本文關(guān)鍵詞：PI3Kγ抑制劑AS605240對小鼠胰腺癌的治療作用及機制研究

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【摘要】：背景和目的:近年來胰腺癌的發(fā)病率逐年增高,作為一種對放化療均不敏感且預(yù)后極差的腫瘤,人們迫切需要比起傳統(tǒng)療法更加有效的治療手段。胰腺癌在基因水平來看有許多較為明顯的特征,其中之一是K-Ras基因突變,75%-90%的胰腺癌發(fā)生和進展期間都可檢測到,而Ras家族的關(guān)鍵下游靶標(biāo)是磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K),PI3K可激活蛋白激酶Akt,從而激活胰腺癌侵襲性。最近的研究發(fā)現(xiàn)新型噻唑烷二酮類化合物AS605240是一種高選擇性的PI3Kγ抑制劑。AS605240可以強烈抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)血管生成,同時也能有效誘發(fā)多種神經(jīng)母細(xì)胞腫瘤細(xì)胞的凋亡及抑制小鼠神經(jīng)母細(xì)胞移植瘤的生長,此外還在胰腺炎、潰瘍性結(jié)腸炎、自身免疫性肝炎、肺纖維化等小鼠模型中顯示出良好的抗炎效果且對小鼠沒有明顯毒性。由于血管生成、逃避凋亡、慢性炎癥刺激均為腫瘤發(fā)病的重要步驟,以及p110γ在胰腺癌細(xì)胞株與胰腺癌組織中的高表達(dá),我們設(shè)想AS605240可能是一種對胰腺癌有良好療效而又沒有明顯毒副作用的藥物。目前,AS605240對胰腺癌的防治研究國內(nèi)外尚未見相關(guān)報道。因此,我們使用胰腺癌細(xì)胞株評估AS605240對體外胰腺癌細(xì)胞的直接抗腫瘤作用,同時也使用昆明小鼠構(gòu)建胰腺癌皮下移植瘤模型,首次研究AS605240在體內(nèi)模型中對胰腺癌的治療作用,研究其與化療藥物聯(lián)合使用可能的增敏作用,并探討可能的分子機制,為將AS605240開發(fā)成良好的胰腺癌化學(xué)預(yù)防及治療藥物打下堅實的基礎(chǔ)。方法:首先進行體外試驗,使用MTT法檢測AS605240對胰腺癌細(xì)胞株生長的效果。之后進行動物試驗,胰腺癌荷瘤小鼠模型建立后隨機分為4組:空白對照組、as605240治療組、單純5-fu治療組、as605240與5-fu聯(lián)合治療組。給藥開始后每隔2日測量一次腫瘤體積,繪制腫瘤生長曲線。于第29日處死小鼠,剝離出腫瘤組織并稱量重量,計算體積,同時取小鼠內(nèi)臟器官。he染色觀察小鼠器官及腫瘤病理組織學(xué)變化,免疫組化檢測ki-67、cyclind1、β-catenin表達(dá)水平變化,采用原位末端標(biāo)記tunel、caspase-3免疫熒光來檢測腫瘤組織凋亡情況,采用免疫熒光檢測cd31觀察腫瘤組織血管生成情況。采用免疫熒光檢測cd11b觀察腫瘤組織內(nèi)骨髓來源抑制性細(xì)胞變化情況,采用免疫熒光檢測f4/80以觀察腫瘤組織內(nèi)的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞變化情況,用免疫熒光雙染分別檢測腫瘤微環(huán)境中m1、m2兩種類型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞數(shù)量變化,再采用免疫熒光雙染分別檢測抑腫瘤細(xì)胞因子(ifn-γ)和促腫瘤細(xì)胞因子(il-10、mmp-9)的變化。采用逆轉(zhuǎn)錄pcr檢測腫瘤組織inos、ifn-γ、mr、il-10、vegf、mmp-9的表達(dá)情況。結(jié)果:1.各組腫瘤體積、小鼠生存時間比較小鼠移植瘤體積隨實驗進行逐漸增長,as605240治療組腫瘤體積較對照組相對較小,生存時間也較對照組有所延長。2.小鼠器官he染色檢測器官病理學(xué)變化肝腎肺脾he染色結(jié)果顯示各組小鼠器官的細(xì)胞均排列有序,組織無異常壞死區(qū),結(jié)構(gòu)與正常器官一致。3.mtt檢測體外腫瘤細(xì)胞生長情況as605240對體外培養(yǎng)的胰腺癌細(xì)胞生長狀態(tài)沒有明顯影響。4.免疫組化檢測腫瘤增殖及細(xì)胞周期蛋白指標(biāo)表達(dá)水平變化as605240治療對腫瘤組織中ki-67、cyclind1、Β-catenin蛋白的表達(dá)水平?jīng)]有明顯影響。5.免疫熒光檢測tunel、caspase-3觀察腫瘤組織凋亡as605240對小鼠胰腺癌組織中tunel陽性細(xì)胞及caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)量沒有明顯影響。6.免疫熒光檢測腫瘤組織內(nèi)免疫細(xì)胞數(shù)量變化as605240治療能顯著減少移植瘤內(nèi)浸潤的cd11b陽性骨髓來源免疫抑制細(xì)胞的數(shù)量,減少了腫瘤組織內(nèi)f4/80陽性巨噬細(xì)胞數(shù)量,同時還減少了m2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的數(shù)量而不影響m1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞數(shù)量,使得m1/m2比值升高。表明as605240抗胰腺癌作用與改變腫瘤微環(huán)境內(nèi)的免疫細(xì)胞成分比例有關(guān)。7.免疫熒光檢測腫瘤相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)情況as605240治療組鼠胰腺癌移植瘤組織中抑腫瘤細(xì)胞因子ifn-γ陽性細(xì)胞變化不大,而促腫瘤細(xì)胞因子il-10、mmp-9、vegf陽性細(xì)胞顯著減少。8.逆轉(zhuǎn)錄pcr檢測移植瘤組織細(xì)胞因子的表達(dá)情況as605240治療組鼠胰腺癌移植瘤組織中促腫瘤細(xì)胞因子il-10、mmp-9、vegf相對mrna減少,而抑腫瘤細(xì)胞因子ifnγ相對mrna表達(dá)沒有明顯變化。9.免疫熒光檢測腫瘤組織血管生成情況as605240治療能顯著減少鼠胰腺癌移植瘤中cd31陽性細(xì)胞數(shù)量。結(jié)論:1.AS605240能夠一定程度上抑制小鼠腫瘤生長并延長小鼠生存時間。2.實驗觀察及HE染色顯示AS605240對小鼠沒有明顯毒副作用。3.AS605240對體外腫瘤細(xì)胞的生長沒有明顯作用。4.AS605240對腫瘤組織增殖及細(xì)胞周期標(biāo)記物Ki-67、Cyclin D1、β-catenin蛋白的表達(dá)沒有明顯影響。5.AS605240能夠輕度刺激腫瘤組織凋亡,但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著。6.AS605240能夠明顯降低腫瘤內(nèi)浸潤的抑制性免疫細(xì)胞和M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的數(shù)量。7.AS605240能夠使得促腫瘤細(xì)胞因子IL-10、MMP-9、VEGF相對mRNA表達(dá)減少,而不影響抑腫瘤途徑細(xì)胞因子IFNγ相對mRNA表達(dá)。8.AS605240能夠明顯抑制腫瘤血管生成。9.本實驗為胰腺癌治療提供了一種新的思路。
【關(guān)鍵詞】：胰腺癌 PI3Kγ抑制劑 腫瘤微環(huán)境 AS605240
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 致謝3-4
• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-31
• 結(jié)果31-48
• 討論48-57
• 結(jié)論57-59
• 參考文獻(xiàn)59-67
• 綜述：GVAX腫瘤疫苗研究進展67-77
• 參考文獻(xiàn)74-77
• 附錄77-78
• 個人簡歷78-79

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李波;胰腺癌綜合治療現(xiàn)狀[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2000年06期

2 李凱炎,高如岳,王玲;胰腺癌超聲顯像診斷體會[J];中國超聲診斷雜志;2001年05期

3 王綿,趙戰(zhàn)勝,周紅,張力輝;胰腺癌伴發(fā)糖尿病15例分析[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年03期

4 冀文茹,烏恩,施琳,李超美;胰腺癌胰腺炎CD44V6,RB,C-myc基因檢測分析[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年03期

5 徐冬梅,孫勝英,王建文;胰腺癌73例分析[J];中國誤診學(xué)雜志;2001年10期

6 ;胰腺腫瘤[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年02期

7 ;胰腺腫瘤[J];國外科技資料目錄(醫(yī)藥衛(wèi)生);2002年01期

8 鄧曉春,莫云凌;胰腺癌臨床研究進展[J];腫瘤學(xué)雜志;2002年03期

9 呂自來,孫清慧,于德國;胰腺癌10例誤診原因分析[J];臨床醫(yī)藥實踐;2003年05期

10 周政文,張曉梅;60例胰腺癌臨床分析[J];醫(yī)學(xué)臨床研究;2004年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周小漁;劉朝陽;盧琪;戴翼;;兒童胰腺腫瘤5例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會論文集[C];2010年

2 王芹秀;雷成功;;胰腺腫瘤的超聲診斷及臨床評價[A];中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2004年

3 王煥民;祝秀丹;秦紅;;小兒胰腺腫瘤的外科治療[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會論文集[C];2010年

4 孫叢;周存升;;螺旋CT在胰腺腫瘤診斷中的臨床應(yīng)用[A];慶祝山東省醫(yī)學(xué)影像學(xué)研究所建所30周年學(xué)術(shù)論文�？痆C];2005年

5 金肖丹;宋洪亮;陳海川;;腹腔鏡治療胰腺腫瘤(附1例報告)[A];2005年浙江省外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

6 馬黎明;;胰腺癌的影像學(xué)診斷及進展[A];首屆全國分子核醫(yī)學(xué)暨分子影像學(xué)學(xué)術(shù)交流會資料匯編[C];2006年

7 靳大勇;樓文輝;匡天濤;王單松;許雪峰;;胰腺腫瘤根治切除術(shù)308例分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第十一屆全國胰腺外科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2006年

8 鄭茂松;許東興;蔣羽;林杰成;;胰腺癌164例治療臨床探討[A];中華醫(yī)學(xué)會第十一屆全國胰腺外科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2006年

9 沈潔;金璋;王海英;陳增邊;;三維立體定向放射治療胰腺癌35例分析[A];2007年浙江省放射腫瘤治療學(xué)學(xué)術(shù)年會暨腫瘤放射治療規(guī)范和新進展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

10 孫誠誼;喻超;劉建剛;王玉芝;;磁性5-氟尿嘧啶白蛋白微球抗人胰腺癌的實驗研究[A];2007年貴州省醫(yī)學(xué)會外科分會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 保健時報特約專家 郝純毅;偷偷隱藏的胰腺癌[N];保健時報;2007年

2 廣州復(fù)大腫瘤醫(yī)院 徐克成　穆峰;丹麥訪病之旅：聚焦胰腺癌的治療[N];健康報;2008年

3 郝純毅 北京腫瘤醫(yī)院肝膽胰外二科主任醫(yī)師;酗酒和吸煙最傷胰腺[N];大眾科技報;2011年

4 記者 朱弼瑜　專業(yè)指導(dǎo) 劉玉坦 新安國際醫(yī)院普通外科副主任醫(yī)師 董波 嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院營養(yǎng)學(xué)科負(fù)責(zé)人、公共營養(yǎng)師;健康生活,遠(yuǎn)離“癌癥之王”[N];嘉興日報;2011年

5 保健時報記者 王朝建 通訊員 王懿輝;中年突發(fā)糖尿病當(dāng)心胰腺癌[N];保健時報;2012年

6 上海市腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科主任醫(yī)師 虞先o，

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