本文關鍵詞：養(yǎng)陰益氣活血法阻斷糖尿病GK大鼠“代謝記憶”的分子機制探索　出處：《成都中醫(yī)藥大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的：應用高通量的分子生物學技術從全基因組的宏觀角度探索養(yǎng)陰益氣活血法阻斷自發(fā)性糖尿病GK大鼠“代謝記憶”的分子機制,拓展糖尿病大血管病變的防治思路,揭示中醫(yī)學整體觀念的理論優(yōu)勢。方法：將50只GK大鼠隨機分為5組：模型組(M)、格華止組(G)、參芪復方高劑量組(SH)、參芪復方中劑量組(SM)、參芪復方低劑量組(SL)。連續(xù)12周以高脂飼料喂養(yǎng),建立糖尿病代謝記憶模型。另設正常Wistar大鼠10只,作為空白組(C),予普通飼料喂養(yǎng),平行對照。造模12周后,SH、SM、SL組分別予高、中、低劑量參芪復方浸膏灌胃,G組予格華止混懸液灌胃,C、M組灌服生理鹽水。藥物干預期間每周監(jiān)測動物體質量、飲水量、攝食量、空腹血糖(FPG)。干預16周后處死,HE、Masson染色觀察各組動物主動脈病理形態(tài)學,TUNE L染色觀察血管內皮細胞凋亡情況；檢測主動脈組織勻漿內SOD活力、MDA含量、GSH-Px活力；檢測血清8-iso-PGF2α、ox-LDL濃度；進行主動脈組織Affymetrix IVT表達譜芯片及甲基化DNA免疫共沉淀測序,將差異基因進行GO、Passway富集,進一步分析檢測結果的生物學意義。結果：干預16周后,M組與C組比較,體質量下降,飲水量升高,攝食量無明顯差異,FPG明顯升高；SH、SM、SL組動物飲水量、攝食量、FPG均較M組下降,飲水量較G組減少,攝食量、FPG較G組增多；SH、SM、SL組體質量較M、G組上升；主動脈形態(tài)病理改變的程度：MSLGSMSHC; G、 SH, SM、SL主動脈中膜厚度顯著大于M組,膠原纖維與管腔面積比均顯著小于M組,其中SH組膠原纖維比例最低；血管內皮細胞凋亡程度：MSLSM GSHC; G、SM、SL組主動脈勻漿MDA含量顯著低于M組,其中SM組含量最低：主動脈中SOD、GSH-Px活力及血清8-iso-PGF2α濃度組間無明顯差異。全基因組表達譜和DNA甲基化的檢測發(fā)現,M組與C組比較,基因表達和DNA甲基化程度都存在廣泛差異,主要趨勢為普遍的DNA甲基化程度增高和mRNA表達量減低；G、SH、SM、SL組的甲基化程度較M組大幅降低；G、SH、SM組的mRNA表達較M組顯著升高,其中SH組顯著高于G組；SH與M組之間差異基因KE GG分析篩選出的Passway與M和C組差異基因的Passway高度重合,且兩組間差異基因富集的Passway數量較SM與M組間的富集結果為多,G與M組間差異基因富集的Passway數量最少；各組間DNA甲基化數據GO與KEGG富集所涉及的基因功能和Passway與mRNA水平的調控基本一致,主要涉及激素分泌、心血管疾病、免疫調節(jié)、細胞遷移、粘附、增殖、分化等；相比M組,SH、G組主動脈組織內Map2k1基因的表達水平均顯著降低；Rac1及其上游調控基因Vav家族在SH組的表達顯著升高,而G組則未發(fā)現Rac1的表達與M組間的差異,G組Vav家族的表達量較M組減少。結論：養(yǎng)陰益氣活血法可以有效阻斷糖尿病“代謝記憶”,從而延緩大鼠動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展,而該作用的發(fā)揮依賴足夠的藥物濃度；養(yǎng)陰益氣活血法可能通過糾正“代謝記憶”動物DNA超甲基化的狀態(tài),廣泛而精準地恢復了mRNA的表達水平,從而發(fā)揮阻斷“代謝記憶”的作用;養(yǎng)陰益氣活血法通過促進Rac1的表達,抑制Map2k1的表達,對細胞增殖、粘附功能發(fā)揮調節(jié)作用,可能因此對血管內皮細胞的生長進行了良性的雙向調節(jié),進而參與阻斷糖尿病“代謝記憶”；養(yǎng)陰益氣活血法表現出更為良好的阻斷糖尿病“代謝記憶”作用可能緣于中醫(yī)學扶正祛邪的理論優(yōu)勢。
[Abstract]:鐩殑錛氬簲鐢ㄩ珮閫氶噺鐨勫垎瀛愮敓鐗╁鎶，

本文編號：1396215