本文關(guān)鍵詞：miR-4449在多發(fā)性骨髓瘤中的表達(dá)及生物學(xué)功能的研究

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【摘要】：目的通過(guò)檢測(cè)骨髓和血清標(biāo)本mi R-4449表達(dá)水平,探討mi R-4449作為多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)血清輔助診斷標(biāo)志物的臨床價(jià)值及與其它臨床指標(biāo)的相關(guān)性,并進(jìn)一步通過(guò)細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證mi R-4449的腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為,證實(shí)其在MM中的癌基因作用及相關(guān)臨床應(yīng)用價(jià)值。方法用基因芯片法檢測(cè)4例MM病人和3例健康對(duì)照者的骨髓樣本中不同mi RNA的表達(dá)水平,將數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后,對(duì)差異mi RNA進(jìn)行聚類分析。用TRIzol Reagent法提取骨髓總RNA,用AMBION mir Vana PARIS Kit法提取血清總RNA,隨后采用特異莖環(huán)引物將內(nèi)參基因U6與目的基因mi R-4449分別逆轉(zhuǎn)錄,采用SYBR Green I q RT-PCR法檢測(cè)16例MM病人和5例健康對(duì)照者骨髓mi R-4449的表達(dá)量,同法檢測(cè)71例MM病人以及46例健康對(duì)照者血清mi R-4449的表達(dá)量,分析它們與其他臨床指標(biāo)的相關(guān)性以及MM病人骨髓及血清標(biāo)本mi R-4449相對(duì)表達(dá)量的相關(guān)性。將mi R-4449模擬物、抑制物以及各自陰性對(duì)照分別轉(zhuǎn)染入U(xiǎn)266細(xì)胞,使用q RT-PCR檢測(cè)各組mi R-4449的表達(dá)水平,通過(guò)Transwell小室檢測(cè)各組細(xì)胞的遷移能力,WST-1法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力,FCM法檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果芯片結(jié)果顯示,MM病人骨髓mi R-4449的相對(duì)表達(dá)量5.28±0.763顯著高于健康對(duì)照者2.47±1.27(P0.05)。用q RT-PCR法驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),MM病人骨髓mi R-4449的相對(duì)表達(dá)量2.140±1.423顯著高于健康對(duì)照者0.815±0.165(P0.05);其血清mi R-4449的相對(duì)表達(dá)量2.112±2.101也顯著高于健康對(duì)照者0.357±0.235(P0.05)。MM病人骨髓mi R-4449相對(duì)表達(dá)量與對(duì)應(yīng)血清mi R-4449相對(duì)表達(dá)量呈正相關(guān)(r=0.833,P0.05)。將血清mi R-4449相對(duì)表達(dá)量與臨床相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn),MM病人血清mi R-4449相對(duì)表達(dá)量與血清β2-M、輕鏈λ和輕鏈κ濃度呈正相關(guān)(r=0.48,P0.05;r=0.56,P0.05;r=0.56,P0.05)。血清mi R-4449相對(duì)表達(dá)量與輕鏈λ、輕鏈κ和β2-M聯(lián)合檢測(cè)能有效提高M(jìn)M的診斷靈敏度。U266細(xì)胞轉(zhuǎn)染mi R-4449模擬物和抑制物后,模擬物組細(xì)胞增殖能力顯著高于抑制物組,細(xì)胞遷移數(shù)也顯著高于抑制物組(P0.05),細(xì)胞凋亡數(shù)則顯著低于抑制物組(P0.05)。結(jié)論Mi R-4449在MM病人骨髓和血清中均異常高表達(dá),且兩者表達(dá)水平呈正相關(guān),其在MM中可能起著癌基因的作用,血清mi R-4449可成為MM輔助診斷的一個(gè)標(biāo)志物。血清mi R-4449相對(duì)表達(dá)量與血清輕鏈λ、輕鏈κ和β2-M濃度呈正相關(guān),將四個(gè)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)能有效提高M(jìn)M的診斷靈敏度。在體外抑制MM細(xì)胞內(nèi)mi R-4449的表達(dá),可抑制MM細(xì)胞的增殖和遷移,并促進(jìn)其凋亡,mi R-4449有機(jī)會(huì)成為MM靶向治療新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：mi R-4449 多發(fā)性骨髓瘤 血清
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.3
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 緒論11-14
• 1.1 課題來(lái)源、研究目的和意義11-12
• 1.2 國(guó)內(nèi)外研究概況12-13
• 1.3 論文的主要研究?jī)?nèi)容13-14
• 第二章 材料與方法14-24
• 2.1 研究資料及儀器設(shè)備14-15
• 2.1.1 研究對(duì)象14
• 2.1.2 主要設(shè)備與儀器14-15
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)流程與方法15-24
• 2.2.1 血清標(biāo)本采集及處理15
• 2.2.2 骨髓、細(xì)胞標(biāo)本采集及處理15-16
• 2.2.3 血清總RNA提取16-17
• 2.2.4 骨髓、細(xì)胞總RNA提取17-18
• 2.2.5 基因芯片技術(shù)18
• 2.2.6 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)18-19
• 2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（q RT-PCR）19-20
• 2.2.8 臨床標(biāo)本miR-4449 表達(dá)水平的檢測(cè)20
• 2.2.9 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)20-21
• 2.2.9.1 細(xì)胞復(fù)蘇20-21
• 2.2.9.2 細(xì)胞培養(yǎng)21
• 2.2.9.3 細(xì)胞凍存21
• 2.2.10 細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)21-22
• 2.2.11 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（WST-1）22
• 2.2.12 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)22-23
• 2.2.13 細(xì)胞凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)23
• 2.2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-24
• 第三章 結(jié)果24-35
• 3.1 基因芯片篩查異常表達(dá)的miRNA24-25
• 3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-4449 表達(dá)水平方法的建立25-26
• 3.3 miR-4449 的骨髓相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)及檢測(cè)診斷價(jià)值26-27
• 3.3.1 MM病人血骨髓清miR-4449 相對(duì)表達(dá)量26-27
• 3.3.2 miR-4449 骨髓檢測(cè)診斷價(jià)值27
• 3.4 miR-4449 的血清相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)及意義27-31
• 3.4.1 MM病人血清miR-4449 相對(duì)表達(dá)量27-28
• 3.4.2 miR-4449 血清檢測(cè)診斷價(jià)值28
• 3.4.3 MM病人的骨髓及血清標(biāo)本miR-4449 相對(duì)表達(dá)量的相關(guān)性28
• 3.4.4 MM病人血清miR-4449 相對(duì)表達(dá)量與性別及臨床分型的關(guān)系28-29
• 3.4.5 MM病人血清miR-4449 相對(duì)表達(dá)量與臨床生化指標(biāo)的相關(guān)性29-30
• 3.4.6 血清miR-4449 與輕鏈λ、輕鏈κ、β2-M的聯(lián)合檢測(cè)30-31
• 3.5 轉(zhuǎn)染效率直觀圖31-32
• 3.6 miR-4449 促進(jìn)U266細(xì)胞增殖32-33
• 3.7 miR-4449 促進(jìn)U266細(xì)胞遷移33-34
• 3.8 miR-4449 抑制U266細(xì)胞凋亡34-35
• 第四章 討論35-40
• 第五章 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 英文縮寫(xiě)詞表45-46
• 綜述46-62
• 綜述參考文獻(xiàn)56-62
• 在攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文與參加的項(xiàng)目62-63
• 致謝63

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本文編號(hào)：849397