本文關(guān)鍵詞：組織HSP70介導(dǎo)HIFU消融胰腺癌后大鼠的T細(xì)胞免疫增強(qiáng)效應(yīng)

  更多相關(guān)文章： 高強(qiáng)度聚焦超聲 胰腺癌 HSP70 T細(xì)胞免疫

【摘要】：研究背景高強(qiáng)度聚焦超聲(high-intensity focused ultrasound,HIFU)作為近年來(lái)新興的局部腫瘤消融治療手段得到人們的廣泛關(guān)注,HIFU利用超聲波良好的組織穿透性和方向性,將超聲波能量聚焦到靶區(qū)腫瘤組織,產(chǎn)生的瞬間高溫將靶區(qū)腫瘤形成凝固性壞死,在不損傷靶區(qū)外周?chē)M織器官的同時(shí)達(dá)到治療腫瘤的目的。HSP70是熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)家族中最重要的成員之一,HSP70具有分子伴侶功能,參與抗原的合成、組裝和呈遞,并與抗原肽形成HSP-肽復(fù)合物,激活機(jī)體產(chǎn)生的特異性免疫應(yīng)答。HSP70可參與體內(nèi)多種免疫過(guò)程:HSP70作為免疫系統(tǒng)的外源性抗原,可以不經(jīng)過(guò)專(zhuān)職抗原提呈細(xì)胞(Antigen presenting cell,APC)的處理,直接與APC細(xì)胞表面的MHC-II受體分子結(jié)合,活化CD_4~+T淋巴細(xì)胞,增強(qiáng)機(jī)體的免疫效應(yīng)。HIFU消融靶區(qū)腫瘤后,局部腫瘤細(xì)胞在高溫應(yīng)激下大量表達(dá)HSP蛋白,同時(shí)會(huì)伴隨著腫瘤細(xì)胞的死亡被釋放到細(xì)胞外,HIFU消融產(chǎn)生的HSP蛋白是否具有生物活性,能否發(fā)揮抗原呈遞作用進(jìn)而激活T細(xì)胞免疫還有待進(jìn)一步探究。臨床研究發(fā)現(xiàn),HIFU治療乳腺癌原發(fā)灶后,VEGF和CA125等腫瘤抗原在癌組織中大量表達(dá)[1];腫瘤組織中的APC數(shù)量明顯增多,主要組織相容性復(fù)合體MHC-II和共刺激分子表達(dá)上調(diào)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),HIFU治療乳腺癌后,靶區(qū)腫瘤組織中的腫瘤細(xì)胞的死亡明顯增加,CD_4~+T細(xì)胞,CD_8~+T和NK細(xì)胞數(shù)目增多,T淋巴細(xì)胞的功能被激活,T細(xì)胞免疫效應(yīng)增強(qiáng)[2]。上述研究結(jié)果表明HIFU治療靶區(qū)腫瘤后,腫瘤壞死組織中的腫瘤抗原可能通過(guò)某些機(jī)制激活了機(jī)體的特異性抗原遞呈的途徑,機(jī)體的特異性抗腫瘤細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)。本課題前期研究發(fā)現(xiàn),HIFU單獨(dú)或者聯(lián)合化療藥物治療胰腺癌后,胰腺腫瘤縮小或者生長(zhǎng)受到抑制,血糖代謝轉(zhuǎn)歸良好,機(jī)體的抗腫瘤免疫效應(yīng)明顯增強(qiáng)[3]。本課題在此基礎(chǔ)上,建立SD大鼠胰腺癌原位模型,通過(guò)12.0m Hz高頻B超篩選出腫瘤大鼠;HIFU消融SD大鼠胰腺癌后,觀察局部組織中HSP70的表達(dá)與機(jī)體免疫效應(yīng)的變化,探究HSP70對(duì)抗原呈遞的影響和免疫效應(yīng)增強(qiáng)的機(jī)制,為HIFU治療胰腺癌在臨床應(yīng)用上提供有效的科學(xué)依據(jù)。研究目的通過(guò)將SD大鼠胰腺癌的高頻B超與普通診斷B超的影像學(xué)特征進(jìn)行對(duì)比分析,并結(jié)合病理組織學(xué)診斷,建立SD大鼠胰腺癌的高頻B超影像學(xué)診斷方法;通過(guò)分析HIFU消融后局部組織HSP70及抗原呈遞相關(guān)MHC-II和ZAP70表達(dá)水平的變化和大鼠的外周血IL-2、IFN-γ水平和CD_3+/CD_4~+T細(xì)胞數(shù)目的變化,探究HIFU消融SD大鼠胰腺癌后機(jī)體T細(xì)胞免疫效應(yīng)和組織HSP70及其抗原傳遞相關(guān)因子變化的相關(guān)性。研究方法1.用二甲基苯并蒽(7,12-dimethylbenz(a)anthracene,DMBA)誘導(dǎo)法建立大鼠胰腺原位癌模型,對(duì)照組為正常健康大鼠,分別利用12.0m Hz高頻超聲和5.0m Hz普通診斷超聲對(duì)SD大鼠的不同體位進(jìn)行橫斷面掃描,對(duì)比分析SD大鼠胰腺癌病灶12.0m Hz高頻超聲和5.0m Hz普通診斷超聲的影像學(xué)特征,聯(lián)合大鼠胰腺癌病理組織學(xué)判斷胰腺腫瘤特性,建立大鼠胰腺癌高頻B超影像診斷方法。2.高頻B超影像診斷篩選90只胰腺癌模型SD大鼠,將診斷出的患有胰腺癌的大鼠隨機(jī)分為HIFU消融實(shí)驗(yàn)組和模型對(duì)照組,40只正常健康大鼠作為正常對(duì)照組。將高強(qiáng)度聚焦超聲(功率為5w,聲強(qiáng)為2500W/cm2)作用于實(shí)驗(yàn)組大鼠,采用點(diǎn)消融的方式,每次消融時(shí)間為5s,進(jìn)行完全消融;模型對(duì)照組和正常組不做消融處理,其他處理完全相同。分別在消融后2h、4h、8h和12h取大鼠胰腺組織,采用免疫組化兩步法和蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)HSP70、MHC-II和ZAP70在局部組織中的表達(dá)情況;分別在消融后1天、4天、7天和14天采用心臟取血的方法取大鼠的外周血,ELISA檢測(cè)外周血IL-2和IFN-γ水平;采用密度梯度離心法分離外周血淋巴細(xì)胞,流式細(xì)胞儀分析外周血CD_3+/CD_4~+T細(xì)胞亞群的數(shù)量。研究結(jié)果1.與正常組的大鼠相比,SD大鼠胰腺腫瘤在12.0m Hz高頻超聲掃描影像中呈現(xiàn)低回聲,形狀較為規(guī)則,多為球形或者橢球形,腫瘤層次明顯,與周?chē)鞴俳缦掭^為明顯;SD大鼠胰腺癌在5.0m Hz的診斷超聲掃描下,未能發(fā)現(xiàn)明顯的腫瘤低回聲區(qū),影像較為模糊;12.0m Hz高頻超聲與5.0m Hz診斷超聲相比,高頻B超掃描的胰腺腫瘤的影像更為清晰,腫瘤低回聲區(qū)域更加明顯;病理組織學(xué)顯示SD大鼠胰腺腫瘤組織有大量的導(dǎo)管細(xì)胞增生并伴隨著浸潤(rùn)性增長(zhǎng),呈現(xiàn)胰腺導(dǎo)管癌病理學(xué)特征。2.HIFU消融SD大鼠胰腺癌后,外周血IL-2、IFN-γ水平和CD_3+/CD_4~+T細(xì)胞亞群數(shù)量逐漸增高,消融4天后實(shí)驗(yàn)組大鼠外周血IL-2的水平(22.6±1.312)與對(duì)照組(17.37±0.872)相比差異顯著(p0.05),IFN-γ的水平在消融7天組(145.37±6.304)明顯升高,與對(duì)照組(126.87±5.021)相比具有顯著性差異(p0.05);CD_3+/CD_4~+T細(xì)胞亞群數(shù)量在消融后7天(45.65±4.384)明顯升高,與對(duì)照組(28.23±2.991)相比具有顯著性差異(p0.05);HIFU消融后7~10天內(nèi)大鼠外周血IL-2、IFN-γ水平和CD_3+/CD_4~+T細(xì)胞亞群數(shù)量逐漸增加,接近正常組水平。3.HIFU消融SD大鼠胰腺癌后,局部組織中HSP70、MHC-II和ZAP70的表達(dá)明顯增加。與模型對(duì)照組(6.570±0.324)和正常對(duì)照組(6.362±0.650)相比,HIFU消融實(shí)驗(yàn)組中HSP70在消融4h的表達(dá)(32.570±1.173)明顯增加,具有顯著性差異(p0.05),與正常組(6.543±0.547)相比,模型對(duì)照組(7.840±0.547)胰腺組織中也有少量HSP70表達(dá),但不具有顯著性差異(p0.05);HIFU消融4h組中局部組織MHC-II的表達(dá)(25.76±1.579)顯著高于模型對(duì)照組(18.760±1.367)和正常組(20.768±1.324)(p0.05),正常組MHC-II的表達(dá)高于模型對(duì)照組,但只在在2h和8h組具有顯著性差異(p0.05),HIFU消融后MHC-II的表達(dá)逐漸升高,在8h達(dá)到最高然后趨于穩(wěn)定;對(duì)照4h組中ZAP70的表達(dá)(3.993±0.302)顯著低于HIFU消融實(shí)驗(yàn)組(16.80±0.472)和正常組(12.675±0.856)(p0.05),與空白對(duì)照組相比,HIFU消融實(shí)驗(yàn)組ZAP70的表達(dá)在2h(11.33±0.529)和4h(16.80±0.472)明顯增加,具有顯著性差異(p0.05),在8h和12h時(shí),兩組ZAP70的表達(dá)無(wú)明顯差異(p0.05)。結(jié)論1.DMBA誘導(dǎo)大鼠胰腺原位癌的形成;5.0m Hz普通診斷超聲掃描的SD大鼠胰腺癌的影像較為模糊,不能辨別胰腺腫瘤,12.0m Hz高頻超聲掃描SD大鼠原位胰腺癌,腫瘤在超聲影像下呈明顯的低回聲,腫瘤邊界較為明顯,影像更為清晰,12.0m Hz高頻B超掃描可以作為SD大鼠胰腺癌的影像學(xué)診斷方法。2.HIFU消融SD大鼠胰腺癌后,靶區(qū)組織HSP70在短時(shí)間內(nèi)大量表達(dá),參與抗原遞呈的MHC-II和ZAP70表達(dá)也明顯增加,以及大鼠外周血IL-2和IFN-γ水平升高及其CD_3+/CD_4~+T細(xì)胞亞群數(shù)目增加的遲發(fā)效應(yīng),提示機(jī)體的增強(qiáng)效應(yīng)可能由組織HSP的抗原呈遞途徑介導(dǎo)。
【關(guān)鍵詞】：高強(qiáng)度聚焦超聲 胰腺癌 HSP70 T細(xì)胞免疫
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.9
【目錄】：

• 摘要8-12
• Abstract12-17
• 英文縮寫(xiě)一覽表17-18
• 第一章 文獻(xiàn)綜述18-22
• 1.1 HSP70在抗原呈遞中的作用18-19
• 1.1.1 HSP70與DC細(xì)胞18-19
• 1.1.2 HSP70與巨噬細(xì)胞19
• 1.2 HSP70在T細(xì)胞免疫中的作用19-20
• 1.2.1 HSP70對(duì)白介素的作用19-20
• 1.2.2 HSP70對(duì)干擾素的作用20
• 1.3 HSP70在腫瘤免疫的作用20-21
• 1.4 HSP70與HIFU治療21-22
• 第二章 引言22-24
• 第三章 SD大鼠胰腺原位癌高頻B超影像學(xué)特征24-30
• 3.1 材料、試劑和儀器24-25
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料24
• 3.1.2 主要試劑24-25
• 3.1.3 主要儀器25
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法25-26
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組25
• 3.2.2 SD大鼠胰腺癌模型的復(fù)制25-26
• 3.2.3 B超檢查SD大鼠胰腺癌26
• 3.2.4 病理組織學(xué)分析26
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-28
• 3.3.1 SD大鼠胰腺癌B超影像學(xué)特征分析26-27
• 3.3.2 病理組織學(xué)分析27-28
• 3.3.3 高頻B超影像學(xué)對(duì)SD大鼠胰腺癌的診斷分析28
• 3.4 討論28-29
• 3.5 小結(jié)29-30
• 第四章 HIFU消融大鼠胰腺癌后靶區(qū)組織HSP70介導(dǎo)的抗原遞呈作用30-42
• 4.1 材料、試劑和儀器30-32
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料30
• 4.1.2 主要試劑30-31
• 4.1.3 主要設(shè)備31-32
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法32-33
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)分組32
• 4.2.2 超聲治療參數(shù)及過(guò)程32
• 4.2.3 免疫組化檢測(cè)局部組織HSP70，MHC-II和ZAP70的表達(dá)32
• 4.2.4 Western blot檢測(cè)局部組織中HSP70，MHC-II和ZAP70的表達(dá)32-33
• 4.2.5 數(shù)據(jù)分析33
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-39
• 4.3.1 消融后靶區(qū)組織中HSP70的表達(dá)變化33-35
• 4.3.2 消融后靶區(qū)組織中MHC-II的表達(dá)變化35-37
• 4.3.3 消融后靶區(qū)組織中ZAP70的表達(dá)變化37-39
• 4.4 討論39-40
• 4.4.1 HSP70與抗原遞呈作用39
• 4.4.2 HSP70與HIFU消融39-40
• 4.5 小結(jié)40-42
• 第五章 HIFU消融胰腺癌后大鼠的T細(xì)胞免疫增強(qiáng)效應(yīng)42-50
• 5.1 材料、試劑和儀器42-43
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料42
• 5.1.2 主要試劑42-43
• 5.1.3 主要設(shè)備43
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法43-44
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)分組43
• 5.2.2 ELISA檢測(cè)外周血中IL-2 和IFN-γ 分泌水平的變化43-44
• 5.2.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血中CD_3~+/CD_4~+T細(xì)胞亞群的變化44
• 5.2.4 數(shù)據(jù)分析44
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-48
• 5.3.1 外周血IL-2 分泌水平的變化44-45
• 5.3.2 外周血IFN-γ 分泌水平的變化45-46
• 5.3.3 外周血CD_3~+/CD_4~+T細(xì)胞數(shù)量的變化46-48
• 5.4 討論48-49
• 5.4.1 HIFU消融對(duì)外周血Th細(xì)胞增殖分化的影響48
• 5.4.2 HIFU消融對(duì)外周血中IL-2 分泌水平的影響48
• 5.4.3 HIFU消融對(duì)外周血中IFN-γ 分泌水平的影響48-49
• 5.5 小結(jié)49-50
• 第六章 全文總結(jié)50-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文情況58-60
• 致謝60

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2 廣州復(fù)大腫瘤醫(yī)院 徐克成　穆峰;丹麥訪病之旅：聚焦胰腺癌的治療[N];健康報(bào);2008年

3 郝純毅 北京腫瘤醫(yī)院肝膽胰外二科主任醫(yī)師;酗酒和吸煙最傷胰腺[N];大眾科技報(bào);2011年

4 記者 朱弼瑜　專(zhuān)業(yè)指導(dǎo) 劉玉坦 新安國(guó)際醫(yī)院普通外科副主任醫(yī)師 董波 嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院營(yíng)養(yǎng)學(xué)科負(fù)責(zé)人、公共營(yíng)養(yǎng)師;健康生活,遠(yuǎn)離“癌癥之王”[N];嘉興日?qǐng)?bào);2011年

5 保健時(shí)報(bào)記者 王朝建 通訊員 王懿輝;中年突發(fā)糖尿病當(dāng)心胰腺癌[N];保健時(shí)報(bào);2012年

6 上海市腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科主任醫(yī)師 虞先o，

本文編號(hào)：784020