本文關(guān)鍵詞： 藏藥 “蒂達(dá)” 中國(guó)沙棘 DNA條形碼 品種鑒定 GIS Maxent模型 生態(tài)適宜區(qū)　出處：《成都中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：近年來(lái),隨著市場(chǎng)需求和自然環(huán)境變化的影響,藏藥資源遭到破壞。因此,摸清藏藥資源分布狀況、開展野生資源的保護(hù)顯得尤為緊迫。另一方面,藏藥長(zhǎng)期存在的“同名異物”、“同物異名”等多基原現(xiàn)象,導(dǎo)致藏藥品種鑒定困難,嚴(yán)重影響了藏藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)研究。本文分為兩個(gè)部分：第一,以復(fù)雜多基原藏藥“蒂達(dá)”((?))為研究對(duì)象,重點(diǎn)采用DNA條形碼開展其品種鑒定研究；第二,以常用藏藥中國(guó)沙棘Hippophae rhamnoides L. subsp. sinensis Rousi為研究對(duì)象,開展其資源調(diào)查、規(guī)范化種植、生態(tài)適宜區(qū)劃、化學(xué)成分積累與生態(tài)因子相關(guān)性研究。以期為藏藥品種鑒定、野生資源保護(hù)和適宜區(qū)推廣人工栽培種植提供科學(xué)依據(jù)。目的：建立藏藥“蒂達(dá)”的DNA條形碼鑒定方法；對(duì)中國(guó)沙棘進(jìn)行科學(xué)的潛在分布預(yù)測(cè)和適生等級(jí)劃分；確定影響中國(guó)沙棘葉黃酮類成分積累的生態(tài)因子及其最佳范圍。方法：1.采用試劑盒法對(duì)藏藥“蒂達(dá)”提取總DNA,采用通用引物ITS2(2F/3R)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并對(duì)擴(kuò)增成功的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。同時(shí)對(duì)序列進(jìn)行拼接、比對(duì),計(jì)算種內(nèi)種間K2P距離,構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化NJ樹,評(píng)價(jià)其barcoding gap,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)藏藥“蒂達(dá)”的DNA條形碼分子鑒定；2.從全球氣候數(shù)據(jù)庫(kù)中提取生態(tài)因子,基于Maxent模型設(shè)置ROC評(píng)價(jià)曲線,同時(shí)運(yùn)用ArcGIS軟件,對(duì)中國(guó)沙棘進(jìn)行適宜區(qū)區(qū)劃研究；3.采用TLC法對(duì)中國(guó)沙棘葉黃酮類成分進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法對(duì)不同產(chǎn)地中國(guó)沙棘葉黃酮類成分進(jìn)行含量測(cè)定；對(duì)17批次不同產(chǎn)地中國(guó)沙棘葉進(jìn)行HPLC特征指紋圖譜研究,構(gòu)建準(zhǔn)確可靠的中國(guó)沙棘葉色譜指紋圖譜。4.應(yīng)用Pearson相關(guān)分析、逐步回歸分析和偏最小二乘回歸法(PLSR),分析不同產(chǎn)地中國(guó)沙棘葉化學(xué)成分與其生態(tài)因子間的相關(guān)性。結(jié)果：1.ITS2序列可準(zhǔn)確鑒定龍膽科藏藥“蒂達(dá)”類藥材：樣品共151條序列,比對(duì)后序列長(zhǎng)度達(dá)231 bp；平均GC含量為61.40%,種內(nèi)變異大,共31個(gè)單倍型。其中四數(shù)獐牙菜Swertia tetraptera、祁連獐牙菜S. przewalskii、鐮萼喉毛花Comastoma falcatum、輻狀肋柱花Lomatogonium rotatum各只有1個(gè)單倍型。13個(gè)“蒂達(dá)”物種中,除二葉獐牙菜S. bifolia和華北獐牙菜S. wolfangiana2個(gè)種外,11個(gè)物種均能準(zhǔn)確鑒定。2.課題組建立了產(chǎn)業(yè)化治沙科技試驗(yàn)示范基地、紅原縣藏醫(yī)院沙棘規(guī)范化栽培示范基地和松潘縣川主寺貝母基地(沙棘規(guī)范化栽培示范基地)等3個(gè)沙棘防沙漠化規(guī)范化栽培示范基地,共計(jì)6畝�；贛axent模型區(qū)劃結(jié)果表明：中國(guó)沙棘在我國(guó)分布的適宜指數(shù)為0-0.708。適宜區(qū)面積大59.05萬(wàn)km~2,占全國(guó)總面積的6.13%,分布范圍涉及山西、陜西、寧夏、四川、甘肅、青海、四川、西藏、內(nèi)蒙古、遼寧等10個(gè)省(自治區(qū))；較適宜區(qū)面積達(dá)55.25萬(wàn)km~2,占全國(guó)總面積的5.73%,分布范圍包括河北、遼寧、內(nèi)蒙古省(自治區(qū))。3.以槲皮素、山柰素和異鼠李素為對(duì)照品建立了中國(guó)沙棘葉的薄層色譜鑒別方法；17批次中國(guó)沙棘葉HPLC含量測(cè)定結(jié)果表明：槲皮素含量在0.1929%-0.5236%之間、異鼠李素含量在0.2242%-0.6236%之間、山柰素含量在0.0772%-0.1775%之間�？梢�,不同產(chǎn)地間中國(guó)沙棘葉中槲皮素、山柰素和異鼠李素含量差異明顯；不同批次的中國(guó)沙棘葉HPLC指紋圖譜研究結(jié)果顯示,17批次中國(guó)沙棘葉共有14個(gè)共有峰,與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照,可確定山柰素-3-O-β-D-槐二糖-7-O-a-L-鼠李糖苷、異鼠李素-3-O-p-D-槐二糖-7-O-a-L-鼠李糖苷、異鼠李素-3-0-p-D-葡萄糖-7-O-a-L-鼠李糖苷、蘆丁、異鼠李素-3-O-p-D-葡萄糖苷等5個(gè)色譜峰。對(duì)17批中國(guó)沙棘葉的特征指紋圖譜進(jìn)行相似度計(jì)算,結(jié)果表明17批樣品中,相似度均在0.80以上,來(lái)自四川省阿壩州紅原縣、西藏拉薩市達(dá)孜縣、西藏拉薩市曲水縣、陜西省晉中市4批次相似度小于0.9,其余13批次相似度達(dá)0.9以上。4.確定了影響中國(guó)沙棘葉中槲皮素、山柰素和異鼠李素含量積累的主導(dǎo)生態(tài)因子及其最佳范圍,在最佳范圍內(nèi),相應(yīng)化合物含量最高,具體如下：影響槲皮素積累的主導(dǎo)因子為海拔高度、1月月均降水量和8月月均降水量,其最佳范圍分別為3009-3320 m、4.0-6.0mm和118-152mm；影響山柰素含量積累的主導(dǎo)因子為海拔高度、最冷季度降水量、12月月均降水量和3月平均氣溫,其最佳范圍分別為2999-3315 m、9.0-12.0mm、1.0-2.0 mm和-1.9-0.1℃；影響異鼠李素含量積累的主導(dǎo)因子為8月月均降水量、1月月均降水量、最冷季度降水量和海拔高度；其最佳范圍分別為：118-122mm、4.0-5.0 mm、13.0-22.0 mm和3158-3568 m。結(jié)論：1.DNA條形碼能夠快速、準(zhǔn)確鑒定龍膽科藏藥“蒂達(dá)”類藥材。在鑒定工作中,應(yīng)綜合運(yùn)用不同鑒定手段,以達(dá)到鑒定目的。2.中國(guó)沙棘適宜區(qū)分布在我國(guó)10省(自治區(qū)),其適宜區(qū)域和較適宜區(qū)面積廣,資源數(shù)量大,適合可持續(xù)開發(fā)利用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R29

【參考文獻(xiàn)】

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