本文關(guān)鍵詞：艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑抑制肺腺癌A549細(xì)胞裸鼠移植瘤侵襲和轉(zhuǎn)移及其作用機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:肺癌的發(fā)病率、死亡率均居全球惡性腫瘤首位,非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)約占85%,五年生存率僅10%~15%,嚴(yán)重威脅人類生命健康。肺癌早期癥狀不典型,確診時(shí)多已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,侵襲和轉(zhuǎn)移是影響患者生存率的重要原因。因此,發(fā)現(xiàn)新的作用靶點(diǎn)、尋找抑制肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物將成為治療肺癌的突破點(diǎn)。肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是由多因子、多信號(hào)通路參與且互相影響的復(fù)雜過(guò)程,尋找肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移特異性的生物標(biāo)志物并干預(yù)其表達(dá)是抑制肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的有效途徑之一。上皮鈣黏蛋白(E-cadherin)是一類介導(dǎo)同種上皮細(xì)胞之間相互黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白,調(diào)節(jié)細(xì)胞之間及細(xì)胞與基質(zhì)之間的黏附作用,在非小細(xì)胞肺癌增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等多環(huán)節(jié)中發(fā)揮重要作用。埃茲蛋白(Ezrin)是一種膜-細(xì)胞骨架連接蛋白,與肺癌組織學(xué)類型、細(xì)胞分化程度、臨床分期無(wú)明顯相關(guān),與淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系較為密切。與張力蛋白同源10號(hào)染色體缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)是第一個(gè)具有雙特異性磷酸酶活性的新型抑癌基因。研究表明,PTEN蛋白低表達(dá)或不表達(dá)肺癌患者更易發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移,且生存期短于高表達(dá)或陽(yáng)性表達(dá)者。皮層肌動(dòng)蛋白(Cortactin)是一種微絲肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,通過(guò)影響腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞外基質(zhì)降解、失巢凋亡、細(xì)胞黏附等不同作用機(jī)制參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。Cortactin蛋白在肺癌組織高表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)在肺癌組織中高表達(dá),與肺癌細(xì)胞增殖、凋亡、血管生成、淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)。研究表明COX-2抑制劑如塞來(lái)昔布、尼美舒利均可抑制肺癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡、抑制新生血管和淋巴管生成等,從而抑制肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移。艾瑞昔布(Imrecoxib)作為新型適度選擇性COX-2抑制劑,減少高選擇性COX-2抑制劑產(chǎn)生的嚴(yán)重心血管事件。國(guó)內(nèi)外關(guān)于艾瑞昔布抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的報(bào)道并不多見(jiàn)。第3代化療藥物洛鉑通過(guò)形成Pt-GG和Pt-AG鏈內(nèi)交叉連接阻礙腫瘤細(xì)胞DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄,能明顯減輕順鉑的腎毒性,減輕奧沙利鉑的神經(jīng)毒性,具有抗瘤譜廣,腫瘤組織中濃度高而血漿中濃度低等優(yōu)勢(shì)。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于COX-2抑制劑聯(lián)合化療藥物是否可增強(qiáng)化療療效尚不明確,本研究旨在探討艾瑞昔布單藥及其聯(lián)合洛鉑對(duì)人肺癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)是否具有抑制作用,通過(guò)對(duì)E-cadherin、Ezrin、Cortactin及PTEN蛋白及相應(yīng)m RNA表達(dá)的影響,探究艾瑞昔布單藥及聯(lián)合洛鉑能否抑制肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移及其作用機(jī)制。方法:選取30只BALB/c雄性裸小鼠,4~5周齡,體重20~24g,飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境中。將F12k培養(yǎng)基培養(yǎng)的處于對(duì)數(shù)期肺腺癌A549細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液,接種于裸鼠右側(cè)腋部皮下,建立人肺癌裸鼠移植瘤模型。當(dāng)移植瘤平均直徑約4mm時(shí)造模成功,剔除造模未成功的1只裸鼠,將剩余裸鼠隨機(jī)分為4組:對(duì)照組、艾瑞昔布組、洛鉑組、艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑組,艾瑞昔布組8只,其余組7只。對(duì)照組口服等量滅菌蒸餾水及尾靜脈注射等量生理鹽水,艾瑞昔布組經(jīng)口灌胃艾瑞昔布片40mg.kg-1.d-1同時(shí)尾靜脈注射等量生理鹽水,洛鉑組經(jīng)尾靜脈注射洛鉑7.5mg.kg-1.w-1同時(shí)口服等量滅菌蒸餾水,艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑組給藥方法和劑量與單一用藥組相同。給藥6周后,采用頸椎脫臼法處死裸鼠并完整剝?nèi)∧[瘤組織。使用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤的長(zhǎng)徑(a)、短徑(b),按公式V=ab2/2,估算移植瘤近似體積并稱重量。用4%多聚甲醛固定腫瘤組織,免疫組織化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)各組移植瘤組織E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin蛋白表達(dá),Real-Time PCR檢測(cè)各組移植瘤組織E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin m RNA含量。結(jié)果:1接種30只裸鼠,29只成瘤,成瘤時(shí)間集中在7~12天。艾瑞昔布組1只裸鼠死于灌胃。與對(duì)照組相比,艾瑞昔布組、洛鉑組及艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑組腫瘤體積減小(P?0.05),重量減輕(P?0.05),壞死區(qū)域增多;與單藥組相比,艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑組腫瘤體積減小(P?0.05),重量減輕(P?0.05),壞死區(qū)域增多。2免疫組織化學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)移植瘤組織E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin蛋白表達(dá)結(jié)果表明,艾瑞昔布組及艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑組E-cadherin、PTEN蛋白表達(dá)較對(duì)照組升高(P?0.05),Ezrin、Cortactin蛋白表達(dá)較對(duì)照組降低(P?0.05);艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑組E-cadherin、PTEN蛋白表達(dá)較單藥組升高(P?0.05),Ezrin、Cortactin蛋白表達(dá)較單藥組降低(P?0.05);艾瑞昔布組與洛鉑組E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin蛋白表達(dá)無(wú)明顯差別(P?0.05)。3 Real-Time PCR檢測(cè)移植瘤組織E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin m RNA含量結(jié)果表明,艾瑞昔布組及艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑組E-cadherin、PTEN m RNA含量較對(duì)照組升高(P?0.05),Ezrin、Cortactin m RNA含量較對(duì)照組降低(P?0.05);艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑組E-cadherin、PTEN m RNA含量較單藥組升高(P?0.05),Ezrin、Cortactin m RNA含量較單藥組降低(P?0.05);艾瑞昔布組與洛鉑組E-cadherin、Ezrin、PTEN及Cortactin m RNA含量無(wú)明顯差別(P?0.05)。結(jié)論:1艾瑞昔布單藥及聯(lián)合洛鉑均能抑制非小細(xì)胞肺癌的生長(zhǎng)。2艾瑞昔布單藥及聯(lián)合洛鉑可上調(diào)E-cadherin蛋白及E-cadherin m RNA、PTEN蛋白及PTEN m RNA的表達(dá),下調(diào)Ezrin蛋白及Ezrin m RNA、Cortactin蛋白及Cortactin m RNA的表達(dá),抑制非小細(xì)胞肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移;艾瑞昔布聯(lián)合洛鉑可提高艾瑞昔布或洛鉑單藥抑制非小細(xì)胞肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的療效,艾瑞昔布對(duì)洛鉑化療可能具有協(xié)同作用。3艾瑞昔布可能成為抑制肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移新的作用靶點(diǎn),成為肺癌治療的突破點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 侵襲轉(zhuǎn)移 艾瑞昔布 洛鉑 上皮鈣黏蛋白 埃茲蛋白 磷酸酶抑制基因 皮層肌動(dòng)蛋白
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文縮寫(xiě)12-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-26
• 附圖26-32
• 附表32-34
• 討論34-39
• 結(jié)論39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 綜述 Cortactin與非小細(xì)胞肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移研究進(jìn)展44-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李俊偉;楊紅;張尚福;余南彬;周清華;;ezrin和E-cadherin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)肺癌雜志;2007年03期

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本文編號(hào)：840535