本文關(guān)鍵詞：SCCA1在肝癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其臨床意義

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞癌 肝病 預(yù)后 鱗狀細(xì)胞癌抗原

【摘要】：研究目的:鱗狀細(xì)胞癌抗原(Squamous cell carcinoma antigen,SCCA)是一種抑制型絲氨酸蛋白酶抑制劑,生理性表達(dá)于鱗狀上皮組織。其有兩個(gè)亞型,SCCA1、SCCA2,基因核酸序列98%同源,蛋白氨基酸序列92%一致,但在功能上有較大差異。早期的研究顯示,SCCA的表達(dá)水平或與鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、進(jìn)展相關(guān),近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn),SCCA在不同程度的肝病如肝癌、慢乙肝、肝硬化等組織中亦有不同表達(dá),SCCA在肝癌組織中的表達(dá)水平高于其他肝病組織。本文旨在從蛋白水平檢測(cè)SCCA1在各類肝病患者中的表達(dá)情況,明確SCCA1在慢乙肝患者、肝硬化及肝癌中的表達(dá)水平,探討SCCA1在肝癌組織中的表達(dá)水平與患者臨床病理學(xué)相關(guān)因素的關(guān)系及其在肝癌患者預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步檢測(cè)SCCA1在正常肝細(xì)胞系及肝癌細(xì)胞系中表達(dá)情況及其在細(xì)胞中的定位。研究方法:采用Western blot方法檢測(cè)A組56例肝組織標(biāo)本SCCA1表達(dá)情況,包括肝癌(n=28)和癌旁(n=28)。采用免疫組化方法檢測(cè)B組244例組織標(biāo)本SCCA1蛋白的表達(dá)情況,包括肝癌(n=103)、癌旁(n=89)、慢性肝病(慢性乙型病毒性肝炎或肝硬化)(n=23)、高/低級(jí)別不典型增生(n=19)、壺腹周圍癌(n=6)、正常肝組織(n=4)。ELISA方法檢測(cè)68例肝病患者血清標(biāo)本SCCA1濃度,包括肝癌(n=30)、肝硬化(n=18)、慢乙肝(n=20)和健康對(duì)照組(n=20)。免疫熒光分析SCCA1在正常肝細(xì)胞系(HL-7702)及肝癌細(xì)胞系(HepG2)中表達(dá)情況及其在細(xì)胞中的定位。統(tǒng)計(jì)分析SCCA1在各組織中的表達(dá)特點(diǎn),分析SCCA1的表達(dá)與肝癌病理分級(jí)、腫瘤大小、TNM分期等臨床病理學(xué)特征的相關(guān)關(guān)系,并通過(guò)生存分析探討SCCA1的表達(dá)水平與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系。研究結(jié)果:Western blot結(jié)果顯示:SCCA1在肝癌組織、癌旁組織中均有表達(dá),在肝癌中的表達(dá)水平高于癌旁,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:103例肝癌組織中有76例、19例不典型增生中有13例、89例癌旁組織中有36例、23例慢性肝病組織中9例表達(dá)SCCA1,6例壺腹周圍癌組織中4例表達(dá)SCCA1,而4例正常肝組織未見SCCA1表達(dá)。分析比較各組間SCCA1表達(dá)陽(yáng)性率,SCCA1的陽(yáng)性率從正常肝、慢性肝病、癌旁組織、不典型增生到肝癌組織呈逐漸升高趨勢(shì)(P0.05)。結(jié)合臨床病理學(xué)相關(guān)因素分析顯示,SCCA1在肝癌中的表達(dá)與腫瘤的分化程度相關(guān),肝癌患者SCCA1表達(dá)率在低分化組中的表達(dá)率低于高、中分化組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.043),且其與患者肝功能Child-Pugh相關(guān)(P=0.021)。生存分析顯示SCCA1陰性組較陽(yáng)性組長(zhǎng)期生存期有下降趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.029)。在肝癌組織高、中分化組中,SCCA1的表達(dá)與患者整體生存期的增加相關(guān)(P=0.016),在低分化組中亦有相同的結(jié)論(P=0.027)。多因素生存分析顯示,SCCA1的陽(yáng)性表達(dá)是肝癌患者整體生存獨(dú)立影響因素[hazard ratio=3.757,P0.001]。ELISA結(jié)果顯示肝病患者血清中SCCA1表達(dá)水平均較低,其表達(dá)均值在慢乙肝患者中和肝硬化患者中均低于肝癌患者,但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.5),血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示慢乙肝患者SCCA1表達(dá)水平高于肝硬化患者(P0.05)。SCCA1在健康對(duì)照組、慢乙肝/肝硬化、肝癌患者中的表達(dá)趨勢(shì)與組織檢測(cè)結(jié)果一致。免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SCCA1在正常肝細(xì)胞系及肝癌細(xì)胞系中均有表達(dá),其主要定位在細(xì)胞核中,這與免疫組織化學(xué)染色結(jié)果相一致。研究結(jié)論:SCCA1在慢乙肝組織、癌旁肝組織、不典型增生組織及肝癌組織中的表達(dá)水平呈逐漸增高趨勢(shì),SCCA1在正常肝組織中不表達(dá),提示SCCA1可能與肝癌的發(fā)生進(jìn)展相關(guān)。進(jìn)一步分析表明,SCCA1的表達(dá)與肝癌組織的分化程度及患者肝癌患者預(yù)后生存相關(guān)。但在慢乙肝、肝硬化及肝癌患者血清中SCCA1的表達(dá)水平較低,可能與其是非分泌蛋白相關(guān),或與試劑盒抗體的敏感性相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 肝病 預(yù)后 鱗狀細(xì)胞癌抗原
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 1 研究對(duì)象和方法16-32
• 1.1 材料和方法16-22
• 1.1.1 組織及血清標(biāo)本來(lái)源16-17
• 1.1.2 臨床病理資料17-18
• 1.1.3 肝癌患者的隨訪18
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器18-20
• 1.1.5 主要實(shí)驗(yàn)試劑20
• 1.1.6 主要溶液的配制20-22
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法22-31
• 1.2.1 考馬斯亮藍(lán)染色22-23
• 1.2.2 Western blot實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 1.2.3 免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)（Immunohistochemistry, IHC）24-28
• 1.2.3.1 IHC方法步驟24-26
• 1.2.3.2 結(jié)果分析與判定26
• 1.2.3.3 IPP軟件分析免疫組化圖片26-27
• 1.2.3.4 應(yīng)用IPP軟件手動(dòng)分析免疫組化圖片IOD值具體操作步驟27
• 1.2.3.5 應(yīng)用IPP軟件自動(dòng)分析免疫組化圖片IOD值具體操作步驟27-28
• 1.2.4 應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)肝病患者血清SCCA1水平28-29
• 1.2.5 細(xì)胞免疫熒光染色（Immunofluorescence, IF）29-31
• 1.2.5.1 細(xì)胞凍存29
• 1.2.5.2 細(xì)胞復(fù)蘇29-30
• 1.2.5.3 細(xì)胞爬片30
• 1.2.5.4 細(xì)胞免疫熒光染色30-31
• 1.2.5.5 免疫細(xì)胞化學(xué)染色（Immunocytochemistry, ICC）31
• 1.2.5.6 結(jié)果判定31
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法31-32
• 2 結(jié)果32-46
• 2.1 考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果32
• 2.2 Western blot檢測(cè)SCCA1蛋白的結(jié)果32-34
• 2.3 IHC檢測(cè)SCCA1蛋白的結(jié)果34-37
• 2.4 Elisa結(jié)果37-38
• 2.5 SCCA1在各細(xì)胞系中細(xì)胞免疫熒光染色情況38-40
• 2.6 癌組織SCCA1的表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性40-41
• 2.7 SCCA1表達(dá)與HCC患者預(yù)后的關(guān)系41-45
• 2.8 COX回歸模型分析帥選影響肝癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素45-46
• 3 討論46-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-60
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明60-61
• 綜述61-72
• 綜述參考文獻(xiàn)66-72
• 致謝72

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