本文關(guān)鍵詞：PI3Kγ抑制劑AS605240對(duì)小鼠胰腺癌的治療作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 胰腺癌 PI3Kγ抑制劑 腫瘤微環(huán)境 AS605240

【摘要】：背景和目的:近年來(lái)胰腺癌的發(fā)病率逐年增高,作為一種對(duì)放化療均不敏感且預(yù)后極差的腫瘤,人們迫切需要比起傳統(tǒng)療法更加有效的治療手段。胰腺癌在基因水平來(lái)看有許多較為明顯的特征,其中之一是K-Ras基因突變,75%-90%的胰腺癌發(fā)生和進(jìn)展期間都可檢測(cè)到,而Ras家族的關(guān)鍵下游靶標(biāo)是磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K),PI3K可激活蛋白激酶Akt,從而激活胰腺癌侵襲性。最近的研究發(fā)現(xiàn)新型噻唑烷二酮類化合物AS605240是一種高選擇性的PI3Kγ抑制劑。AS605240可以強(qiáng)烈抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)血管生成,同時(shí)也能有效誘發(fā)多種神經(jīng)母細(xì)胞腫瘤細(xì)胞的凋亡及抑制小鼠神經(jīng)母細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng),此外還在胰腺炎、潰瘍性結(jié)腸炎、自身免疫性肝炎、肺纖維化等小鼠模型中顯示出良好的抗炎效果且對(duì)小鼠沒(méi)有明顯毒性。由于血管生成、逃避凋亡、慢性炎癥刺激均為腫瘤發(fā)病的重要步驟,以及p110γ在胰腺癌細(xì)胞株與胰腺癌組織中的高表達(dá),我們?cè)O(shè)想AS605240可能是一種對(duì)胰腺癌有良好療效而又沒(méi)有明顯毒副作用的藥物。目前,AS605240對(duì)胰腺癌的防治研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此,我們使用胰腺癌細(xì)胞株評(píng)估AS605240對(duì)體外胰腺癌細(xì)胞的直接抗腫瘤作用,同時(shí)也使用昆明小鼠構(gòu)建胰腺癌皮下移植瘤模型,首次研究AS605240在體內(nèi)模型中對(duì)胰腺癌的治療作用,研究其與化療藥物聯(lián)合使用可能的增敏作用,并探討可能的分子機(jī)制,為將AS605240開(kāi)發(fā)成良好的胰腺癌化學(xué)預(yù)防及治療藥物打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。方法:首先進(jìn)行體外試驗(yàn),使用MTT法檢測(cè)AS605240對(duì)胰腺癌細(xì)胞株生長(zhǎng)的效果。之后進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn),胰腺癌荷瘤小鼠模型建立后隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照組、as605240治療組、單純5-fu治療組、as605240與5-fu聯(lián)合治療組。給藥開(kāi)始后每隔2日測(cè)量一次腫瘤體積,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。于第29日處死小鼠,剝離出腫瘤組織并稱量重量,計(jì)算體積,同時(shí)取小鼠內(nèi)臟器官。he染色觀察小鼠器官及腫瘤病理組織學(xué)變化,免疫組化檢測(cè)ki-67、cyclind1、β-catenin表達(dá)水平變化,采用原位末端標(biāo)記tunel、caspase-3免疫熒光來(lái)檢測(cè)腫瘤組織凋亡情況,采用免疫熒光檢測(cè)cd31觀察腫瘤組織血管生成情況。采用免疫熒光檢測(cè)cd11b觀察腫瘤組織內(nèi)骨髓來(lái)源抑制性細(xì)胞變化情況,采用免疫熒光檢測(cè)f4/80以觀察腫瘤組織內(nèi)的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞變化情況,用免疫熒光雙染分別檢測(cè)腫瘤微環(huán)境中m1、m2兩種類型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞數(shù)量變化,再采用免疫熒光雙染分別檢測(cè)抑腫瘤細(xì)胞因子(ifn-γ)和促腫瘤細(xì)胞因子(il-10、mmp-9)的變化。采用逆轉(zhuǎn)錄pcr檢測(cè)腫瘤組織inos、ifn-γ、mr、il-10、vegf、mmp-9的表達(dá)情況。結(jié)果:1.各組腫瘤體積、小鼠生存時(shí)間比較小鼠移植瘤體積隨實(shí)驗(yàn)進(jìn)行逐漸增長(zhǎng),as605240治療組腫瘤體積較對(duì)照組相對(duì)較小,生存時(shí)間也較對(duì)照組有所延長(zhǎng)。2.小鼠器官he染色檢測(cè)器官病理學(xué)變化肝腎肺脾he染色結(jié)果顯示各組小鼠器官的細(xì)胞均排列有序,組織無(wú)異常壞死區(qū),結(jié)構(gòu)與正常器官一致。3.mtt檢測(cè)體外腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)情況as605240對(duì)體外培養(yǎng)的胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)沒(méi)有明顯影響。4.免疫組化檢測(cè)腫瘤增殖及細(xì)胞周期蛋白指標(biāo)表達(dá)水平變化as605240治療對(duì)腫瘤組織中ki-67、cyclind1、Β-catenin蛋白的表達(dá)水平?jīng)]有明顯影響。5.免疫熒光檢測(cè)tunel、caspase-3觀察腫瘤組織凋亡as605240對(duì)小鼠胰腺癌組織中tunel陽(yáng)性細(xì)胞及caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量沒(méi)有明顯影響。6.免疫熒光檢測(cè)腫瘤組織內(nèi)免疫細(xì)胞數(shù)量變化as605240治療能顯著減少移植瘤內(nèi)浸潤(rùn)的cd11b陽(yáng)性骨髓來(lái)源免疫抑制細(xì)胞的數(shù)量,減少了腫瘤組織內(nèi)f4/80陽(yáng)性巨噬細(xì)胞數(shù)量,同時(shí)還減少了m2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的數(shù)量而不影響m1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞數(shù)量,使得m1/m2比值升高。表明as605240抗胰腺癌作用與改變腫瘤微環(huán)境內(nèi)的免疫細(xì)胞成分比例有關(guān)。7.免疫熒光檢測(cè)腫瘤相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)情況as605240治療組鼠胰腺癌移植瘤組織中抑腫瘤細(xì)胞因子ifn-γ陽(yáng)性細(xì)胞變化不大,而促腫瘤細(xì)胞因子il-10、mmp-9、vegf陽(yáng)性細(xì)胞顯著減少。8.逆轉(zhuǎn)錄pcr檢測(cè)移植瘤組織細(xì)胞因子的表達(dá)情況as605240治療組鼠胰腺癌移植瘤組織中促腫瘤細(xì)胞因子il-10、mmp-9、vegf相對(duì)mrna減少,而抑腫瘤細(xì)胞因子ifnγ相對(duì)mrna表達(dá)沒(méi)有明顯變化。9.免疫熒光檢測(cè)腫瘤組織血管生成情況as605240治療能顯著減少鼠胰腺癌移植瘤中cd31陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量。結(jié)論:1.AS605240能夠一定程度上抑制小鼠腫瘤生長(zhǎng)并延長(zhǎng)小鼠生存時(shí)間。2.實(shí)驗(yàn)觀察及HE染色顯示AS605240對(duì)小鼠沒(méi)有明顯毒副作用。3.AS605240對(duì)體外腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯作用。4.AS605240對(duì)腫瘤組織增殖及細(xì)胞周期標(biāo)記物Ki-67、Cyclin D1、β-catenin蛋白的表達(dá)沒(méi)有明顯影響。5.AS605240能夠輕度刺激腫瘤組織凋亡,但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著。6.AS605240能夠明顯降低腫瘤內(nèi)浸潤(rùn)的抑制性免疫細(xì)胞和M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的數(shù)量。7.AS605240能夠使得促腫瘤細(xì)胞因子IL-10、MMP-9、VEGF相對(duì)mRNA表達(dá)減少,而不影響抑腫瘤途徑細(xì)胞因子IFNγ相對(duì)mRNA表達(dá)。8.AS605240能夠明顯抑制腫瘤血管生成。9.本實(shí)驗(yàn)為胰腺癌治療提供了一種新的思路。
【關(guān)鍵詞】：胰腺癌 PI3Kγ抑制劑 腫瘤微環(huán)境 AS605240
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 致謝3-4
• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-31
• 結(jié)果31-48
• 討論48-57
• 結(jié)論57-59
• 參考文獻(xiàn)59-67
• 綜述：GVAX腫瘤疫苗研究進(jìn)展67-77
• 參考文獻(xiàn)74-77
• 附錄77-78
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷78-79

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5 保健時(shí)報(bào)記者 王朝建 通訊員 王懿輝;中年突發(fā)糖尿病當(dāng)心胰腺癌[N];保健時(shí)報(bào);2012年

6 上海市腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科主任醫(yī)師 虞先o，

本文編號(hào)：872692