本文關鍵詞：高頻超聲引導深刺“環(huán)跳”穴對坐骨神經損傷大鼠磷酸化p38、p53蛋白表達的影響　出處：《遼寧中醫(yī)藥大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 針刺效應 坐骨神經損傷 神經元凋亡 p38絲裂原激活蛋白激酶信號通路 高頻超聲

【摘要】：目的:本研究通過制作坐骨神經卡壓損傷大鼠模型,利用小動物超聲影像系統(tǒng)引導針刺深度,采取神經電生理、坐骨神經功能指數(shù)、蛋白質免疫印跡法和免疫組化技術等,觀察大鼠坐骨神經損傷修復情況以及背根神經節(jié)磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶(p38Mitogen-activated Protein Kinase,p38MAPK)、p53蛋白表達變化,探討深刺“環(huán)跳”對坐骨神經損傷大鼠神經細胞凋亡抑制作用以及對p38MAPK信號通路的影響。材料與方法:SPF級SD大鼠48只,月齡2-3個月,體質量(250±50)g,雌雄各半。按照隨機數(shù)字表法隨機分為4組,包括空白對照組(Na?ve group)、坐骨神經卡壓模型組(Cuff group)、環(huán)跳淺刺組(shallow EA-GB30 group)、環(huán)跳深刺組(deep EA-GB30 group),每組12只。根據(jù)Mackinnons等方法制作坐骨神經硅膠管卡壓損傷大鼠模型,于造模第14d、28d測定神經電生理和坐骨神經功能指數(shù)�？瞻捉M和模型組常規(guī)喂養(yǎng),作固定處理。治療組分別在小動物超聲影像系統(tǒng)引導下行針刺治療,環(huán)跳深刺組毫針針刺深度約皮下12-14mm,以針尖觸及坐骨神經干為宜;環(huán)跳淺刺組毫針針刺深度約皮下5-8mm,以針尖至環(huán)跳穴下方肌肉層,不觸及坐骨神經干為度。連接SDZ-Ⅱ電針治療儀,電針采用疏密波,頻率2/100Hz,電流1m A,刺激時間15min,電針治療1次/d,連續(xù)治療14d。治療結束后大鼠取材,取坐骨神經損傷處上下共11mm組織、患側L4-L5背根神經節(jié),蘇木精-伊紅染色法觀察坐骨神經形態(tài)變化,原位末端標記法(Td T-mediated d UTP nicked labeling,TUNEL)檢測L4-L5背根神經節(jié)神經細胞凋亡數(shù),蛋白質免疫印跡法和免疫組化技術分別檢測坐骨神經損傷處白細胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase 2,COX-2),患側L4-L5背根神經節(jié)MAPK激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase 3,MKK3)、磷酸化p38(Phosphor-p38,P-p38)、磷酸化p53(Phosphor-p53,P-p53)蛋白表達水平,并對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。結果:1.神經電生理檢測造模第14d,與空白對照組比較,造模組有明顯差別(P0.05),造模第28d,治療組與模型組差異明顯(P0.05),環(huán)跳深刺組大鼠坐骨神經干運動神經傳導速度(Motor nerve conductive velocity,MNCV)大于環(huán)跳淺刺組(P0.05)。2.坐骨神經功能指數(shù)(Sciatic nerve function index,SFI)造模第14d,空白對照組與坐骨神經卡壓模型組對比有明顯差別(P0.05),造模第28d,治療組與模型組差異明顯(P0.05),環(huán)跳深刺組大鼠坐骨神經SFI評價高于環(huán)跳淺刺組(P0.05)。3.坐骨神經蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin staining,HE染色)大鼠坐骨神經損傷處HE染色結果顯示:空白組坐骨神經神經纖維分布均勻,結構致密,髓鞘、朗飛結清晰可見;與空白組比較,模型組坐骨神經纖維排列紊亂,軸突崩解,部分髓鞘呈空泡狀;電針治療組坐骨神經神經纖維排列較規(guī)則,部分髓鞘脫落,雪旺細胞增殖明顯,其中環(huán)跳深刺組神經纖維排列更規(guī)則。4.原位末端標記法(Td T-mediated d UTP nicked labeling,TUNEL)檢測結果TUNEL法標記結果顯示:凋亡的神經元顯示為細胞皺縮明顯,細胞核固縮,或細胞破裂成碎片狀;空白組可見少量凋亡細胞,治療組標記的凋亡細胞數(shù)明顯少于模型組(P0.05),深刺組神經細胞凋亡數(shù)低于淺刺組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.免疫組化、蛋白質免疫印跡(Western Blot,WB)檢測與空白組比較,模型組IL-1β、COX-2在坐骨神經損傷部位表達增多(P0.05);與模型組比較,治療組IL-1β、COX-2表達下降,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05),其中深刺組表達水平低于環(huán)跳淺刺組(P0.05)。P-p38在空白組中少量呈現(xiàn),細胞呈棕黃色的包漿,或細胞核著色,多呈圓形或橢圓形;與空白組比較,模型組P-p38表達水平升高(P0.05);治療組P-p38蛋白表達水平低于模型組,差異明顯(P0.05),其中深刺組表達水平低于淺刺組(P0.05)。MKK3表達水平:與空白組比較,模型組表達水平上升,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,治療組MKK3表達水平下降,差異明顯(P0.05),其中深刺組表達水平低于淺刺組(P0.05)。P-p53表達水平:模型組與空白組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與模型組比較,治療組P-p53表達水平下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),其中深刺組下降幅度大于淺刺組(P0.05)。結論:1.電針“環(huán)跳”穴不同組織部位,能明顯改善坐骨神經神經電生理和坐骨神經功能指數(shù),改善坐骨神經病理形態(tài)學變化,“環(huán)跳”深刺組療效優(yōu)于淺刺組。2.電針“環(huán)跳”穴不同組織部位,能明顯抑制炎癥因子IL-1β、COX-2在坐骨神經損傷處表達;降低L4-L5背根神經節(jié)神經細胞凋亡數(shù),同時還能抑制患側背根神經節(jié)MKK3P-p38、P-p53蛋白磷酸化表達,提示電針“環(huán)跳”穴對坐骨神經損傷大鼠神經細胞凋亡抑制作用,可能是通過調節(jié)p38MAPK信號轉導通路來實現(xiàn)的。3.電針深刺“環(huán)跳”穴對坐骨神經損傷大鼠MNCV、SFI、坐骨神經病理形態(tài)改變,以及其抑制神經元凋亡,調控p38MAPK信號轉導通路相關影響,可能與深刺“環(huán)跳”穴觸及神經干有關。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of deep needling on the apoptosis of sciatic nerve in rats with sciatic nerve injury induced by sciatic nerve injury in rats . The expression level of interleukin - 1尾 ( IL - 1尾 ) , phosphorylated p38 ( P - p38 ) , phosphorylated p53 ( P - p38MAPK ) , phosphorylated p38 ( P - p38 ) and phosphorylated p53 ( P - p53 ) in sciatic nerve were significantly different ( P0.05 ) . Compared with the blank group , the expression level of IL - 1尾 and COX - 2 in the treatment group was lower than that in the model group ( P0.05 ) . The expression level of P - p38 protein in the treatment group was lower than that in the model group ( P0.05 ) . Conclusion : 1 . Compared with model group , the expression level of P - p53 in sciatic nerve is significant ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R245

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本文編號：1393910