本文關(guān)鍵詞： 姜黃素 關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 Wnt信號通路　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis, OA)是一種以逐漸發(fā)展的關(guān)節(jié)疼痛、僵硬和活動受限為特征的慢性進(jìn)行性疾病。目前,OA的治療大多集中在解除癥狀上對關(guān)節(jié)軟骨的損傷修復(fù)和對軟骨細(xì)胞功能的調(diào)控能抑制OA的進(jìn)展。既往研究發(fā)現(xiàn),姜黃素對于OA關(guān)節(jié)軟骨組織具有多因素,多靶點的保護(hù)作用,臨床上療效確切,然而對于軟骨細(xì)胞增殖與凋亡的具體干預(yù)機(jī)制尚不明確。目的：觀察姜黃素對軟骨細(xì)胞存活及凋亡的影響,探討姜黃素抗骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡,保護(hù)軟骨組織的作用及可能機(jī)制。方法：體外分離培養(yǎng)兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,并對其生長特點和形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行觀察；應(yīng)用CCK-8法測定不同濃度的姜黃素對軟骨細(xì)胞存活率的影響；制備硝普鈉(sodium nitroprusside, SNP)誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡模型,硝酸酶還原法和流式細(xì)胞術(shù)分別觀察姜黃素對培養(yǎng)基中一氧化氮(nitric oxide, NO)含量及軟骨細(xì)胞細(xì)胞凋亡率的影響；Western blot法檢測相關(guān)蛋白Caspase-3、GSK-3p及β-catenin的表達(dá)情況。結(jié)果：(1)在12h時,80, 160μmol·L-1的姜黃素已顯現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性,與對照組比較有非常顯著的差異(P0.01),40μmol·L-1的姜黃素對細(xì)胞存活率的影響弱于80,160μmol·L-'組,但與對照組相比,已有顯著的差異(P0.05)。在24 h和48 h時,40μmol·L-1的姜黃素的細(xì)胞毒性隨著時間的遞增而增強,其細(xì)胞存活率與對照組之間有非常顯著差異(P0.01)。2.5,5,10,20μmol·L-1各個濃度的姜黃素在48 h內(nèi)均未見明顯的細(xì)胞毒性(P0.05),且各組之間無顯著性差異(P0.05)。(2)姜黃素中劑量組培養(yǎng)基中的NO含量下降最為明顯,與模型組對比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。姜黃素高劑量組與低劑量組中NO雖有下降的趨勢,但與模型組相比,無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。高劑量的姜黃素對于軟骨細(xì)胞凋亡率的降低作用最強,與模型組和中、低劑量組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；低劑量組與模型組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3) Western blot結(jié)果顯示：模型組的Caspase-3, GSK-3p和3-catenin蛋白表達(dá)水平明顯高于正常組(P0.01),姜黃素高劑量組的Caspase-3, GSK-3p和β-catenin表達(dá)與模型組比較明顯減少(P0.05或P0.01),中劑量組的Caspase-3和β-catenin蛋白表達(dá)下降(P0.05),而低劑量組的蛋白表達(dá)水平雖有下降趨勢,但與模型組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：(1)在不同時間節(jié)點,各個濃度的姜黃素都未見對軟骨細(xì)胞的增殖有明顯的促進(jìn)作用。姜黃素對體外培養(yǎng)的兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞存在一定的安全濃度范圍(0-20μmol·L-1),超過40 μmol·L-1的濃度存在明顯的細(xì)胞毒性,且作用時間越長,細(xì)胞的存活率越低。(2)體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞在凋亡過程中可釋放大量NO至培養(yǎng)基中。姜黃素可下調(diào)凋亡軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基中的NO含量,抑制SNP誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡。中劑量的姜黃素在降低培養(yǎng)基中NO含量方面優(yōu)于其他干預(yù)組,而高劑量姜黃素對軟骨細(xì)胞凋亡的抑制作用更為顯著。(3) Wnt/p-catenin信號通路可能參與了軟骨細(xì)胞凋亡的過程,姜黃素能抑制體外SNP誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與下調(diào)Wnt/β-catenin信號通路中的關(guān)鍵蛋白GSK-3p,β-catenin及凋亡相關(guān)分子Caspase-3的表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:Objective : To observe the effect of curcumin on the survival and apoptosis of articular cartilage . ( 2 ) There was no significant difference in the expressions of Caspase - 3 , 3 - catenin and 尾 - catenin in cultured rabbit knee articular chondrocytes compared with model group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R274

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本文編號：1503423