本文關(guān)鍵詞：RNA干擾SMYD3基因?qū)θ耸彻荀[癌細(xì)胞組蛋白3賴氨酸4三甲基化影響

  更多相關(guān)文章： SMYD3 食管癌 RNA干擾 H3K4三甲基化 表觀遺傳學(xué)

【摘要】：目的:觀察H3K4三甲基化在人食管鱗癌組織以及相應(yīng)癌旁組織的水平,比較二者之間的差異;檢驗SMYD3-si RNA下調(diào)食管鱗癌細(xì)胞SMYD3表達(dá)的效應(yīng);探討下調(diào)SMYD3基因表達(dá)對食管鱗癌細(xì)胞中H3K4三甲基化狀態(tài)改變的影響。方法:1、選取14例人食管鱗癌組織及相應(yīng)的食管癌旁組織,提取組蛋白,采用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay簡稱ELISA)方法,觀察H3K4三甲基化的水平。2、合成下調(diào)SMYD3的3組si RNA(si RNA-440,si RNA-926,si RNA-1232)及陰性對照、陽性對照,分別轉(zhuǎn)染入人食管鱗癌TE13細(xì)胞,用熒光定量PCR、Western blot技術(shù),從m RNA水平和蛋白水平分別檢測轉(zhuǎn)染si RNA后人食管鱗癌TE13細(xì)胞SMYD3,篩選出干擾效果最好的si RNA;轉(zhuǎn)染SMYD3-si RNA后,運(yùn)用ELISA方法檢測人食管鱗癌TE13細(xì)胞H3K4三甲基化水平的變化。結(jié)果:1、在14例食管癌旁組織及癌組織中,癌組織中SMYD3蛋白的H3K4三甲基化水平高于食管癌旁組織,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。2、以空白對照組及陰性對照組為對照,食管鱗癌TE13細(xì)胞轉(zhuǎn)染SMYD3-si RNA后,SMYD3的m RNA和蛋白表達(dá)水平均明顯下降,其中SMYD3-si RNA-936干擾效果最好(p0.05);轉(zhuǎn)染SMYD3-si RNA-936后,食管鱗癌TE13細(xì)胞的H3K4三甲基化水平較陰性對照組和空白對照組有明顯下降(p0.05);而陰性對照組和空白對照組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1、H3K4三甲基化在食管鱗癌組及相應(yīng)食管癌旁組織當(dāng)中均存在,提示H3K4三甲基化可能參與細(xì)胞的正常生理活動;但在人食管鱗癌組織中水平明顯高于相應(yīng)正常食管組織,提示食管鱗癌的發(fā)生與H3K4三甲基化增高有密切關(guān)系。從而,明確進(jìn)一步研究H3K4甲基化轉(zhuǎn)移酶SMYD3基因在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中作用及機(jī)理的意義。2、應(yīng)用siRNA技術(shù)高效下調(diào)食管鱗癌TE13細(xì)胞SMYD3基因的表達(dá),篩選出干擾效果最強(qiáng)的si RNA;通過si RNA技術(shù)下調(diào)SMYD3基因的表達(dá)可以導(dǎo)致食管鱗癌TE13細(xì)胞中H3K4三甲基化下調(diào),證明食管鱗癌中SMYD3可能通過作用于組蛋白H3K4三甲基化,進(jìn)而調(diào)節(jié)其他基因的表達(dá)。為食管鱗癌的基因治療研究打下了實驗基礎(chǔ),同時提示SMYD3基因可能作為食管鱗癌基因治療的一個靶點。
【關(guān)鍵詞】：SMYD3 食管癌 RNA干擾 H3K4三甲基化 表觀遺傳學(xué)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-14
• 一、人類食管鱗癌組織中H3K4三甲基化水平及意義14-21
• 1.1 材料和方法14-16
• 1.1.1 臨床資料14
• 1.1.2 主要試劑14
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備14-15
• 1.1.4 實驗方法15-16
• 1.1.5 統(tǒng)計學(xué)方法16
• 1.2 結(jié)果16-18
• 1.2.1 H3K4三甲基化在人類食管鱗癌表達(dá)高于正常組織16-18
• 1.3 討論18-20
• 1.3.1 食管癌的現(xiàn)狀18
• 1.3.2 組蛋白甲基化修飾意義18-20
• 1.3.3 H3K4三甲基化水平的增高在食管鱗癌中的作用20
• 1.4 小結(jié)20-21
• 二、RNA干擾食管癌細(xì)胞SMYD3基因表達(dá)對H3K4me3的影響21-51
• 2.1 材料和方法21-39
• 2.1.1 實驗對象21
• 2.1.2 主要試劑21-23
• 2.1.3 試劑的配制23-27
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備27-28
• 2.1.5 實驗方法28-39
• 2.1.6 統(tǒng)計學(xué)方法39
• 2.2 結(jié)果39-43
• 2.2.1 SMYD3 siRNA轉(zhuǎn)染后對SMYD3mRNA表達(dá)的影響39-41
• 2.2.2 SMYD3 siRNA轉(zhuǎn)染后對SMYD3蛋白表達(dá)的影響41-42
• 2.2.3 SMYD3 siRNA轉(zhuǎn)染后對TE13細(xì)胞H3K4三甲基化水平的影響42-43
• 2.3 討論43-50
• 2.3.1 SMYD3結(jié)構(gòu)和功能43-45
• 2.3.2 RNA干擾（RNAi）技術(shù)的原理及特點45-46
• 2.3.3 siRNA的設(shè)計、制備和轉(zhuǎn)染46-47
• 2.3.4 RNA干擾技術(shù)的應(yīng)用47-48
• 2.3.5 實時熒光定量PCR技術(shù)48
• 2.3.6 Western blot技術(shù)48-49
• 2.3.7 SMYD3與H3K4me3之間相互作用49-50
• 2.4 小結(jié)50-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 綜述 組蛋白甲基化酶SMYD3研究進(jìn)展58-75
• 綜述參考文獻(xiàn)69-75
• 致謝75

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：791948