本文關鍵詞：煙草提取物誘導人肺腺癌細胞株PC-9吉非替尼耐藥相關機制及對克服耐藥的探索

  更多相關文章： 煙草提取物 肺癌 吉非替尼 Src 上皮間質轉化

【摘要】：目的探討煙草提取物(cigarette smoke extract,CSE)誘導EGFR敏感性突變人肺腺癌細胞株PC-9吉非替尼耐藥的可能相關分子機制及乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)能否逆轉CSE誘導的PC-9細胞吉非替尼耐藥。方法以不同濃度CSE處理PC-9細胞不同時間,檢測其上皮間質轉化相關標志物(epithelial to mesenchymal transition,EMT)E-cadherin、Vimentin表達,篩選出合適的工作時間及工作濃度。觀察CSE暴露(10%CSE組)、Src抑制劑PP2預處理后CSE暴露(PP2+10%CSE組)、NAC預處理后CSE暴露(NAC+10%CSE組)對PC-9細胞E-cadherin、Vimentin及EMT相關信號通路蛋白、mRNA表達,PC-9對吉非替尼敏感性,細胞形態(tài)學及侵襲遷移能力等的影響。以qRT-PCR法檢測E-cadherin、Vimentin mRNA表達;Western blot法檢測E-cadherin、Vimentin、Src、p-Src蛋白表達;細胞免疫熒光法檢測細胞形態(tài)學及E-cadherin、Vimentin的定位、半定量;CCK-8法檢測吉非替尼及NAC對細胞增殖抑制情況;Transwell法檢測細胞侵襲能力;劃痕實驗檢測細胞遷移能力。結果qrt-pcr結果顯示:隨著cse濃度的增加(0,2.5%cse,5%cse,10%cse)暴露時間的延長(0,24h,48h,72h),pc-9細胞e-cadherin表達逐漸減少,vimentin表達逐漸增加,篩選出后續(xù)實驗cse濃度為10%cse,暴露時間為72h。10%cse組e-cadherinmrna相對表達水平顯著低于空白對照組(p0.001),vimentinmrna相對表達水平顯著高于空白對照組(p0.001)。pp2+10%cse組及nac+10%cse組e-cadherinmrna相對表達水平均明顯高于10%cse組(p均0.01);vimentinmrna相對表達水平均明顯低于10%cse組(p均0.001)。westernblot結果顯示:e-cadherin、vimentin蛋白表達情況與qrt-pcr結果一致。p-src蛋白表達量在10%cse組明顯高于空白對照組;而pp2+10%cse組、nac+10%cse均明顯低于10%cse組。細胞免疫熒光結果顯示:vimentin表達于細胞質,e-cadherin表達于細胞膜,e-cadherin、vimentin表達量與qrt-pcr及westernblot結果一致。10%cse組pc-9細胞由上皮樣形狀變成長梭形、紡錘形;而pp2+10%cse組、nac+10%cse組pc-9細胞仍呈上皮樣形狀。cck-8實驗結果顯示:nac對pc-9細胞的無毒劑量為5mm。吉非替尼對空白對照組、10%cse組、pp2+10%cse組、nac+10%cse組pc-9細胞的ic50分別為(0.0566±0.0060)μm、(0.8340±0.2780)μm、(0.1380±0.0878)μm、(0.1650±0.0242μm],其中10%cse組明顯高于空白對照組(p0.01),而pp2+10%cse組及nac+10%cse組則明顯低于10%cse組(p均0.05)。Transwell實驗結果顯示:10%CSE組穿膜細胞數(shù)明顯高于空白對照組(p0.0001),PP2+10%CSE組及NAC+10%CSE組穿膜細胞數(shù)明顯低于10%CSE組(p均0.0001)。劃痕實驗結果顯示:10%CSE組PC-9細胞遷移距離明顯大于空白對照組;PP2+10%CSE組、NAC+10%CSE組PC-9細胞遷移距離明顯小于10%CSE組。結論1.CSE可誘導PC-9肺腺癌細胞發(fā)生EMT,且呈時間依賴性、濃度依賴性;2.CSE可誘導PC-9肺腺癌細胞吉非替尼耐藥;3.Src激活在CSE誘導的PC-9肺腺癌細胞EMT過程中發(fā)揮重要作用;4.EMT和Src激活是CSE誘導的PC-9肺腺癌細胞吉非替尼耐藥的重要分子機制;5.NAC可通過抑制Src激活逆轉EMT克服CSE誘導的PC-9肺腺癌細胞吉非替尼耐藥。
【關鍵詞】：煙草提取物 肺癌 吉非替尼 Src 上皮間質轉化
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 煙草提取物誘導人肺腺癌細胞株PC-9 吉非替尼耐藥及相關機制研究15-36
• 1 引言15
• 2 材料與方法15-24
• 3 結果24-33
• 4 討論33-36
• 第二部分 乙酰半胱氨酸逆轉CSE誘導的PC-9 細胞吉非替尼耐藥36-44
• 1 引言36
• 2 材料與方法36-38
• 3 結果38-43
• 4 討論43-44
• 全文總結44-45
• 參考文獻45-50
• 文獻綜述50-62
• 參考文獻56-62
• 致謝62-63
• 碩士期間發(fā)表的文章63

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