本文關(guān)鍵詞：芪藶強心膠囊對IMCD3細胞AQP2表達的影響及其機制研究

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【摘要】：研究背景慢性心力衰竭(簡稱慢性心衰)屬于嚴重威脅人類健康的心血管疾病,水液潴留是慢性心力衰竭最主要的病理改變之一,是導(dǎo)致心源性水腫的直接原因,可進一步加重心臟功能的受損程度。水通道蛋白-2(AQP2)主要存在于腎臟集合管,在水液代謝和電解質(zhì)平衡方面起到重要的調(diào)節(jié)作用。AQP2的異常增多是導(dǎo)致水液潴留,從而造成慢性心力衰竭預(yù)后不佳的一個重要原因。因此,AQP2作為一種治療水液失衡的新興靶點受到廣泛關(guān)注,成為治療心源性水腫的重要切入點。我們前期實驗研究發(fā)現(xiàn)芪藶強心膠囊可通過抑制AQP2的表達,減少腎集合管對水的重吸收,從而改善慢性心衰大鼠的水潴留現(xiàn)象。此次試驗進一步研究芪藶強心膠囊對dDAVP誘導(dǎo)的IMCD3細胞內(nèi)AQP2表達的影響極其機制。目的探討芪藶強心膠囊對AQP2表達的影響及其表達機制,為臨床治療慢性心衰提供一定的實驗依據(jù)。方法1.體外培養(yǎng)傳代細胞株IMCD3,通過CCK8試劑盒檢測細胞增殖活性,對dDAVP濃度進行篩選,再通過Western blot檢測dDAVP誘導(dǎo)AQP2的相對表達量,進行dDAVP二次篩選,選出最佳濃度用于后續(xù)實驗。2.將芪藶強心膠囊溶于完全培養(yǎng)基(DMEM+10%FBS),配制不同濃度芪藶強心膠囊溶液,500ug/ml,750ug/ml, 1000ug/ml,1500ug/ml。通過CCK8試劑盒檢測,篩選出對細胞增殖活性無明顯影響的藥物濃度用于后續(xù)實驗。通過Western blot實驗,研究不同濃度的芪藶強心膠囊對dDAVP誘導(dǎo)IMCD3細胞表達AQP2蛋白的影響。3.(1)設(shè)置對照組(空白)、模型組(dDAVP)、加藥組(低、中、高劑量的芪藶強心膠囊),培育24h后,ELISA檢測cAMP水平,Western blot檢測p-ERK1/2和Epac1。(2)設(shè)置對照組1(空白)、模型組1(dDAVP)、對照組2(8-CPT)、模型組2(dDAVP+8-CPT)、加藥組(dDAVP+8-CPT+低、中、高劑量的芪藶強心膠囊),培育24h后,Westernblot實驗檢測AQP2, p-ERK。結(jié)果1.各濃度梯度dDAVP對IMCD3細胞增殖活性的影響并無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2.加藥組的dDAVP濃度為10-7M,10-8M, 10-9M,10-10M時,與對照組相比,AQP2的表達顯著增高(P0.05),且在10-9M的情況下AQP2相對表達最顯著,可用于后續(xù)實驗,建立模型組。3.芪藶強心膠囊在濃度為50Oug/ml,750ug/ml,1000ug/ml時對細胞增殖的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),1500ug/ml的藥物濃度對細胞增殖有明顯抑制作用,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.結(jié)果顯示低、中、高劑量組中藥均對dDAVP誘導(dǎo)的IMCD3細胞內(nèi)AQP2蛋白的表達有抑制作用(P0.05)。芪藶強心膠囊濃度越高對IMCD3細胞AQP2表達的抑制作用越明顯。5.與對照組相比,dDAVP可明顯提高IMCD3細胞內(nèi)cAMP的水平(P0.05),且芪藶強心膠囊溶液可有效降低cAMP水平(P0.05)。6.dDAVP可明顯上調(diào)Epac1和p-ERK1/2的表達(P0.05)芪藶強心膠囊濃度為750ug/ml、1000ug/ml時,對Epacl表達有顯著的下調(diào)作用(P0.05)；在不同濃度的芪藶強心膠囊溶液作用下,p-ERK1/2的表達均明顯減少(P0.05)。7.加入激動劑β-pCPT-2'-O-Me-cAMP后,無論是對照組還是模型組,其p-ERK1/2和p-AQP2的蛋白表達量明顯增加,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；芪藶強心膠囊對p-ERK1/2和p-AQP2的蛋白表達量有明顯下調(diào)作用(P0.05)。結(jié)論1.dDAVP可誘導(dǎo)IMCD3細胞的AQP2表達增高。2.芪藶強心膠囊可有效抑制在dDAVP誘導(dǎo)下高表達的AQP2。3.芪藶強心膠囊可通過cAMP/Epac/ERK1/2信號通路對AQP2的表達進行有效調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259

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2 劉春香;毛靜遠;王賢良;侯雅竹;張川;;芪藶強心膠囊治療慢性心力衰竭的系統(tǒng)評價[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會心病分會第十一屆學(xué)術(shù)年會論文精選[C];2009年

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本文編號：1195062