本文關(guān)鍵詞：雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析及miR-146b-5p影響肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：第一部分雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析目的:建立紅、綠雙色熒光示蹤肝癌動(dòng)物模型并對(duì)其腫瘤生物學(xué)特性進(jìn)行分析。方法:采用直接注射法將帶有紅色熒光的肝癌細(xì)胞接種于綠色熒光裸鼠肝葉內(nèi),建立紅、綠雙色熒光示蹤肝癌動(dòng)物模型。小動(dòng)物活體熒光成像儀實(shí)時(shí)觀察肝癌的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移情況。處死荷瘤鼠,對(duì)其進(jìn)行大體解剖。取移植瘤做冰凍切片,顯微鏡下觀察移植瘤的組織結(jié)構(gòu)特征。同時(shí)取移植瘤和腹水原代培養(yǎng),移植瘤做免疫組織化學(xué)染色,分析腫瘤相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果:成功建立了雙色熒光示蹤肝癌動(dòng)物模型。本模型可以模擬出肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移、癌性腹水等肝癌生物學(xué)特征。熒光成像可檢測(cè)到腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。冰凍切片可觀察到肝癌組織的構(gòu)建過(guò)程,肝癌細(xì)胞與宿主細(xì)胞的融合現(xiàn)象也清晰可見(jiàn)。免疫組化結(jié)果顯示腫瘤相關(guān)蛋白PDGFRɑ、p STAT3、IRAK1、MMP9、N-RAS在肝癌組織中表達(dá)。結(jié)論:本方法建立的雙色熒光示蹤肝癌動(dòng)物模型穩(wěn)定可靠、易重復(fù)。該模型可直接觀察到腫瘤組織重建過(guò)程中肝癌細(xì)胞與宿主細(xì)胞間的相互作用,進(jìn)一步闡明了腫瘤微環(huán)境在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。第二部分mi R-146b-5p影響肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究目的:檢測(cè)mi R-146b-5p在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)情況,研究其對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力的影響并初步探討其發(fā)揮作用的機(jī)制。方法:Real-time RT-PCR方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞中mi R-146b-5p的表達(dá)水平。通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)觀察過(guò)表達(dá)mi R-146b-5p對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移能力的影響。應(yīng)用生物學(xué)信息軟件預(yù)測(cè)mi R-146b-5p可能作用的靶基因,并用Western blot方法進(jìn)行靶基因驗(yàn)證。結(jié)果:mi R-146b-5p在肝癌細(xì)胞中較正常肝細(xì)胞出現(xiàn)低表達(dá),轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p mimics后的肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力下降,Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p mimics后的肝癌細(xì)胞IRAK1、p STAT3蛋白水平出現(xiàn)下調(diào)。結(jié)論:mi R-146b-5p在肝癌中的表達(dá)受抑制,且具有一定的抑制肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力作用。其發(fā)揮抑瘤作用可能是通過(guò)調(diào)節(jié)IRAK1、p STAT3的表達(dá)水平實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 動(dòng)物模型 熒光示蹤 活體成像 腫瘤轉(zhuǎn)移 肝癌 miR-146b-5p 細(xì)胞增殖 遷移 靶基因
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-12
• 參考文獻(xiàn)10-12
• 第一部分 雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析12-34
• 引言12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-29
• 討論29-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 第二部分 miR-146b-5p影響肝癌細(xì)胞增殖、遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究34-53
• 引言34
• 材料與方法34-41
• 結(jié)果41-48
• 討論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 綜述53-62
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文62-63
• 中英文對(duì)照縮略詞表63-64
• 致謝64-65

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