本文關(guān)鍵詞：臨床放療方式對肺腺癌A549細胞及正常人淋巴細胞的旁效應(yīng)及再傳遞效應(yīng)

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【摘要】：背景:輻射旁效應(yīng)是指未受輻射的細胞表現(xiàn)出與受輻射的細胞相同或相似的生物學(xué)反應(yīng)的現(xiàn)象,這些生物學(xué)反應(yīng)主要基因突變、基因不穩(wěn)定性增加、DNA單雙鍵斷裂、染色體斷裂、細胞增殖及凋亡、炎癥反應(yīng)、致瘤性轉(zhuǎn)化及癌癥形成等。放射治療中,除受照區(qū)域的放射損傷癥狀外,常會出現(xiàn)乏力、酸痛、食欲下降、消化不良、白細胞計數(shù)下降等全身癥狀,其中旁效應(yīng)可能起重要作用。遠距離器官損傷,程度和組織類型有關(guān),非照射細胞能減輕照射細胞的損傷。在臨床局部照射,整體的放射生物學(xué)行為會更復(fù)雜,需要跳出直接照射損傷的傳統(tǒng)觀念,進一步認識正常組織損傷的機制。目的:1、研究經(jīng)6MV-X線照射的A549細胞培養(yǎng)液即條件培養(yǎng)液培養(yǎng)未受照射的A549細胞后引發(fā)的細胞旁效應(yīng);2、研究經(jīng)6MV-X線照射的A549細胞培養(yǎng)液即一代條件培養(yǎng)液培養(yǎng)正常人淋巴細胞引發(fā)的細胞旁效應(yīng),以及處理過產(chǎn)生細胞旁效應(yīng)的新鮮培養(yǎng)液即二代條件培養(yǎng)液培養(yǎng)正常淋巴細胞后產(chǎn)生的旁效應(yīng)。旨在能夠以新的思路解釋局部照射后白細胞減少,有助于進一步認清輻射旁效應(yīng)的生物學(xué)意義。方法:1、將肺癌A549細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期時分別接受0Gy、0.5Gy、1Gy、1.5Gy、2 Gy五種劑量的6MV-X線進行輻照,照射3h后將受照細胞的培養(yǎng)液作為條件培養(yǎng)液,培養(yǎng)未受照射的A549細胞,使用成克隆法檢測細胞的存活分數(shù);將A549細胞分為四組培養(yǎng),分別設(shè)為對照組、照射組、條件培養(yǎng)液組、新鮮培養(yǎng)液。選取24h、48h、72h、96h四個時間節(jié)點使用Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞術(shù)檢測2Gy的6MV-X線照射后A549細胞的凋亡水平;選取24h、48h、72h、96h四個節(jié)點使用PI單染流式細胞術(shù)檢測各組A549細胞的細胞周期變化。2、將健康人淋巴細胞分為對照組、一代條件培養(yǎng)液組、二代條件培養(yǎng)液組、一代干預(yù)組、二代干預(yù)組,對照組使用新鮮培養(yǎng)液,A549細胞受照后培養(yǎng)24h后的培養(yǎng)液培養(yǎng)正常淋巴細胞作為一代條件培養(yǎng)液組,一代條件培養(yǎng)液處理淋巴細胞24h后將淋巴細胞取出,更換新鮮培養(yǎng)液,培養(yǎng)24h后的培養(yǎng)液再處理正常淋巴細胞作為二代條件培養(yǎng)液組,一代二代條件培養(yǎng)液組均加入地塞米松作為干預(yù)組,所有實驗組細胞均于各培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h后檢測各組淋巴細胞存活分數(shù)及凋亡情況。統(tǒng)計學(xué)處理:本文所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(mean±S D)的形式來表示,檢驗方法使用獨立樣本t檢驗,所有數(shù)據(jù)均使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析,p0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1、細胞存活曲線:0.5 Gy以后的區(qū)域細胞的存活分數(shù)隨輻射劑量的增加而降低。條件培養(yǎng)液組的細胞凋亡率與對照組相比明顯升高,而且隨著時間的增加而增高,在72h達到最大(p0.05)。條件培養(yǎng)液組細胞中G2/M期細胞明顯較對照組增加(p0.05),并且隨著時間增加而增高,但是72h后,G2/M期細胞降低,且與對照組無明顯差異,G2/M期阻滯解除。2、一代條件培養(yǎng)液與二代條件培養(yǎng)淋巴細胞后細胞存活率較對照組下降(p0.05),凋亡率明顯升高(p0.05);地塞米松干預(yù)后淋巴細胞較相應(yīng)未干組存活率升高(p0.05),凋亡率明顯下降(p0.05)。結(jié)論:1、6MV-X線照射可通過條件培養(yǎng)液介導(dǎo)A549細胞的電離輻射旁效應(yīng),且在72h時達到最大;2、臨床照射旁效應(yīng)可通過條件培養(yǎng)基介導(dǎo)正常淋巴細胞的損傷,且可通過二代條件培養(yǎng)液對健康淋巴細胞產(chǎn)生鏈式損傷,從而產(chǎn)生遠程傳遞效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：放射損傷 輻射旁效應(yīng) 淋巴細胞損傷
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-14
• 第一章 緒論14-21
• 1.1 研究背景14-19
• 1.1.1 輻射物理學(xué)的基本概念14
• 1.1.2 輻射生物學(xué)的基本概念14-15
• 1.1.3 輻射損傷的產(chǎn)生15-16
• 1.1.4 輻射誘導(dǎo)的旁效應(yīng)16-17
• 1.1.5 旁效應(yīng)的機制17-18
• 1.1.6 臨床放射治療遠距離損傷與旁效應(yīng)18-19
• 1.2 本研究的目的、內(nèi)容與技術(shù)路線19-21
• 1.2.1 研究目的19
• 1.2.2 研究內(nèi)容19-20
• 1.2.3 技術(shù)路線20-21
• 第二章 6MV-X線照射對肺癌A549細胞的旁效應(yīng)21-33
• 2.1 材料與方法21-26
• 2.1.1 主要材料21
• 2.1.2 主要實驗試劑21
• 2.1.3 主要實驗儀器設(shè)備21-22
• 2.1.4 主要試劑配制22-23
• 2.1.5 主要實驗方法及步驟23-25
• 2.1.6 統(tǒng)計學(xué)分析25-26
• 2.2 結(jié)果與分析26-31
• 2.2.1 A549細胞正常培養(yǎng)26
• 2.2.2 克隆形成實驗結(jié)果26-28
• 2.2.3 細胞存活情況的測定28-29
• 2.2.4 G2/M期細胞周期的測定29
• 2.2.5 細胞凋亡檢測結(jié)果29-31
• 2.3 討論31-33
• 第三章 正常淋巴細胞旁效應(yīng)及旁效應(yīng)再傳遞33-40
• 3.1 材料和方法33-36
• 3.1.1 主要材料33
• 3.1.2 主要實驗試劑33
• 3.1.3 主要實驗儀器設(shè)備33-34
• 3.1.4 主要試劑配制34
• 3.1.5 主要實驗方法及步驟34-36
• 3.1.6 統(tǒng)計學(xué)方法36
• 3.2 結(jié)果與分析36-38
• 3.2.1 淋巴細胞存活情況36-37
• 3.2.2 淋巴細胞凋亡結(jié)果37-38
• 3.3 討論38-40
• 第四章 主要結(jié)論和展望40-41
• 4.1 主要結(jié)論40
• 4.2 工作展望40-41
• 參考文獻41-46
• 綜述46-56
• 參考文獻52-56
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文和參加的課題56-57
• 致謝57

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