本文選題：急性重癥胰腺炎　切入點：蓽撥寧　出處：《廣東藥科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)為臨床常見危重疾病。盡管臨床對急性腺炎的診療水平不斷提高,但重癥急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP)的死亡率仍高達10%-30%。SAP時,大量炎癥細胞被過度激活并釋放白介素-1、6、10(Interleukin-1、6、10,IL-1、6、10)等炎癥因子,從而啟動全身炎癥反應(yīng)和調(diào)控胰腺組織細胞凋亡。因此在SAP早期控制炎癥反應(yīng)和細胞凋亡,能大大減輕胰腺損傷,提高患者的生存率和改善預(yù)后。近年研究發(fā)現(xiàn),傳統(tǒng)中藥蓽茇根部提取物蓽撥寧(piperlonguminine,PL)通過影響活性氧簇(Reactive oxygen specie s,ROS)、部分凝血活酶時間和ERK-1/2信號通路等,在修復(fù)腦神經(jīng)損傷、抗凝血活性和抑制腫瘤細胞生長等方面均有調(diào)控作用。本課題旨在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下,運用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù),進行中醫(yī)藥治療SAP機理及其分子基礎(chǔ)的研究,尤其是探討中藥新藥-蓽撥寧治療SAP的作用靶點及其可能的相關(guān)分子機制,為今后開發(fā)新的中醫(yī)藥治療SAP提供理論依據(jù)。目的:建立SAP大鼠模型,探討中藥蓽撥根部提取物蓽撥寧單體對SAP大鼠的作用及其相關(guān)分子機制,為進一步開發(fā)該蓽撥寧提供實驗依據(jù)。方法:1動物的分組與處理1.1動物模型的分組:60只SD大鼠按數(shù)字表法隨機分成假手術(shù)(SO)組(10只),模型(SAP)組(10只),蓽茇寧(P)組(30只),甲磺酸加貝酯(G M)組(10只)。1.2動物分組后處理:采用逆行胰膽管注射5%牛黃膽酸鈉(0.1ml/100g)建立SAP大鼠模型。SO組以生理鹽水代替5%牛黃膽酸鈉。P組于建模后隨機分成低、中、高劑量組(2.5,5,10mg.kg-1)并立即將蓽茇寧以腹腔注射形式給藥SAP大鼠。GM組建模后立即將甲磺酸加貝酯(gabexate mesilate,GM)(10mg.kg-1)以腹腔注射形式給藥SAP大鼠。而SO組和SAP組用等量的生理鹽水以腹腔注射形式注入大鼠。12h后處死大鼠留取血清及胰腺組織標(biāo)本。2實驗觀察指標(biāo)2.1第一部分實驗觀察指標(biāo):12h后觀察大鼠術(shù)后一般狀態(tài)。隨后處死大鼠留取部分胰腺組織干燥箱烤至恒重后檢測干濕比重。觀察胰腺頭部組織病理學(xué)大體改變及he染色鏡下觀改變。紫外分光光度計檢測:大鼠血清淀粉酶(amylase,ams)、脂肪酶(lipase,lps)變化。2.2第二部分實驗觀察指標(biāo):紫外分光光度計檢測:大鼠血清髓過氧化物酶(myeloperoxidase,mpo)變化。elisa法檢測:大鼠血清干擾素-γ(interferon-γ,ifn-γ)、白介素-1(interferon-1β,il-1β)、白介素-10(interferon-10,il-10)和腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor-α,tnf-α)變化。定量pcr檢測:胰腺組織tlr-4mrna和nf-κbmrna變化。蛋白質(zhì)印跡法檢測:胰腺組織tlr-4蛋白和nf-κb蛋白表達量變化。2.3第三部分實驗觀察指標(biāo):tunnel染色檢測:大鼠胰腺組織細胞凋亡情況。定量pcr檢測:peroxiredoxin-4mrna、xbp-1mrna和p38mapmrna表達量變化。蛋白質(zhì)印跡法檢測:peroxiredoxin-4蛋白表達量變化。結(jié)果:1實驗結(jié)果1.1第一部分實驗結(jié)果:(1)總體上so組大鼠一般狀態(tài)良好,sap組大鼠狀態(tài)萎靡,p組及gm組大鼠狀態(tài)較sap組好轉(zhuǎn)。(2)sap組大鼠血清ams和lps值較so組升高3倍以上。p組、gm組ams和lps水平較sap組下降(p0.05)。(3)sap組大鼠胰腺組織干濕比重值較so組明顯升高(p0.05)。p組和gm組大鼠胰腺組織干濕比重值較sap組下降(p0.05)。(4)病理切片大體及鏡下結(jié)果顯示,sap組大鼠胰腺損傷較so組嚴重。p組和gm組大鼠胰腺損傷較sap組減輕。1.2第二部分實驗結(jié)果:(1)mpo水平結(jié)果顯示:sap組大鼠血清mpo表達水平較so組明顯升高(p0.05),p組、gm組較sap組有下降趨勢,但差異均沒有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。(2)elisa結(jié)果顯示:sap組大鼠血清il-1β、tnf-α和ifn-γ表達水平較so組明顯升高(p0.05,0.01)。p組、gm組IL-1β、TNF-α和IFN-γ表達水平較SAP組均顯著降低(P0.05,0.01);雖SA P組的IL-10表達水平較SO組升高,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而P組、G M組IL-10表達水平較SAP組顯著升高(P0.05)。(3)定量PCR結(jié)果顯示:SAP組大鼠胰腺TLR-4 mRNA和NF-κB mRNA較SO組表達量明顯升高(P0.05,0.01)。P組、GM組胰腺組織TLR-4 mRNA和NF-κB mRNA表達量較SAP組顯著降低(P0.05)。(4)蛋白質(zhì)印跡法結(jié)果顯示:SAP組大鼠胰腺T LR-4和NF-κB蛋白表達量較SO組明顯升高。P組、GM組胰腺組織TLR-4和NF-κB蛋白表達量較SAP組顯著降低。1.3第三部分實驗結(jié)果:(1)TUNNEL染色結(jié)果顯示:SAP大鼠胰腺細胞凋亡程度較SO組增加。P組和GM組大鼠胰腺組織凋亡程度較SAP組增加。(2)定量PCR結(jié)果顯示:SAP組大鼠胰腺peroxiredoxin-4 mRNA、XBP-1 mRNA和p38MAPK mRNA表達量較SO組明顯升高(P0.05,0.01)。P組、GM組胰腺組織p38MAPK mRNA表達量較SAP組顯著升高(P0.05),XBP-1 mRN A表達量較SAP組有上升趨勢,但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),peroxired oxin-4 mRNA蛋白表達量較SAP組顯著降低(P0.05)。(3)蛋白質(zhì)印跡法結(jié)果顯示:SAP組大鼠胰腺peroxiredoxin-4蛋白表達量較SO組明顯升高。P組、GM組胰腺組織peroxiredoxin-4蛋白表達量較SAP組顯著降低。結(jié)論:大鼠SAP模型建立成功。蓽撥寧能降低AMS、LPS的表達量,抑制SAP相關(guān)的炎癥因子(IL-1β、IL-10、TNF-α、IFN-γ)表達、具有緩解SAP病情的作用。其作用機制可能通過調(diào)節(jié)TLR-4/NF κB通路和細胞凋亡,而減輕炎癥反應(yīng)。但其對SAP大鼠MPO參與的氧化應(yīng)激反應(yīng)及XBP-1參與的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激細胞凋亡通路的影響未見統(tǒng)計學(xué)意義,尚需更長治療時間觀察明確。
[Abstract]:In recent years , it was found that the traditional Chinese medicine , Piper longum ( PL ) , was randomly divided into sham operation ( SO ) group ( 10 rats ) , model ( SAP ) group ( 10 rats ) , Piper longum ( P ) group ( 30 rats ) , methanesulfonic acid ( G M ) group ( 10 rats ) . The levels of IL - 1尾 , IL - 1尾 , IL - 1尾 , IL - 1尾 , IL - 1尾 , IL - 1尾 , IL - 1尾 , IL - 1尾 , TNF - 偽 and IFN - 緯 in SAP group were significantly higher than that in SAP group ( P < 0.05 ) . (3)瀹氶噺PCR緇撴灉鏄劇ず:SAP緇勫ぇ榧犺儼鑵篢LR-4 mRNA鍜孨F-魏B mRNA杈僑O緇勮〃杈鵑噺鏄庢樉鍗囬珮(P0.05,0.01).P緇，

本文編號：1702185