發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 02:22

  本文關(guān)鍵詞：白芍總苷對二乙基亞硝胺誘導(dǎo)大鼠肝癌的作用及部分機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 白芍總苷 肝細(xì)胞肝癌 二乙基亞硝胺 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞 B細(xì)胞激活因子

【摘要】：肝細(xì)胞肝癌(HCC)是最常見的惡性腫瘤之一,在全世界癌癥死亡中排第三位。大約占所有原發(fā)性肝癌病例的70%-80%。肝癌的放射治療、外科手術(shù)治療、化學(xué)治療和肝臟移植等方法是目前治療HCC常用的,但大多數(shù)患者確診時(shí)已發(fā)展至癌癥晚期,且患者體質(zhì)較差,故大部分患者只適合保守療法,治療肝癌仍具有很大的挑戰(zhàn)性�，F(xiàn)在的一些研究開始關(guān)注HCC的免疫治療。在大多數(shù)情況下,自身免疫調(diào)節(jié)有助于腫瘤的緩解,這說明免疫系統(tǒng)在控制肝癌的發(fā)生發(fā)展中占有重要作用。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(Bregs)主要是通過生成抑制性細(xì)胞因子來協(xié)調(diào)免疫系統(tǒng)和維持B細(xì)胞的抑制作用。Bregs已被證明可通過對自身反應(yīng)性T細(xì)胞抑制自身免疫,也可以直接抑制細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活性減弱抗腫瘤免疫。越來越多的證據(jù)表明Bregs在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。雖然Bregs已被證明在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有至關(guān)重要的作用,但在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中誘導(dǎo)Bregs生成的腫瘤微環(huán)境因素或細(xì)胞因子仍然不明了。B淋巴細(xì)胞刺激因子(BAFF)是TNF家族細(xì)胞因子的一員,對調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的成熟和功能至關(guān)重要。早期文獻(xiàn)表明,BAFF被普遍認(rèn)為是炎癥促進(jìn)因子,BAFF可誘導(dǎo)邊緣帶B細(xì)胞(MZ B細(xì)胞)分化成可分泌IL-10的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞。文獻(xiàn)表明BAFF在調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的成熟和功能中扮演著雙重角色。在本課題中我們將探討B(tài)regs及其分化增殖密切相關(guān)的細(xì)胞因子在HCC發(fā)生發(fā)展中重要作用。白芍總苷(TGP)是從傳統(tǒng)中藥芍藥根部提取出的有效部位,沒有明顯的毒性或副作用。TGP中包含芍藥苷、芍藥花苷、苯甲酰芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷,芍藥苷是其主要活性物質(zhì)。TGP具有抗炎鎮(zhèn)痛免疫調(diào)節(jié)等作用,治療肝臟疾病和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎效果明顯。其對SMMC-7721和HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用早已被我們實(shí)驗(yàn)室證實(shí)。這些發(fā)現(xiàn)為TGP能否抑制肝癌的免疫逃逸從理論上提供了有價(jià)值的線索。在本課題中我們將研究Bregs及其相關(guān)細(xì)胞因子在肝癌的發(fā)生發(fā)展中的動態(tài)變化,TGP能否通過影響B(tài)regs及其相關(guān)細(xì)胞因子治療DEN誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性肝癌。目的：1.部分闡明HCC發(fā)生發(fā)展中Bregs及其相關(guān)細(xì)胞因子的動態(tài)變化；2.明確TGP對大鼠HCC的治療作用及部分機(jī)制。方法：1建立DEN誘導(dǎo)大鼠HCC模型,SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和TGP組(30、60、120 mg·kg-1),共5組。模型組、TGP組大鼠灌胃給予DEN造模,于每天上午灌胃(0.1% DEN 8 mg/kg/次,每周6天,每天1次),同時(shí)給予正常組相同量的生理鹽水,共16周。在第12周開始,分別灌胃TGP(30、60、120mg·kg-1),每天1次,連續(xù)4周,正常組和模型組給予等量的5%CMC-Na。分別于造模的第4周,第12周和第16周稱重后采用股動脈取血的方法處死大鼠。無菌操作取出各組大鼠脾臟和肝臟,分別稱重,并記錄大鼠肝臟和脾臟的重量計(jì)算肝脾指數(shù)。量取并記錄肝臟表面的腫瘤體積以及結(jié)節(jié)的數(shù)量；采用檢測試劑盒檢測各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清中ALT、AST、ALP、AFP、BAFF、IL-4、IL-7和IL-10的水平變化；各組大鼠肝臟的組織病理學(xué)檢查使用HE染色法進(jìn)行觀察；流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠外周血中Bregs表達(dá)比例。Western-blot法檢測大鼠脾臟中B細(xì)胞成熟抗原(BCMA)、穿膜蛋白活化物(TACI)和B細(xì)胞活化因子受體(BAFF-R)表達(dá)水平的變化。2體外培養(yǎng)正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞,加入不同濃度的BAFF刺激,并觀察Pae作用。采用流式細(xì)胞術(shù)法檢測Bregs的比例,使用ELISA檢測上清中IL-10的水平。結(jié)果：1.TGP對DEN誘導(dǎo)大鼠HCC的治療作用1.1 TGP對HCC大鼠肝脾指數(shù)、腫瘤體積、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)以及死亡率的作用與正常組對比,模型組大鼠死亡率明顯升高,肝臟和脾臟指數(shù)也有顯著上升、肝臟腫瘤結(jié)節(jié)體積明顯變大結(jié)節(jié)數(shù)明顯上升。與模型組比較,iTGP(60、120 mg·kg-1)能顯著降低HCC大鼠升高的肝脾指數(shù),減少肝表面結(jié)節(jié)數(shù)和減小腫瘤結(jié)節(jié)體積。且大鼠死亡率也明顯降低。1.2 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠的肝臟組織病理學(xué)影響正常組大鼠有著完整清晰的肝小葉構(gòu)造肝且表面光滑有光澤,肝索排列很整齊,細(xì)胞核清晰。經(jīng)過DEN誘導(dǎo)16周后,肝臟表面粗糙不平,出現(xiàn)大小不等的結(jié)節(jié),癌腫形成,出現(xiàn)結(jié)構(gòu)紊亂的肝小葉,發(fā)生炎性細(xì)胞浸潤,同時(shí)大量假小葉出現(xiàn),HCC細(xì)胞呈現(xiàn)低分化,癌細(xì)胞浸潤,細(xì)胞排列紊亂,異型性明顯,細(xì)胞核增大,胞質(zhì)減少。TGP(60、120 mg·kg-1)劑量組明顯減輕炎性細(xì)胞發(fā)生浸潤,減少肝臟上假小葉形成和出現(xiàn),同時(shí)癌細(xì)胞的異型性明顯降低。1.3 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠血清ALT、AST和ALP活性的作用與正常組對比,模型組大鼠血清中ALT、AST和ALP的活性明顯上升。與模型組比較,TGP (30、60mg·kg-1)能顯著降低血清/ALT、AST、ALP的活性。1.4 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠血清AFP的作用與正常組比較,模型組大鼠血清AFP的水平明顯升高。與模型組比較,TGP(30、60、120mg·kg-,)能夠明顯降低大鼠血清中AFP水平。1.5 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠血清IL-7、IL-4和BAFF水平的作用與正常組相比肝癌模型組大鼠,隨著DEN給藥的進(jìn)行(4w、12w、16w)大鼠血清中BAFF水平明顯升高。隨著肝癌病程的進(jìn)展IL-7和IL-4表達(dá)無明顯變化。同模型組相比,TGP(60、120 mg·kg-1)能明顯降低大鼠血清中BAFF水平,TGP各劑量組對L-7、IL-4無明顯影響。1.6 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠外周血中IL-10水平的作用ELISA結(jié)果顯示,與正常組比較,在造模第4、12和16周,模型組大鼠肝組織中IL-10水平均明顯升高(p0.01),且隨著病程進(jìn)展,IL-I0水平逐漸升高。同模型組相比TGP (60,120 mg·kg-)劑量組可顯著降低的IL-10水平1.7 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠脾臟中Bregs比例的影響與正常組相比,模型組大鼠隨著DEN給藥的進(jìn)行(4w、12w、16w)大鼠外周血中Bregs的比例上升明顯。TGP(60、120 mg·kg-1)同模型組對比能明顯降低大鼠外周血中Bregs的比例。1.8TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠脾臟組織中BCMA、TACI和BAFF-R表達(dá)的影響與正常組相比,模型組大鼠肝組織中BCMA、TACI表達(dá)無顯著變化,BAFF-R表達(dá)顯著升高。與模型組相比,TGP (60、120 mg·kg-1均能顯著降低脾臟組織中BAFF-R表達(dá),TGP各劑量組對BCMA、TACI無明顯影響。1.9TGP治療后BAFF與Bregs之間的相關(guān)性分析為了探討B(tài)AFF與Bregs在促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展中的聯(lián)系,對它們做了相關(guān)性分析。結(jié)果顯示模型組中升高的BAFF同脾臟中Bregs的變化成正相關(guān)。通過TGP的治療,降低的BAFF同脾臟中的Bregs的變化也成正相關(guān)。1.10 Pae對BAFF誘導(dǎo)正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞分化為Bregs的影響同空白組比較,BAFF (20ng·ml-1)能明顯升高淋巴細(xì)胞中Bregs的比例。同BAFF (20ng·ml-1)組比較,Pae (10-6mol/L)組Bregs比例明顯降低。1.11 BAFF對正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-10水平的影響與正常組比較,BAFF(20 ng/ml)組IL-10水平明顯升高。同BAFF(20ng/ml)組比較,Pae (10-6mol/L) 組能明顯降低BAFF升高的IL-10的水平。結(jié)論：1.HCC大鼠血清中升高的AST、ALT和ALP的活及血清中AFP水平能顯著被TGP下調(diào),肝癌大鼠肝臟腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)及腫瘤結(jié)節(jié)體積經(jīng)過TGP治療也明顯下降,TGP還能顯著降低大鼠的死亡率和肝脾指數(shù),提示TGP對DEN誘導(dǎo)大鼠HCC有明顯治療作用。2.TGP可下調(diào)異常升高的BAFF水平、淋巴細(xì)胞BAFF-R表達(dá)、Bregs比例和IL-10產(chǎn)生,可能與其治療大鼠HCC有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：白芍總苷 肝細(xì)胞肝癌 二乙基亞硝胺 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞 B細(xì)胞激活因子
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 英文縮略詞對照6-8
• 中文摘要8-13
• Abstract13-20
• 前言20-22
• 1 實(shí)驗(yàn)材料22-25
• 1.1 動物22-23
• 1.2 受試物與試劑23
• 1.3 主要試劑配制23-25
• 1.4 主要儀器25
• 2 實(shí)驗(yàn)方法25-32
• 2.1 動物分組與建立大鼠肝細(xì)胞癌(HCC)模型25-26
• 2.2 收集標(biāo)本26
• 2.3 病理學(xué)檢查26-27
• 2.4 血清ALT、AST、ALP活性檢測27-28
• 2.5 血清AFP、IL-10、IL-7、IL-4和BAFF檢查28
• 2.6 Western blot檢測脾臟組織中BCMA、TACI和BAFF-R蛋白表達(dá)28-30
• 2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠外周血調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(Bregs)的比例30-31
• 2.8 BAFF刺激正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測Bregs亞群31-32
• 2.9 BAFF刺激正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞,檢測培養(yǎng)上清中IL-10水平32
• 2.10 統(tǒng)計(jì)處理32
• 3. 結(jié)果32-44
• 3.1 白芍總苷(TGP)對二乙基亞硝胺(DEN)誘導(dǎo)HCC大鼠一般情況的影響32-33
• 3.2 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠死亡率的影響33
• 3.3 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠肝脾指數(shù)的影響33-34
• 3.4 TGP對DEN誘導(dǎo)的HCC大鼠肝臟腫瘤結(jié)節(jié)的影響34-35
• 3.5 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠肝臟病變的影響35-36
• 3.6 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠血清ALT、AST、ALP活性的影響36
• 3.7 TGP對DEN誘導(dǎo)大鼠血清AFP水平的影響36-37
• 3.8 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠外周血中IL-10水平的影響37-38
• 3.9 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠脾臟組織BCMA、TACI和BAFF-R蛋白表達(dá)的影響38-39
• 3.10 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠血清IL-7、IL-4和BAFF水平的影響39-40
• 3.11 TGP對DEN誘導(dǎo)HCC大鼠外周血中Bregs比例的影響40-41
• 3.12 BAFF與Bregs的相關(guān)性分析41-42
• 3.13 TGP治療后大鼠BAFF與Bregs的相關(guān)性分析42-43
• 3.14 BAFF對大鼠脾臟淋巴細(xì)胞Bregs的影響及Pae的作用43-44
• 3.15 BAFF對大鼠脾臟淋巴細(xì)胞IL-10產(chǎn)生的影響及Pae的作用44
• 4 討論44-49
• 4.1 Bregs在HCC大鼠肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其誘導(dǎo)因子44-47
• 4.2 TGP抗HCC作用及可能機(jī)制47-49
• 5 結(jié)論49
• 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)49
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 附錄55-57
• 致謝57-59
• 綜述：調(diào)節(jié)性B細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫逃逸在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展中的研究進(jìn)展59-70
• 參考文獻(xiàn)66-70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Shu-Guang Zheng;Hui-Xiong Xu;Lin-Na Liu;;Management of hepatocellular carcinoma: The role of contrast-enhanced ultrasound[J];World Journal of Radiology;2014年01期

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本文編號：920941