量的變化;采用Western blot法檢測(cè)MMP14和GRP78蛋白表達(dá)量的變化;采用免疫熒光法檢測(cè)MMP14和IL-1β的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷能夠抑制MMP14和GRP78的基因以及蛋白的表達(dá),并且也能降低IL-1β的表達(dá)水平。(4)淫羊藿苷處理細(xì)胞后運(yùn)用Transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷移的情況,結(jié)果顯示淫羊藿苷能夠抑制OA滑膜細(xì)胞的遷移。并且抑制作用隨著藥物濃度升高而增強(qiáng)。綜上所述,我們證實(shí)在一定濃度范圍內(nèi)淫羊藿苷對(duì)OA滑膜細(xì)胞無(wú)毒性,并且可以降低MMP14、GRP78和IL-1β的表達(dá),從而積極調(diào)控OA滑膜細(xì)胞,進(jìn)而改變關(guān)節(jié)腔微環(huán)境,對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的治療具有積極作用。
[Abstract]:Osteoarthritis Osteoarthritis (OAA) is a chronic joint disease characterized by degenerative lesions of osteoarticular cartilage and secondary hyperosteogeny. The histopathological features include the degradation of extracellular matrix ECM (ECM) due to the increase of protease activity, the secretion of a large number of inflammatory factors to promote the process of OA, the deterioration of apoptosis in the articular microenvironment and so on. Therefore, the degradation of ECM, cytokine secretion and apoptosis are important targets to study the pathogenesis of OA. In the treatment of OA, the drug therapy has the characteristics of convenient use, good therapeutic effect, low cost, and so on, so it has been paid great attention to find more safe and effective drugs to treat OA. As a traditional Chinese medicine, icariin can promote the proliferation of chondrocytes, osteoblast differentiation, and reduce inflammation factors and matrix metalloproteinases. It is not clear whether icariin can regulate OA synoviocytes to treat OA. Therefore, in this study, OA synoviocytes were used as the targets of cell viability, proliferation, migration and expression of different cytokines to explore the regulatory effect of icariin on OA synovial cells and its mechanism. To provide a reference for the drug treatment of OA. The main research work and results are as follows: (1) tissue block culture method was used to extract OA synovial cells. After treated OA synoviocytes with icariin, the effects of different concentrations of icariin on cell activity and toxicity of icariin were detected by MTS method. Flow cytometry was used to detect the changes of cell cycle in OA synovial cells treated with icariin. The results showed that the number of cells entering S phase and G 2 / M phase increased and cell proliferation appeared. The proliferation of OA synovial cells treated with icariin was detected by EdU method. The results showed that icariin could promote the proliferation of OA synoviocytes in a certain concentration range. The results showed that icariin could promote the proliferation of OA synoviocytes and collect total RNA and total protein after treated with icariin. MMP14 and GRP78 mRNA were detected by Real-time PCR, MMP14 and GRP78 by Western blot, MMP14 and IL-1 尾 by immunofluorescence. The results showed that icariin could inhibit the expression of gene and protein of MMP14 and GRP78, and decrease the expression level of IL-1 尾. The results showed that icariin could inhibit the migration of OA synovial cells. And the inhibitory effect increased with the increase of drug concentration. In conclusion, we prove that icariin is not toxic to OA synoviocytes in a certain concentration range, and can reduce the expression of MMP14, GRP78 and IL-1 尾, thus actively regulate the synovial cells of OA, and then change the microenvironment of articular cavity. It has a positive effect on the treatment of osteoarthritis.
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R274.9

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本文編號(hào)：1788356