本文關(guān)鍵詞：雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析及miR-146b-5p影響肝癌細胞增殖、遷移能力的實驗研究

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【摘要】：第一部分雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析目的:建立紅、綠雙色熒光示蹤肝癌動物模型并對其腫瘤生物學特性進行分析。方法:采用直接注射法將帶有紅色熒光的肝癌細胞接種于綠色熒光裸鼠肝葉內(nèi),建立紅、綠雙色熒光示蹤肝癌動物模型。小動物活體熒光成像儀實時觀察肝癌的生長轉(zhuǎn)移情況。處死荷瘤鼠,對其進行大體解剖。取移植瘤做冰凍切片,顯微鏡下觀察移植瘤的組織結(jié)構(gòu)特征。同時取移植瘤和腹水原代培養(yǎng),移植瘤做免疫組織化學染色,分析腫瘤相關(guān)蛋白表達。結(jié)果:成功建立了雙色熒光示蹤肝癌動物模型。本模型可以模擬出肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移、癌性腹水等肝癌生物學特征。熒光成像可檢測到腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移。冰凍切片可觀察到肝癌組織的構(gòu)建過程,肝癌細胞與宿主細胞的融合現(xiàn)象也清晰可見。免疫組化結(jié)果顯示腫瘤相關(guān)蛋白PDGFRɑ、p STAT3、IRAK1、MMP9、N-RAS在肝癌組織中表達。結(jié)論:本方法建立的雙色熒光示蹤肝癌動物模型穩(wěn)定可靠、易重復。該模型可直接觀察到腫瘤組織重建過程中肝癌細胞與宿主細胞間的相互作用,進一步闡明了腫瘤微環(huán)境在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。第二部分mi R-146b-5p影響肝癌細胞增殖、遷移能力的實驗研究目的:檢測mi R-146b-5p在肝癌細胞中的表達情況,研究其對肝癌細胞增殖、遷移能力的影響并初步探討其發(fā)揮作用的機制。方法:Real-time RT-PCR方法檢測肝癌細胞和正常肝細胞中mi R-146b-5p的表達水平。通過CCK-8實驗、平板克隆形成實驗、Transwell遷移實驗、劃痕實驗檢測觀察過表達mi R-146b-5p對肝癌細胞的增殖、遷移能力的影響。應用生物學信息軟件預測mi R-146b-5p可能作用的靶基因,并用Western blot方法進行靶基因驗證。結(jié)果:mi R-146b-5p在肝癌細胞中較正常肝細胞出現(xiàn)低表達,轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p mimics后的肝癌細胞增殖、遷移能力下降,Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染mi R-146b-5p mimics后的肝癌細胞IRAK1、p STAT3蛋白水平出現(xiàn)下調(diào)。結(jié)論:mi R-146b-5p在肝癌中的表達受抑制,且具有一定的抑制肝癌細胞增殖、遷移能力作用。其發(fā)揮抑瘤作用可能是通過調(diào)節(jié)IRAK1、p STAT3的表達水平實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 動物模型 熒光示蹤 活體成像 腫瘤轉(zhuǎn)移 肝癌 miR-146b-5p 細胞增殖 遷移 靶基因
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-12
• 參考文獻10-12
• 第一部分 雙色熒光示蹤肝癌模型的特性分析12-34
• 引言12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-29
• 討論29-31
• 參考文獻31-34
• 第二部分 miR-146b-5p影響肝癌細胞增殖、遷移能力的實驗研究34-53
• 引言34
• 材料與方法34-41
• 結(jié)果41-48
• 討論48-50
• 參考文獻50-53
• 綜述53-62
• 參考文獻58-62
• 攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文62-63
• 中英文對照縮略詞表63-64
• 致謝64-65

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