本文關(guān)鍵詞：煙草提取物誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞株P(guān)C-9吉非替尼耐藥相關(guān)機(jī)制及對(duì)克服耐藥的探索

  更多相關(guān)文章： 煙草提取物 肺癌 吉非替尼 Src 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

【摘要】：目的探討煙草提取物(cigarette smoke extract,CSE)誘導(dǎo)EGFR敏感性突變?nèi)朔蜗侔┘?xì)胞株P(guān)C-9吉非替尼耐藥的可能相關(guān)分子機(jī)制及乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)能否逆轉(zhuǎn)CSE誘導(dǎo)的PC-9細(xì)胞吉非替尼耐藥。方法以不同濃度CSE處理PC-9細(xì)胞不同時(shí)間,檢測(cè)其上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志物(epithelial to mesenchymal transition,EMT)E-cadherin、Vimentin表達(dá),篩選出合適的工作時(shí)間及工作濃度。觀察CSE暴露(10%CSE組)、Src抑制劑PP2預(yù)處理后CSE暴露(PP2+10%CSE組)、NAC預(yù)處理后CSE暴露(NAC+10%CSE組)對(duì)PC-9細(xì)胞E-cadherin、Vimentin及EMT相關(guān)信號(hào)通路蛋白、mRNA表達(dá),PC-9對(duì)吉非替尼敏感性,細(xì)胞形態(tài)學(xué)及侵襲遷移能力等的影響。以qRT-PCR法檢測(cè)E-cadherin、Vimentin mRNA表達(dá);Western blot法檢測(cè)E-cadherin、Vimentin、Src、p-Src蛋白表達(dá);細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及E-cadherin、Vimentin的定位、半定量;CCK-8法檢測(cè)吉非替尼及NAC對(duì)細(xì)胞增殖抑制情況;Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力;劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力。結(jié)果qrt-pcr結(jié)果顯示:隨著cse濃度的增加(0,2.5%cse,5%cse,10%cse)暴露時(shí)間的延長(zhǎng)(0,24h,48h,72h),pc-9細(xì)胞e-cadherin表達(dá)逐漸減少,vimentin表達(dá)逐漸增加,篩選出后續(xù)實(shí)驗(yàn)cse濃度為10%cse,暴露時(shí)間為72h。10%cse組e-cadherinmrna相對(duì)表達(dá)水平顯著低于空白對(duì)照組(p0.001),vimentinmrna相對(duì)表達(dá)水平顯著高于空白對(duì)照組(p0.001)。pp2+10%cse組及nac+10%cse組e-cadherinmrna相對(duì)表達(dá)水平均明顯高于10%cse組(p均0.01);vimentinmrna相對(duì)表達(dá)水平均明顯低于10%cse組(p均0.001)。westernblot結(jié)果顯示:e-cadherin、vimentin蛋白表達(dá)情況與qrt-pcr結(jié)果一致。p-src蛋白表達(dá)量在10%cse組明顯高于空白對(duì)照組;而pp2+10%cse組、nac+10%cse均明顯低于10%cse組。細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示:vimentin表達(dá)于細(xì)胞質(zhì),e-cadherin表達(dá)于細(xì)胞膜,e-cadherin、vimentin表達(dá)量與qrt-pcr及westernblot結(jié)果一致。10%cse組pc-9細(xì)胞由上皮樣形狀變成長(zhǎng)梭形、紡錘形;而pp2+10%cse組、nac+10%cse組pc-9細(xì)胞仍呈上皮樣形狀。cck-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:nac對(duì)pc-9細(xì)胞的無(wú)毒劑量為5mm。吉非替尼對(duì)空白對(duì)照組、10%cse組、pp2+10%cse組、nac+10%cse組pc-9細(xì)胞的ic50分別為(0.0566±0.0060)μm、(0.8340±0.2780)μm、(0.1380±0.0878)μm、(0.1650±0.0242μm],其中10%cse組明顯高于空白對(duì)照組(p0.01),而pp2+10%cse組及nac+10%cse組則明顯低于10%cse組(p均0.05)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:10%CSE組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯高于空白對(duì)照組(p0.0001),PP2+10%CSE組及NAC+10%CSE組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯低于10%CSE組(p均0.0001)。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:10%CSE組PC-9細(xì)胞遷移距離明顯大于空白對(duì)照組;PP2+10%CSE組、NAC+10%CSE組PC-9細(xì)胞遷移距離明顯小于10%CSE組。結(jié)論1.CSE可誘導(dǎo)PC-9肺腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT,且呈時(shí)間依賴性、濃度依賴性;2.CSE可誘導(dǎo)PC-9肺腺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥;3.Src激活在CSE誘導(dǎo)的PC-9肺腺癌細(xì)胞EMT過(guò)程中發(fā)揮重要作用;4.EMT和Src激活是CSE誘導(dǎo)的PC-9肺腺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥的重要分子機(jī)制;5.NAC可通過(guò)抑制Src激活逆轉(zhuǎn)EMT克服CSE誘導(dǎo)的PC-9肺腺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥。
【關(guān)鍵詞】：煙草提取物 肺癌 吉非替尼 Src 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 煙草提取物誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞株P(guān)C-9 吉非替尼耐藥及相關(guān)機(jī)制研究15-36
• 1 引言15
• 2 材料與方法15-24
• 3 結(jié)果24-33
• 4 討論33-36
• 第二部分 乙酰半胱氨酸逆轉(zhuǎn)CSE誘導(dǎo)的PC-9 細(xì)胞吉非替尼耐藥36-44
• 1 引言36
• 2 材料與方法36-38
• 3 結(jié)果38-43
• 4 討論43-44
• 全文總結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 文獻(xiàn)綜述50-62
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 致謝62-63
• 碩士期間發(fā)表的文章63

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陸書生;孫德彬;孫蕾;;吉非替尼治療肺癌16例臨床分析[J];臨床肺科雜志;2008年01期

2 鐘延霞;陳艷雪;王寶君;;反相高效液相色譜法測(cè)定吉非替尼的含量[J];河北師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年04期

3 許坤;;吉非替尼在老年非小細(xì)胞肺癌中的療效觀察[J];中華全科醫(yī)學(xué);2012年12期

4 玄香蘭;安昌善;周彩存;;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)敏感非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼耐藥及機(jī)制的研究[J];中國(guó)肺癌雜志;2013年01期

5 李小龍;黨亞正;陸婉玲;;低分割放療聯(lián)合吉非替尼治療老年非小細(xì)胞肺癌療效觀察[J];西部醫(yī)學(xué);2013年09期

6 王燕;王穎;王彬;王子平;張湘茹;儲(chǔ)大同;孫燕;;吉非替尼治療非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的初步結(jié)果[J];中國(guó)肺癌雜志;2006年05期

7 陳玲;陳強(qiáng);葉韻斌;;吉非替尼敏感性預(yù)測(cè)指標(biāo)的研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)新藥與臨床雜志;2006年11期

8 David W Sharp;接英;馬建華;;由吉非替尼所引發(fā)的持續(xù)性討論[J];科學(xué)觀察;2006年06期

9 徐朝江;王卓;姚遠(yuǎn)兵;;吉非替尼治療肺癌的研究進(jìn)展[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2007年03期

10 王春敏;李煒;仇綴百;;靶向抗腫瘤藥物吉非替尼的臨床研究進(jìn)展[J];中國(guó)臨床藥學(xué)雜志;2007年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李陶;李玉;;吉非替尼,厄羅替尼,�？颂婺嵩跐�(jì)南地區(qū)2家三甲醫(yī)院的應(yīng)用調(diào)查[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

2 徐瑞彤;束永前;;氟維司群逆轉(zhuǎn)耐吉非替尼非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株耐藥性的機(jī)制探討[A];2010’全國(guó)腫瘤分子標(biāo)志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第五屆中國(guó)中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

3 張琳琳;吳志浩;尤嘉琮;李洋;劉彬;祖玲玲;李雪冰;常銳;周清華;;上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在尼古丁誘導(dǎo)肺癌吉非替尼獲得性耐藥中的作用及分子機(jī)制[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

4 陳良安;孔進(jìn);田慶;范保星;劉又寧;;吉非替尼治療中晚期非小細(xì)胞肺癌30例分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)呼吸病學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

5 陳雪琴;陳達(dá)棟;李鑫;潘月龍;;吉非替尼所致嚴(yán)重肝損害后再使用一例[A];2013年第六屆國(guó)家級(jí)分子靶點(diǎn)藥物治療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班暨浙江省腫瘤化療學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2013年

6 王芳;付占昭;顧濤;高立明;;吉非替尼耐藥的非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移繼續(xù)原藥治療有效的4例報(bào)道[A];中國(guó)腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國(guó)腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 傅健飛;王蓓;;吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌敏感性預(yù)測(cè)指標(biāo)[A];腫瘤化學(xué)治療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2007年

8 莊洪卿;秦培艷;袁智勇;王平;;吉非替尼不同給藥時(shí)間放射增敏作用體外研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)放射腫瘤治療學(xué)分會(huì)六屆二次暨中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)腫瘤放療專業(yè)委員會(huì)二屆二次學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

9 肖西祥;;以吉非替尼為例淺談我國(guó)藥企的專利布局策略[A];發(fā)展知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)業(yè)，，支撐創(chuàng)新型國(guó)家建設(shè)-2012年中華全國(guó)專利代理人協(xié)會(huì)年會(huì)第三屆知識(shí)產(chǎn)權(quán)論壇論文選編(第一部分)[C];2011年

10 張國(guó)毅;;吉非替尼相關(guān)皮疹1例[A];華東六省一市第八次皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;吉非替尼：對(duì)東方人群情有獨(dú)鐘[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

2 記者 靖九江;我國(guó)研究肯定吉非替尼治療肺癌效果[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 馮友根;靶向治療腫瘤藥吉非替尼[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

4 凌棟;國(guó)際臨床腫瘤專家高度評(píng)價(jià)�？颂婺醄N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

5 盛文;吉非替尼增加腫瘤出血發(fā)生率[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

6 ;吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌有成本效益[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

7 本報(bào)特約撰稿人 陸志誠(chéng);進(jìn)入靶向抗癌新時(shí)代[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

8 侯嘉;關(guān)于吉非替尼的SIGN研究[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

9 廣東省人民醫(yī)院副院長(zhǎng) 廣東省肺癌研究所所長(zhǎng) 吳一龍　本報(bào)記者 吳剛;別讓醫(yī)學(xué)研究遠(yuǎn)離患者[N];健康報(bào);2011年

10 張旭;阿斯利康腫瘤靶向藥物在歐洲獲批[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 董嵩;依維莫司聯(lián)合吉非替尼抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系的效果和機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

2 潘馳;吉非替尼耐藥型非小細(xì)胞肺癌中順鉑聯(lián)合吉非替尼的協(xié)同作用機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 平偉;MicroRNA-181a通過(guò)靶向GAS7對(duì)非小細(xì)胞肺癌吉非替尼敏感性的影響及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2015年

4 壽佳威;環(huán)孢素A通過(guò)抑制STAT3增加肺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼的敏感性[D];浙江大學(xué);2015年

5 張曉琛;HMGB1調(diào)控的自噬致非小細(xì)胞肺癌吉非替尼獲得性耐藥機(jī)制和后續(xù)治療策略研究[D];浙江大學(xué);2016年

6 王平;吉非替尼治療非小細(xì)胞肺癌的臨床療效和預(yù)測(cè)因素分析及其致肺纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2008年

7 陳佳;成纖維細(xì)胞對(duì)NSCLC細(xì)胞HCC827吉非替尼敏感性的影響及相關(guān)機(jī)制的探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 王燕;吉非替尼靶向治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床療效預(yù)測(cè)和預(yù)后因素研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

9 劉雨桃;吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌的療效與生存分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

10 楊小兵;扶正抗癌方對(duì)吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌的增效研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄭悅;康萊特注射液聯(lián)合吉非替尼對(duì)人肺腺癌NCI-H1975細(xì)胞株的作用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 李煥煥;塞來(lái)昔布聯(lián)合吉非替尼在非小細(xì)胞肺癌中的實(shí)驗(yàn)研究[D];石河子大學(xué);2015年

3 武玲;不同氧濃度下吉非替尼對(duì)人肺癌細(xì)胞的影晌[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

4 鄭杰;表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼的合成與優(yōu)化[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 沈明輝;6-位修飾的吉非替尼衍生物的合成與活性研究[D];黑龍江大學(xué);2015年

6 劉亮;吉非替尼按時(shí)辰給藥對(duì)荷瘤裸鼠的藥效學(xué)影響及機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2015年

7 紀(jì)潔;吉非替尼對(duì)奧沙利鉑體外抗睪丸癌作用的影響及可能機(jī)制[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2015年

8 李建軍;抗腫瘤藥物吉非替尼的合成[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 邱華成;伊立替康與吉非替尼聯(lián)合應(yīng)用治療肝癌的藥效學(xué)及機(jī)制研究[D];浙江工業(yè)大學(xué);2015年

10 顏偉偉;抗腫瘤藥物吉非替尼(GEFITINIB)的合成工藝研究[D];重慶大學(xué);2015年

本文編號(hào)：956097