本文關(guān)鍵詞： 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 血小板微粒 細(xì)胞因子 新風(fēng)膠囊　出處：《安徽中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：1目的本研究分別從臨床與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩個(gè)方面觀察類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)血小板微粒(platelet microparticles,PMPs)、細(xì)胞因子及相關(guān)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的變化,評(píng)價(jià)新風(fēng)膠囊(Xinfeng Capsule,XFC)對(duì)其的影響,探討XFC干預(yù)PMPs表達(dá)的作用機(jī)制。2方法2.1實(shí)驗(yàn)研究將72只清潔級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照(Normal control,NC)組、模型對(duì)照(Model control,MC)組、新風(fēng)膠囊高劑量(Xinfeng Capsule High Dose,XFCH)組、新風(fēng)膠囊中劑量(Xinfeng Capsule Medium Dose,XFCM)組、新風(fēng)膠囊低劑量(Xinfeng Capsule Low Dose,XFCL)組、甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)組,每組12只。MC、XFCL、XFCM、XFCH、MTX組大鼠右后足跖皮內(nèi)均注射弗氏完全佐劑0.1ml致炎,復(fù)制佐劑關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠的模型。致炎后第19天開始灌胃給藥,劑量按照各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物間單位體表面積的用藥量相等的原則進(jìn)行藥物換算,連續(xù)給藥30天。觀察各組大鼠足趾關(guān)節(jié)腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Arthritis index,AI),酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)各組大鼠血清中白介素(interleukin,IL)-1、IL-4、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平,流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測(cè)PMP標(biāo)志物CD61、CD41雙陽(yáng)性的表達(dá)情況,超微電鏡觀察血小板超微結(jié)構(gòu)的變化,光鏡觀察各組大鼠足趾關(guān)節(jié)滑膜組織的變化,蛋白免疫印跡技術(shù)(Western Blotting,WB)檢測(cè)各組大鼠腹主動(dòng)脈中PI3K及AKT的表達(dá)變化及XFC對(duì)以上指標(biāo)的影響。2.2臨床研究所選60例RA患者均來(lái)自2014年7月至2015年7月安徽省中醫(yī)院風(fēng)濕免疫科的住院病人,且符合1987年ACR修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)和2009年ACR/EULAR提出的RA分類標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)分系統(tǒng),中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)符合衛(wèi)生部頒布的《中藥新藥治療痹病的臨床指導(dǎo)原則》。將60例RA患者隨機(jī)分組為XFC組、MTX組、MTX+XFC組各20例。另設(shè)20例正常對(duì)照者。采用生化分析儀檢測(cè)基礎(chǔ)生化指標(biāo)及血常規(guī),ELISA檢測(cè)血清IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、VEGF的含量,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PMPs標(biāo)志物CD61、CD41雙陽(yáng)性的表達(dá)情況,問卷量表的方法來(lái)觀察RA患者的生活質(zhì)量變化及焦慮抑郁情緒的改變,觀察XFC對(duì)RA患者的療效、PMPs及細(xì)胞因子水平等相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的影響。3結(jié)果3.1實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果3.1.1 AA大鼠體質(zhì)量、足趾腫脹度和AI變化及XFC對(duì)其影響造模前各組大鼠體質(zhì)量、足跖腫脹度及AI比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。致炎后第19日給藥,與NC組比較,MC、XFCL、XFCM、XFCH、MTX組大鼠足趾腫脹度和AI均顯著升高(P0.01),MC組與各治療組之間比較無(wú)差異(P0.05)。連續(xù)給藥30天后,與NC組比較,MC組與各治療組大鼠足趾腫脹度和AI仍升高,體重降低,(P0.01或P0.05);與MC組比較,各治療組大鼠足跖腫脹度和AI明顯降低,體重增加,(P0.05或P0.01);與MTX組相比,XFCM組體量有所增加,足趾腫脹度與AI降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.1.2 AA大鼠關(guān)節(jié)病理形態(tài)學(xué)變化及XFC對(duì)其影響光鏡下觀察各組AA大鼠的足趾關(guān)節(jié)HE染色病理切片:NC組大鼠的滑膜組織結(jié)構(gòu)清晰,未見增生、突起,無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn),細(xì)胞排列規(guī)則,分層較少,關(guān)節(jié)軟骨及骨結(jié)構(gòu)完整;MC組大鼠關(guān)節(jié)滑膜中可見大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),明顯的滑膜組織增生及滑膜血管翳形成,滑膜襯細(xì)胞分層增多,關(guān)節(jié)面模糊,部分關(guān)節(jié)軟骨表面毛糙或缺如;XFCM組大鼠關(guān)節(jié)滑膜、血管壁可見少量炎細(xì)胞浸潤(rùn),滑膜組織結(jié)構(gòu)較MC明顯改善,增生程度減輕,關(guān)節(jié)面較規(guī)整;與XFCM組比較,MTX組大鼠關(guān)節(jié)滑膜襯細(xì)胞增厚,部分關(guān)節(jié)軟骨可見血管翳形成,關(guān)節(jié)面欠規(guī)整;XFCL和XFCH組大鼠關(guān)節(jié)可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)于滑膜及其周圍組織,滑膜血管翳增生,滑膜襯細(xì)胞增厚,關(guān)節(jié)面較模糊,有關(guān)節(jié)軟骨及骨破壞。3.1.3 AA大鼠血清PMPs陽(yáng)性表達(dá)率的變化及XFC對(duì)其影響與NC組比較,MC、MTX、XFCL、XFCH組PMPs均明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),XFCM組PMPs略有升高,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與MC組比較,MTX、XFCL、XFCM、XFCH組PMPs均顯著下降(P0.01);與MTX組比較,XFCM組PMPs降低(P0.05),而XFCL、XFCH組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.1.4 AA大鼠血清細(xì)胞因子IL-6、IL-10、VEGF水平的變化及XFC對(duì)其影響與NC組比較,MC、XFCL、XFCH、MTX組IL-6、VEGF均明顯升高、IL-10明顯降低(P0.01),XFCM組IL-6升高、IL-10降低(P0.01),VEGF有所升高,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與MC組相比,XFCL、XFCM、XFCH、MTX組IL-6、VEGF明顯降低、IL-10顯著升高(P0.05或P0.01);與MTX組比較,XFCM組VEGF明顯降低(P0.05)。3.1.5 AA大鼠腹主動(dòng)脈組織PI3K、AKT的表達(dá)變化及XFC的影響在大鼠腹主動(dòng)脈組織中,與NC組比較,MC、MTX、XFCL、XFCM、XFCH組PI3K、AKT均明顯上升(P0.01);與MC組比較,MTX、XFCL、XFCM、XFCH組PI3K、AKT均明顯降低(P0.01);與MTX組比較,XFCL、XFCM、XFCH組PI3K明顯上升(P0.01),AKT升高(P0.01或P0.05)。3.1.6 AA大鼠PLT超微結(jié)構(gòu)變化及XFC對(duì)其影響電鏡下可見:NC組血小板呈橢圓形、表面光滑,偽足少見,胞質(zhì)內(nèi)可見散在的α顆粒、線粒體及囊泡狀開放的管道系統(tǒng);MC組血小板伸出偽足,部分脫落形成囊泡狀PMPs,胞質(zhì)結(jié)構(gòu)明顯損傷,胞質(zhì)內(nèi)α顆粒、線粒體減少;MTX組血小板偽足突起較MC組減少,α顆粒、線粒體較MC組增多,部分胖脹、空泡樣變;XFCL組血小板有較多偽足突起,α顆粒、線粒體較MC組增多,較MTX組減少,部分腫脹、空泡樣變;XFCM組血小板無(wú)偽足,基本保存橢圓形結(jié)構(gòu),α顆粒、線粒體明顯較MTX組增多,少數(shù)空泡化;XFCH組血小板有少許偽足突起,α顆粒、線粒體明顯增多。3.2臨床研究結(jié)果3.2.1 RA患者PMPs、細(xì)胞因子的變化及相關(guān)性研究共檢測(cè)20例NC組及60例RA組的PMPs陽(yáng)性表達(dá)率、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、VEGF水平,與NC組比較,RA組的PMPs、IL-1、IL-6、TNF-α、VEGF水平均有明顯升高,IL-4和IL-10明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;相關(guān)性分析顯示,PMPs與IL-1、IL-6、TNF-α、VEGF呈正相關(guān),與IL4、IL-10呈負(fù)相關(guān)。3.2.2 RA患者PMPs、細(xì)胞因子與相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性研究相關(guān)性分析顯示,PMPs與ESR、CRP、PLT均呈正相關(guān),IL-1、TNF-α與ESR呈正相關(guān),IL-6、VEGF與CRP呈正相關(guān);關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛與PMPs、IL-1、IL-6、TNF-α均呈正相關(guān)與IL-4呈負(fù)相關(guān)(P0.05或P0.01);關(guān)節(jié)腫脹與IL-10呈負(fù)相關(guān),晨僵與PMPs、IL-1、IL-6、呈正相關(guān);生活質(zhì)量總積分與PMPs、IL-1、TNF-α呈正相關(guān)(P0.05);DAS28與PMPs、IL-1、IL-6、TNF-α呈正相關(guān),與IL-10呈負(fù)相關(guān)。3.2.3三組病例臨床療效比較ACR20/50/70卡方檢驗(yàn)P值0.05,說(shuō)明三組間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但由表中的數(shù)值可以看出,MTX+XFC組的療效要略優(yōu)于MTX組和XFC組。3.2.4三組RA病例治療前后PMPs與細(xì)胞因子的變化情況與治療前相比,三組藥物治療后PMPs、IL-1、IL-6、TNF-α、VEGF均明顯降低(P0.05或(P0.01),IL-4、IL-10顯著升高(P0.05或P0.01);治療后,與MTX組相比,MTX+XFC組PMPs、IL-6、TNF-α降低(P0.01);IL-4、IL-10升高(P0.05或(P0.01),XFC組IL-1、VEGF有所升高(P0.05或P0.01)。3.2.5三組RA病例治療前后相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)變化情況與治療前比較,三組藥物治療后ESR、CRP、PLT均明顯降低(P0.05或P0.01),中醫(yī)癥候體征積分各項(xiàng)及總積分、生活質(zhì)量積分各項(xiàng)、HAQ、DAS28、SAS、SDS均有明顯降低(P0.05或P0.01);治療后,與MTX組比較,MTX+XFC組CRP降低更明顯(P0.05),治療后關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、少氣懶言、食欲減退明顯改善(P0.05),AQT、社會(huì)功能、心理功能、健康自我認(rèn)識(shí)能力均有所改善(P0.05或P0.01),HAQ、DAS28、SDS明顯降低(P0.05),XFC組少氣懶言、食欲減退降低(P0.05)。4結(jié)論4.1 AA大鼠會(huì)出現(xiàn)體質(zhì)量下降以及類似RA的關(guān)節(jié)炎癥的表現(xiàn)和病理結(jié)構(gòu),而XFC能改善大鼠的關(guān)節(jié)炎癥表現(xiàn)及滑膜的病理結(jié)構(gòu),降低滑膜炎癥,抑制血管翳增生,且對(duì)大鼠生長(zhǎng)無(wú)不良影響。4.2 AA大鼠體內(nèi)確實(shí)存在PMPs的釋放和PLT活化,而XFC能抑制AA大鼠體內(nèi)PMPs的釋放和PLT活化,且中劑量的XFC作用優(yōu)于MTX。4.3 AA大鼠體內(nèi)存在促炎因子和血管活性因子的升高以及抑炎因子的降低,而XFC可以通過平衡細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)發(fā)揮抑制炎癥發(fā)應(yīng)和滑膜血管新生的作用,且中劑量XFC的效果更加明顯。4.4 AA大鼠體內(nèi)存在PI3K/Akt信號(hào)通路的上調(diào),而XFC可以有效的調(diào)節(jié)AA大鼠腹主動(dòng)脈組織中PI3K/Akt信號(hào)通路水平,且作用優(yōu)于MTX。4.5 PMPs可通過促進(jìn)關(guān)節(jié)滑膜炎癥反應(yīng)以及滑膜血管翳的形成,從而在RA的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。4.6 XFC可通過下調(diào)PI3K/Akt通路,降低PMPs陽(yáng)性表達(dá)率,維持細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的平衡,從而改善RA滑膜炎癥和血管翳增生,達(dá)到治療RA的目的。4.7 RA患者體內(nèi)存在PMPs的釋放,其中促炎因子和血管活性因子的升高以及抑炎因子的降低與PMPs的釋放有關(guān)。4.8 PMPs與RA患者的疾病活動(dòng)度及關(guān)節(jié)癥狀呈正比。4.9 XFC能顯著抑制RA患者體內(nèi)PMPs的釋放。4.10 XFC能夠顯著提高RA患者外周血中抑炎因子,降低促炎因子和血管活性因子的表達(dá)。4.11 XFC能明顯緩解RA患者的疾病活動(dòng)度,改善局部和全身癥狀、生活質(zhì)量以及精神狀態(tài);且在改善少氣懶言、食欲減退方面優(yōu)于MTX。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R259

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7 劉瑋;中國(guó)漢族人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血基因表達(dá)譜研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

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9 李萍;調(diào)節(jié)性T細(xì)胞異常在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病中作用的研究[D];吉林大學(xué);2006年

10 黃繡媚(Wong Sau Mui);汪悅教授診治類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎經(jīng)驗(yàn)與用藥特色分析[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 祝靜;雌激素對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血單個(gè)核細(xì)胞microRNAs表達(dá)的影響[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

2 孫鳳艷;濾泡輔助性T細(xì)胞及白介素-21在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血和關(guān)節(jié)滑液中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 牟方祥;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的心理健康狀況及其與生命質(zhì)量的關(guān)系研究[D];西南大學(xué);2015年

4 王巧靈;關(guān)節(jié)超聲對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診療的意義[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

5 劉韋;小分子SYK抑制化合物HL131078對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的治療作用[D];蘇州大學(xué);2015年

6 鄧龍飛;基于JAK2/STAT3信號(hào)通路研究威靈仙總皂苷治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 陳本露;中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

8 王云萍;改善病情抗風(fēng)濕藥周期聯(lián)合治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎療效觀察及其對(duì)外周血GITRL表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

9 李希明;炎性因子IL-17對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血淋巴細(xì)胞P-糖蛋白的調(diào)控研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

10 朱凱;山東地區(qū)漢族人群類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與IRF5基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究及Meta分析[D];山東大學(xué);2015年

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