本文關(guān)鍵詞：高頻超聲引導(dǎo)深刺“環(huán)跳”穴對(duì)坐骨神經(jīng)損傷大鼠磷酸化p38、p53蛋白表達(dá)的影響　出處：《遼寧中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:本研究通過(guò)制作坐骨神經(jīng)卡壓損傷大鼠模型,利用小動(dòng)物超聲影像系統(tǒng)引導(dǎo)針刺深度,采取神經(jīng)電生理、坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、蛋白質(zhì)免疫印跡法和免疫組化技術(shù)等,觀察大鼠坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)情況以及背根神經(jīng)節(jié)磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶(p38Mitogen-activated Protein Kinase,p38MAPK)、p53蛋白表達(dá)變化,探討深刺“環(huán)跳”對(duì)坐骨神經(jīng)損傷大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡抑制作用以及對(duì)p38MAPK信號(hào)通路的影響。材料與方法:SPF級(jí)SD大鼠48只,月齡2-3個(gè)月,體質(zhì)量(250±50)g,雌雄各半。按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組,包括空白對(duì)照組(Na?ve group)、坐骨神經(jīng)卡壓模型組(Cuff group)、環(huán)跳淺刺組(shallow EA-GB30 group)、環(huán)跳深刺組(deep EA-GB30 group),每組12只。根據(jù)Mackinnons等方法制作坐骨神經(jīng)硅膠管卡壓損傷大鼠模型,于造模第14d、28d測(cè)定神經(jīng)電生理和坐骨神經(jīng)功能指數(shù)�？瞻捉M和模型組常規(guī)喂養(yǎng),作固定處理。治療組分別在小動(dòng)物超聲影像系統(tǒng)引導(dǎo)下行針刺治療,環(huán)跳深刺組毫針針刺深度約皮下12-14mm,以針尖觸及坐骨神經(jīng)干為宜;環(huán)跳淺刺組毫針針刺深度約皮下5-8mm,以針尖至環(huán)跳穴下方肌肉層,不觸及坐骨神經(jīng)干為度。連接SDZ-Ⅱ電針治療儀,電針采用疏密波,頻率2/100Hz,電流1m A,刺激時(shí)間15min,電針治療1次/d,連續(xù)治療14d。治療結(jié)束后大鼠取材,取坐骨神經(jīng)損傷處上下共11mm組織、患側(cè)L4-L5背根神經(jīng)節(jié),蘇木精-伊紅染色法觀察坐骨神經(jīng)形態(tài)變化,原位末端標(biāo)記法(Td T-mediated d UTP nicked labeling,TUNEL)檢測(cè)L4-L5背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù),蛋白質(zhì)免疫印跡法和免疫組化技術(shù)分別檢測(cè)坐骨神經(jīng)損傷處白細(xì)胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase 2,COX-2),患側(cè)L4-L5背根神經(jīng)節(jié)MAPK激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase 3,MKK3)、磷酸化p38(Phosphor-p38,P-p38)、磷酸化p53(Phosphor-p53,P-p53)蛋白表達(dá)水平,并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1.神經(jīng)電生理檢測(cè)造模第14d,與空白對(duì)照組比較,造模組有明顯差別(P0.05),造模第28d,治療組與模型組差異明顯(P0.05),環(huán)跳深刺組大鼠坐骨神經(jīng)干運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(Motor nerve conductive velocity,MNCV)大于環(huán)跳淺刺組(P0.05)。2.坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(Sciatic nerve function index,SFI)造模第14d,空白對(duì)照組與坐骨神經(jīng)卡壓模型組對(duì)比有明顯差別(P0.05),造模第28d,治療組與模型組差異明顯(P0.05),環(huán)跳深刺組大鼠坐骨神經(jīng)SFI評(píng)價(jià)高于環(huán)跳淺刺組(P0.05)。3.坐骨神經(jīng)蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin staining,HE染色)大鼠坐骨神經(jīng)損傷處HE染色結(jié)果顯示:空白組坐骨神經(jīng)神經(jīng)纖維分布均勻,結(jié)構(gòu)致密,髓鞘、朗飛結(jié)清晰可見(jiàn);與空白組比較,模型組坐骨神經(jīng)纖維排列紊亂,軸突崩解,部分髓鞘呈空泡狀;電針治療組坐骨神經(jīng)神經(jīng)纖維排列較規(guī)則,部分髓鞘脫落,雪旺細(xì)胞增殖明顯,其中環(huán)跳深刺組神經(jīng)纖維排列更規(guī)則。4.原位末端標(biāo)記法(Td T-mediated d UTP nicked labeling,TUNEL)檢測(cè)結(jié)果TUNEL法標(biāo)記結(jié)果顯示:凋亡的神經(jīng)元顯示為細(xì)胞皺縮明顯,細(xì)胞核固縮,或細(xì)胞破裂成碎片狀;空白組可見(jiàn)少量凋亡細(xì)胞,治療組標(biāo)記的凋亡細(xì)胞數(shù)明顯少于模型組(P0.05),深刺組神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)低于淺刺組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.免疫組化、蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)檢測(cè)與空白組比較,模型組IL-1β、COX-2在坐骨神經(jīng)損傷部位表達(dá)增多(P0.05);與模型組比較,治療組IL-1β、COX-2表達(dá)下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中深刺組表達(dá)水平低于環(huán)跳淺刺組(P0.05)。P-p38在空白組中少量呈現(xiàn),細(xì)胞呈棕黃色的包漿,或細(xì)胞核著色,多呈圓形或橢圓形;與空白組比較,模型組P-p38表達(dá)水平升高(P0.05);治療組P-p38蛋白表達(dá)水平低于模型組,差異明顯(P0.05),其中深刺組表達(dá)水平低于淺刺組(P0.05)。MKK3表達(dá)水平:與空白組比較,模型組表達(dá)水平上升,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,治療組MKK3表達(dá)水平下降,差異明顯(P0.05),其中深刺組表達(dá)水平低于淺刺組(P0.05)。P-p53表達(dá)水平:模型組與空白組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,治療組P-p53表達(dá)水平下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中深刺組下降幅度大于淺刺組(P0.05)。結(jié)論:1.電針“環(huán)跳”穴不同組織部位,能明顯改善坐骨神經(jīng)神經(jīng)電生理和坐骨神經(jīng)功能指數(shù),改善坐骨神經(jīng)病理形態(tài)學(xué)變化,“環(huán)跳”深刺組療效優(yōu)于淺刺組。2.電針“環(huán)跳”穴不同組織部位,能明顯抑制炎癥因子IL-1β、COX-2在坐骨神經(jīng)損傷處表達(dá);降低L4-L5背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù),同時(shí)還能抑制患側(cè)背根神經(jīng)節(jié)MKK3P-p38、P-p53蛋白磷酸化表達(dá),提示電針“環(huán)跳”穴對(duì)坐骨神經(jīng)損傷大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡抑制作用,可能是通過(guò)調(diào)節(jié)p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。3.電針深刺“環(huán)跳”穴對(duì)坐骨神經(jīng)損傷大鼠MNCV、SFI、坐骨神經(jīng)病理形態(tài)改變,以及其抑制神經(jīng)元凋亡,調(diào)控p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)影響,可能與深刺“環(huán)跳”穴觸及神經(jīng)干有關(guān)。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of deep needling on the apoptosis of sciatic nerve in rats with sciatic nerve injury induced by sciatic nerve injury in rats . The expression level of interleukin - 1尾 ( IL - 1尾 ) , phosphorylated p38 ( P - p38 ) , phosphorylated p53 ( P - p38MAPK ) , phosphorylated p38 ( P - p38 ) and phosphorylated p53 ( P - p53 ) in sciatic nerve were significantly different ( P0.05 ) . Compared with the blank group , the expression level of IL - 1尾 and COX - 2 in the treatment group was lower than that in the model group ( P0.05 ) . The expression level of P - p38 protein in the treatment group was lower than that in the model group ( P0.05 ) . Conclusion : 1 . Compared with model group , the expression level of P - p53 in sciatic nerve is significant ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R245

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本文編號(hào)：1393910