本文關(guān)鍵詞：納米羥基磷灰石負載p53基因及阿霉素對肝癌干細胞抑制效果研究

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【摘要】：原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常見的惡性腫瘤之一,以其高復(fù)發(fā)和高轉(zhuǎn)移率,成為死亡率居全球第三的疾病。腫瘤干細胞(cancer stem cells,CSCs)是腫瘤起始、演進、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的根源。而目前癌癥的治療手段都是針對普通腫瘤細胞,需尋求一種殺傷腫瘤干細胞的有效療法,達到腫瘤根治的目的�；蛑委熤谐２捎玫膒53是細胞周期調(diào)控的重要基因,能誘使基因突變或損傷的細胞發(fā)生凋亡。多種腫瘤的發(fā)生伴隨著p53基因的突變,并與CSCs低分化特性相關(guān)。阿霉素是一種廣譜性化療藥物,能插入DNA,使其發(fā)生錯配而阻礙DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。但除了其無特異性對正常組織細胞產(chǎn)生細胞毒性外,阿霉素因CSCs的多藥耐藥性使其無法進入CSCs細胞發(fā)揮藥效。納米材料因其獨特尺寸、電荷、表面化學(xué)作為基因和藥物載體用于殺傷CSCs的研究已受到廣泛關(guān)注。納米材料作為藥物載體能克服腫瘤多藥耐藥,同時減少藥物對正常組織的毒副作用。而羥基磷灰石(hydroxyapatite,HAp)是脊椎動物牙齒和骨骼的主要成分,其表面帶正電,使其能通過靜電吸附與帶負電荷的基因結(jié)合。除了具備納米材料的共性外,優(yōu)越的生物相容性和生物降解性是其作為基因和藥物載體又一優(yōu)勢。HAp負載p53基因和Dox具有巨大潛能改善腫瘤治療現(xiàn)狀。方法:1.用兩種不同體系制備方法制備納米HAp-1和HAp-2,通過場發(fā)射掃描電鏡(FE-SEM)、X射線衍射(XRD)、傅里葉紅外光譜(FTIR)、熱失重分析(TG)等方法對兩種方法制備的納米HAp粒徑、顆粒形貌、和結(jié)晶度等性質(zhì)進行表征。并用聚醚酰亞胺(Polyetherimide,PEI)對其進行修飾。2.對PEI修飾的HAp復(fù)合物進行生物相容性、對p53基因與阿霉素的負載效率和降解性能進行評估。3.用MTT法、克隆形成和hoechst33258染色等方法綜合評估HP-p53-Dox對采用無血清培養(yǎng)基體外懸浮培養(yǎng)法所富集的肝癌CSCs殺傷效果。結(jié)果:1.采用化學(xué)沉淀法通過PEG調(diào)控,經(jīng)PEI修飾后,得到HP-1和HP-2。采用場發(fā)射掃描電子顯微鏡、傅立葉紅外光譜、X射線衍射和熱重分析對其進行表征和分析,得出的HP-1和HP-2的主要成分和晶型都為羥基磷灰石,HP-1為短棒狀,長徑為20-50 nm,短徑約為20 nm;HP-2為球形納米顆粒,粒徑在30 nm左右。2.兩種反應(yīng)體系所制備的納米羥基磷灰石顆粒以及經(jīng)PEI修飾的HP均有良好的生物相容性,對肝正常細胞L-02和肝癌細胞Huh-7、Hep-3B以及乳腺癌MCF-7細胞皆無明顯細胞毒性。在對p53基因負載研究中發(fā)現(xiàn),HP-1具有更高的負載量。HP-p53對阿霉素的負載量隨阿霉素濃度升高而增加。在降解實驗中HP-1表現(xiàn)出優(yōu)越的可降解性能,在pH為5.6、6.5、7.4 PBS中90天降解率分別為78%、60%和54%。3.HP-p53-Dox處理后的肝癌CSCs存活率顯著下降,克隆形成率也明顯降低。用Hoechst 33258染色觀察到HP-p53-Dox處理后的CSC細胞核出現(xiàn)高亮光斑,細胞密度遠低于對照組。
【關(guān)鍵詞】：羥基磷灰石 腫瘤干細胞 p53 阿霉素
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略詞8-12
• 第一章 緒論12-19
• 1.1 引言12-13
• 1.2 肝癌干細胞的生物學(xué)特性13-17
• 1.2.1 肝癌干細胞識別13-14
• 1.2.2 肝癌干細胞的異質(zhì)性14-15
• 1.2.3 肝癌CSC的基因表達15-17
• 1.3 納米材料用于腫瘤干細胞的治療17-18
• 1.3.2 納米材料作為基因和藥物載體17-18
• 1.4 本課題研究內(nèi)容18-19
• 第二章 羥基磷灰石納米顆粒的制備、改性及表征19-26
• 2.1 引言19
• 2.2 材料和方法19-23
• 2.2.1 實驗材料19-21
• 2.2.2 實驗方法21-23
• 2.3 實驗結(jié)果23-25
• 2.3.1 HP-1 納米羥基磷灰石改性及表征結(jié)果23-24
• 2.3.2 HP-2 納米羥基磷灰石改性及表征結(jié)果24-25
• 2.4 本章小結(jié)25-26
• 第三章 納米羥基磷灰石顆粒的生物相容性、降解性和負載率分析26-40
• 3.1 引言26
• 3.2 材料與方法26-35
• 3.2.1 實驗材料26-30
• 3.2.2 實驗方法30-35
• 3.3 實驗結(jié)果35-39
• 3.3.1 pEGFP-C1-p53酶切結(jié)果35
• 3.3.2 納米羥基磷灰石對p53基因的負載效率35-36
• 3.3.3 HP-p53對阿霉素的負載量測定結(jié)果36-37
• 3.3.4 羥基磷灰石顆粒體外降解研究37-38
• 3.3.5 納米羥基磷灰石的生物相容性實驗結(jié)果38-39
• 3.4 本章小結(jié)39-40
• 第四章 體外懸浮培養(yǎng)富集肝癌干細胞40-47
• 4.1 引言40
• 4.2 材料與方法40-45
• 4.2.1 實驗材料40-43
• 4.2.2 實驗方法43-45
• 4.3 實驗結(jié)果45-46
• 4.3.1 體外懸浮微球體培養(yǎng)富集肝癌干細胞結(jié)果45-46
• 4.3.2 Western blot檢測肝癌干細胞相關(guān)基因的表達46
• 4.4 本章小結(jié)46-47
• 第五章 HAp-p53-Dox對腫瘤干細胞殺傷效果研究47-54
• 5.1 引言47
• 5.2 材料與方法47-49
• 5.2.1 實驗材料47-48
• 5.2.2 實驗方法48-49
• 5.3 實驗結(jié)果49-52
• 5.3.1 MTT法檢測HP-p53-Dox對肝癌干細胞殺傷效果49-50
• 5.3.2 克隆形成檢測HP-p53-Dox對肝癌干細胞增殖的抑制結(jié)果50-51
• 5.3.3 hoechst 33258染色檢測HP-p53-Dox誘導(dǎo)肝癌干細胞凋亡結(jié)果51-52
• 5.4 本章小結(jié)52-54
• 第六章 結(jié)論54-56
• 參考文獻56-61
• 碩士期間研究成果61-62
• 致謝62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馮川;楊先炯;孫警輝;羅慶;宋關(guān)斌;;內(nèi)皮細胞條件培養(yǎng)基對肝癌細胞癌干細胞表型的影響[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2015年05期

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本文編號：969162