本文選題：混源萜　切入點：藏藥大花綠絨蒿　出處：《廣東藥科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：藏藥大花綠絨蒿已是瀕危植物,但其化學(xué)成分和藥理活性研究目前依然不充分。本研究中的四個化合物為藏藥大花綠絨蒿內(nèi)生真菌來源的混源萜類化合物,化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎,其中D1399為新的天然產(chǎn)物,因此本文通過體內(nèi)和體外腫瘤活性研究,探討藏藥大花綠絨蒿內(nèi)生真菌中混源萜類抗腫瘤活性,深入探索D1399化合物的抗肺癌作用的分子機制,希冀闡明該植物的藥用價值的物質(zhì)基礎(chǔ)和發(fā)現(xiàn)新的抗腫瘤活性化合物,并對合理開發(fā)和保護本屬植物資源提供借鑒。此外,為進一步發(fā)展海洋中藥,本文通過研究國家海洋生物天然產(chǎn)物庫中共1579個單體化合物對人乳腺癌細胞(MDA-MB-435)生長的體外抑制作用,初步探究海洋生物來源抗腫瘤活性天然產(chǎn)物,并對紅樹林老鼠|內(nèi)生真菌來源的內(nèi)酯類化合物D1952的抗腫瘤活性及其作用機制進行了研究,并希望能發(fā)現(xiàn)高效的抗腫瘤先導(dǎo)化合物。本研究通過計算機藥物靶點研究對D1952化合物的進行了靶點預(yù)測;四甲基二氮唑藍(MTT)比色法初步研究藏藥大花綠絨蒿內(nèi)生真菌來源四個混源萜類化合物和紅樹林老鼠|內(nèi)生真菌來源的內(nèi)酯類化合物D1952抗腫瘤活性,并深入探究了其的抗腫瘤表達譜以及D1399化合物抗肺癌作用和D1952抗乳腺癌作用;接著利用端粒轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)對D1399、D1952化合物引起的細胞凋亡進行檢測;流式細胞術(shù)檢測D1952化合物對細胞周期的影響;同時,免疫印跡(Western blotting)法檢測了相關(guān)凋亡蛋白以及相關(guān)通路蛋白表達量的變化。最后通過人肺癌細胞裸鼠皮下移植瘤模型對D1399化合物體內(nèi)抑制H460細胞生長進行了藥效學(xué)評價。MTT結(jié)果顯示,D1399、D1403、D2232分別對MDA-MB-435人乳腺癌細胞,HepG2人肝癌細胞,Calu3人肺腺癌細胞,HCT116人結(jié)腸癌細胞都具有高效的細胞生長抑制作用,D2233則相對較弱,其中D1399抑制作用最強;此外,D1399的1?(44)工作濃度的D1399和3?(44)工作濃度的D1952能強烈的抑制人白血病細胞HL-60、K562;人肺癌細胞A549、NCI-H226、H460、PC9、Calu1、Calu3、H1299;人結(jié)腸癌細胞HCT116、HCT-15、SW620、COLO205、KM12、HT29;人腎癌細胞SN12C;人膠質(zhì)瘤細胞U251、SNB19;人前列腺癌細胞PC3;人乳腺癌細胞T-47D、MCF7、MDA-MB-435、MBA-MB-231、MBA-MB-468、BT549;人肝癌細胞HepG2共26株腫瘤細胞的增殖,且抑制作用范圍分別為25%~92%、34%~90%;進一步實驗發(fā)現(xiàn)D1399化合物對人肺癌細胞A549、PC9、Calu1、H1299、H460的IC50分別為1.18?M、1.64?M、0.88?M、1.25?M、3.24?M,D1952化合物對乳腺癌細胞MDA-MB-435的IC50為1.11?M。TUNEL實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),經(jīng)D1399和D1952化合物分別作用后,TUNEL染色陽性細胞明顯增加,并且呈劑量依賴性。流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)D1952化合物能引起G1/S期阻滯;Western blotting實驗證明,D1399能降低H460和A549細胞中caspase-8,-9,-3和PARP蛋白前體,增加caspase-8,-9,-3成熟體和PARP剪切帶,也具有明顯的濃度依賴性;此外,同樣也能降低AKT的的Thr473和Ser308位點的磷酸化水平。D1952化合物能促進凋亡效應(yīng)蛋白PARP的裂解,及p-RB降低,同時增加細胞周期抑制蛋白p21表達;裸鼠皮下移植瘤實驗中顯示,經(jīng)D1399化合物作用人肺癌細胞H460裸鼠皮下移植瘤后,D1399作用組的瘤重0.48±0.11 g與對照組瘤重0.80±0.21 g相比,抑制率達59.12%。闡明了兩種化合物均有望可作為高效的抗腫瘤先導(dǎo)化合物。通過以上總結(jié)得到:(1)D1399、D1403、D2232、D2233四個混源萜類化合物均具有一定的抗腫瘤活性,其結(jié)構(gòu)與活性存在一定相關(guān)性。初步推測雙鍵和取代基的不同,對它們的活性有影響。(2)D1399化合物為上述四個化合物中最優(yōu)抗腫瘤活性化合物。體外活性檢測結(jié)果顯示,D1399具有廣譜、高效的抗腫瘤細胞增殖的活性。體內(nèi)抗腫瘤活性研究結(jié)果顯示,D1399對人肺癌裸鼠異種移植瘤有抑制作用。(3)D1399抗腫瘤活性分子機制研究結(jié)果顯示,D1399能通過激活外源性凋亡途徑和內(nèi)源性凋亡途徑誘導(dǎo)腫瘤細胞H460和A549細胞凋亡;D1399能通過抑制AKT的磷酸化,促進細胞凋亡。(4)在計算機靶點預(yù)測中,D1952能穩(wěn)定靶向結(jié)合CDK2,很可能是其直接靶點。(5)D1952具有廣譜、高效的抗腫瘤細胞增殖的活性,其抗腫瘤活性分子機制研究結(jié)果顯示發(fā)現(xiàn)D1952能引起G1/S阻滯誘導(dǎo)MDA-MB-435細胞的凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R29

【參考文獻】

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本文編號：1595914