本文關(guān)鍵詞： 動脈硬化閉塞癥 補(bǔ)氣活血通脈丸 EPCs　出處：《河南中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過采集ASO患者外周血EPCs,以中成藥補(bǔ)氣活血通脈丸進(jìn)行干預(yù),觀察補(bǔ)氣活血通脈丸對ASO患者外周血EPCs數(shù)量及功能的影響,研究補(bǔ)氣活血通脈丸對動脈硬化閉塞癥的治療作用途徑。方法:1、ASO患者外周血EPCs的培養(yǎng)和鑒定用密度梯度離心法分離獲得ASO患者外周血單個核細(xì)胞,將其接種于預(yù)先包被好人纖維連接蛋白的培養(yǎng)瓶,加入DMEM培養(yǎng)基,培養(yǎng)4d,換液,培養(yǎng)至6d,收集貼壁細(xì)胞,置于激光共聚焦顯微鏡下,用流式細(xì)胞儀鑒定血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)。2、補(bǔ)氣活血通脈丸對ASO患者外周血EPCs數(shù)量和增殖、遷移、黏附功能的影響取培養(yǎng)6天的EPCs,隨機(jī)分組:對照組、補(bǔ)氣活血通脈丸30g/L組、補(bǔ)氣活血通脈丸60g/L組、補(bǔ)氣活血通脈丸90g/L組。用含空白血清及30g/L、60g/L、90g/L補(bǔ)氣活血通脈丸含藥血清的EBM-2培養(yǎng)基培養(yǎng)72h后,倒置相差顯微鏡下觀察EPCs生長情況,分別采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法、吸光度、Transwell小室法觀察EPCs的數(shù)量,增殖、遷移、黏附功能。結(jié)果:1、EPcs的培養(yǎng)和鑒定培養(yǎng)至第6天的單核細(xì)胞形態(tài)成長為梭型內(nèi)皮樣細(xì)胞。置于激光共聚焦顯微鏡下鑒定,Dil.acLDL和FlTC.UEA—I雙染色陽性細(xì)胞是正在分化的EPCs,流式細(xì)胞儀分析顯示,培養(yǎng)至第6天表達(dá)CD34、CDl33和VEGFR-2的細(xì)胞分別為(18.2土6.3)%、(28.5±7.2)%和(77±6.4)%。2、補(bǔ)氣活血通脈丸對ASO患者外周血EPCs數(shù)量及功能的影響結(jié)果表明:與對照組相比,30g/L、60g/L、90g/L補(bǔ)氣活血通脈丸含藥血清均能顯著增加EPCs的數(shù)量,顯著改善EPCs遷移、增值、黏附能力。以60g/L劑量補(bǔ)氣活血通脈丸含藥血清對EPCs數(shù)量和功能影響效果明顯。結(jié)論:補(bǔ)氣活血通脈丸能顯著改善ASO患者外周血EPCs數(shù)量及功能,這可能是其防治動脈硬化閉塞癥的作用機(jī)制之一。
[Abstract]:Objective: to observe the effect of Bushi Huoxue Tongmai Pill, a Chinese patent medicine, on the number and function of EPCs in peripheral blood of patients with ASO by collecting EPCs from peripheral blood of patients with ASO. To study the therapeutic effect of Buqi Huoxue Tongmai Pill on arteriosclerosis obliterans. Methods the peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from patients with ASO by density gradient centrifugation. They were inoculated in a culture bottle precoated with good fibronectin, added to DMEM medium, cultured for 4 days, changed solution, and cultured for 6 days. The adherent cells were collected and placed under confocal laser microscope. The effects of Buqi Huoxue Tongmai pills on the number, proliferation, migration and adhesion function of peripheral blood EPCs in patients with ASO were identified by flow cytometry. The EPCs cultured for 6 days were randomly divided into two groups: control group, 30 g / L group of Buqi Huoxue Tongmai pills, and 30 g / L of Buqi Huoxue Tongmai Pill. The growth of EPCs was observed under phase contrast microscope after 72 h culture on EBM-2 medium containing blank serum and 30g / L ~ (60 g / L) / L ~ (60 g / L) of Buqi Huoxue Tongmai Pill and 90 g / L Buqi Huoxue Tongmai Pill and 90 g / L Buqi Huoxue Tongmai Pill and 90 g / L Buqi Huoxue Tongmai Pill. The number, proliferation and migration of EPCs were observed by absorbance transwell chamber method. Adhesion function. Results the morphology of monocytes grew into fusiform endothelium-like cells after 6 days of culture. Dil.acLDL and FlTC.UEA-I double staining positive cells were identified as differentiated EPCs by confocal laser microscopy. The cytometer analysis showed that. On the 6th day, the expression of CD34T CDl33 and VEGFR-2 were 18.2 鹵6.3g and 28.5 鹵7.2% and 77 鹵6.4% respectively. The effect of Buqi Huoxue Tongmai Pill on the quantity and function of EPCs in peripheral blood of ASO patients showed that: compared with the control group, 30 g / L 60 g 路L ~ (90) g 路L ~ (-1) Bu Qi / L ~ (90) g 路L ~ (-1) Buqi Huoxue Tongmai Pill could contain serum. Significantly increase the number of EPCs, The effect of 60 g / L dosage of Buqi Huoxue Tongmai pills on the quantity and function of EPCs was obvious. Conclusion: Buqi Huoxue Tongmai pills can significantly improve the quantity and function of peripheral blood EPCs in patients with ASO. This may be one of the mechanisms of its prevention and treatment of arteriosclerosis obliterans.
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259

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本文編號：1508252