本文關(guān)鍵詞：下調(diào)JAK-STAT信號(hào)通路中STAT3的表達(dá)在食管鱗癌發(fā)生和治療中的作用

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【摘要】：目的食管癌是胃腸道中最常見的惡性腫瘤之一。在中國,食管癌被認(rèn)為是第四大最致命的癌癥,對(duì)人類的身心健康存在著嚴(yán)重的威脅。食管癌的病理類型主要有兩種,即食管鱗癌和食管腺癌。在我國,食管鱗癌是最主要的食管癌類型,大約占90%以上。食管鱗癌的發(fā)生以及發(fā)展是一個(gè)長期復(fù)雜多變的過程。與其它惡性腫瘤一樣,食管鱗癌的發(fā)生是由多種基因、多種因素相互作用的結(jié)果,而且其發(fā)病機(jī)制也是一個(gè)多階段的發(fā)展過程,但其分子機(jī)制尚不清楚,在診斷和治療上也缺乏有效的手段。隨著腫瘤分子靶向治療的不斷進(jìn)展,深入研究食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制,以及尋找新的腫瘤治療靶標(biāo)與標(biāo)志物將具有非常重要的意義。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducers and activators of transcription,STAT)是Fu等人在1992年研究干擾素誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄時(shí)首次鑒定的一個(gè)蛋白家族。STAT蛋白家族成員,參與了各種腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展過程,包括細(xì)胞周期進(jìn)展、血管生成、細(xì)胞凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移和免疫逃避。目前已發(fā)現(xiàn)STAT家族存在7個(gè)成員,包括STATl、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b和STAT6。作為STAT蛋白的家族成員之一,在人體中STAT3編碼基因定位于第12號(hào)染色體上,是于1994年作為IL-6信號(hào)傳遞中的急性期反應(yīng)因子而被純化的。STAT3廣泛地存在于不同類型的細(xì)胞和組織中,最初發(fā)現(xiàn)STAT3與腫瘤的關(guān)系是在v-Src轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)了STAT3信號(hào)通路的激活,活化的STAT3蛋白突變體能轉(zhuǎn)化培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞,最終使小鼠致癌;而阻斷STAT3信號(hào)后,成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化則受到抑制。在多發(fā)性骨髓瘤和頭頸部腫瘤細(xì)胞的生長過程中發(fā)現(xiàn)了激活的STAT3信號(hào),首次揭示了STAT3與人類惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。己有較多文獻(xiàn)報(bào)道了STAT3在頭頸部腫瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌以及胃癌等多種惡性腫瘤中存在異常的表達(dá),并參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。STAT3在多種人體腫瘤中存在異常的表達(dá),而阻斷STAT3信號(hào)通路能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。隨著對(duì)STAT3信號(hào)通路研究的不斷深入,STAT3信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中所扮演的角色越來越受到重視,以STAT3為靶點(diǎn)的治療策略有望為某些惡性腫瘤的治療開辟出一條新的途徑。本文以小分子抑制劑stattic作為抑制STAT3磷酸化的藥物,以研究STAT3在食管鱗癌的發(fā)生及發(fā)展中的作用。第一部分阻斷STAT3信號(hào)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖和抗凋亡的影響方法1.利用Western blotting檢測多種不同來源的食管鱗癌細(xì)胞株中p-STAT3的激活情況。2.利用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度(DMSO、1、3、10和30μM)的stattic在24h和48h對(duì)食管鱗癌細(xì)胞的毒性作用,并篩選出用于細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的stattic濃度。3.根據(jù)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果選取用于細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的最大藥物濃度,設(shè)置細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的stattic濃度(DMSO、1、2、3和4μM),檢測不同濃度的stattic在不同時(shí)間點(diǎn)(0、24、48、72和96h)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞的增殖抑制作用,并觀察其抑制作用與STAT3表達(dá)是否相關(guān)。4.利用軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度stattic(DMSO、1、2、3和4μM)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞的克隆形成能力的影響。5.利用Western blotting檢測不同濃度(DMSO、5、10和20μM)stattic對(duì)食管鱗癌細(xì)胞中的STAT3及相關(guān)基因表達(dá)的影響。6.利用Western blotting檢測不同濃度(DMSO、5、10和20μM)stattic+IL-6(30ng/ml)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞中的STAT3活化及阻斷情況的影響。7.利用Annexin V、PI和Hoechst合染以及DAPI染色來檢測不同濃度的stattic(DMSO、1、2、3和4μM)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞凋亡及周期的影響。結(jié)果1.在多例食管鱗癌細(xì)胞系中,STAT3均呈現(xiàn)出不同程度的表達(dá),但是其磷酸化水平存在差異,Eca109、EC9706、TE1、TE13和KYSE450中都呈現(xiàn)出STAT3異常的激活狀態(tài),而EC1、KYSE70和KYSE140中無STAT3的磷酸化。2.stattic對(duì)食管鱗癌細(xì)胞的毒性作用很明顯,并抑制STAT3組成型激活的食管鱗癌細(xì)胞的增殖,且這種抑制能力隨著stattic的藥物濃度增加而增強(qiáng)。3.在無毒性的作用濃度下,stattic不能抑制無STAT3組成型激活的食管鱗癌細(xì)胞的增殖。4.軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在具有STAT3組成型激活的食管鱗癌細(xì)胞中,隨著stattic藥物濃度的增加,細(xì)胞克隆數(shù)量減少。5.stattic可抑制STAT3的磷酸化及Cox2的表達(dá),上調(diào)NOS和Pentraxin 3的表達(dá),這種調(diào)節(jié)作用顯現(xiàn)出了藥物濃度依賴的趨勢。6.IL-6可激活食管鱗癌細(xì)胞中STAT3,而stattic可終止這種激活作用,且這種調(diào)節(jié)作用與stattic的作用濃度有依賴關(guān)系。7.Stattic可以促進(jìn)具有STAT3組成型激活的食管鱗癌細(xì)胞(EC9706)的凋亡,并將其細(xì)胞周期阻斷在S期。第二部分阻斷STAT3信號(hào)在食管鱗癌PDX模型移植瘤小鼠中的治療作用方法1.利用Western blotting檢測多例食管鱗癌組織中STAT3的激活狀況。2.篩選出STAT3高磷酸化的食管鱗癌組織(EG30),用SCID小鼠PDX模型檢測STAT3抑制劑stattic和化療藥物5-FU的抗癌效果。3.采用Western blotting檢測stattic和5-FU單獨(dú)或聯(lián)合治療對(duì)腫瘤組織中STAT3信號(hào)通路及i NOS、Cox2和Pentraxin-3表達(dá)的影響。4.通過免疫組織化學(xué)檢測stattic和5-FU單獨(dú)或聯(lián)合治療對(duì)腫瘤組織中目標(biāo)蛋白p-STAT3、Cox2、Pentraxin-3和caspase-3表達(dá)的影響。5.利用TUNEL試劑盒檢測stattic和5-FU單獨(dú)或聯(lián)合治療后,腫瘤組織中細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果1.在STAT3組成型激活的食管鱗癌異種移植瘤小鼠中,stattic可顯著抑制小鼠皮下腫瘤的生長,而化療藥物5-FU呈現(xiàn)出了耐藥性,療效并不顯著;但當(dāng)5-FU聯(lián)合stattic時(shí),與stattic單獨(dú)治療組相比,其對(duì)腫瘤生長的抑制作用更強(qiáng)。2.在腫瘤組織中,stattic治療組中STAT3和Cox2的激活水平下降,但i NOS和Pentraxin 3的表達(dá)增強(qiáng)。3.免疫組化結(jié)果顯示,stattic可以下調(diào)STAT3的磷酸化水平及Cox2的表達(dá),并促進(jìn)NOS和Pentraxin 3的表達(dá)。4.TUNEL結(jié)果表明,在STAT3組成型激活的食管鱗癌中,stattic可以顯著誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡,而5-FU聯(lián)合stattic時(shí)會(huì)導(dǎo)致更為顯著的細(xì)胞凋亡。結(jié)論1.在食管鱗癌細(xì)胞系及腫瘤組織中普遍存在STAT3信號(hào)通路的異常激活,但是其磷酸化水平存在差異。2.小分子抑制劑stattic可以抑制組成型活化及因IL-6誘導(dǎo)的STAT3的激活,并導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的增殖及克隆形成受到抑制,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,這與Cox2表達(dá)水平的下降以及i NOS和Pentraxin-3表達(dá)水平的升高密切相關(guān)。3.在SCID小鼠PDX模型體內(nèi)研究中,stattic可以有效地抑制STAT3組成型激活食管腫瘤的生長,并增加5-FU的藥物敏感性,促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：食管鱗癌 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3 抑制劑 stattic 5-FU 耐藥性
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-15
• 引言15-17
• 第一部分 阻斷STAT3信號(hào)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖及抗凋亡的影響17-44
• 前言17
• 1 實(shí)驗(yàn)材料17-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-32
• 3 結(jié)果32-40
• 4 討論40-44
• 第二部分 阻斷STAT3信號(hào)在食管鱗癌PDX模型移植瘤小鼠中的治療作用44-66
• 前言44
• 1 實(shí)驗(yàn)材料44-46
• 2 實(shí)驗(yàn)方法46-50
• 3 結(jié)果50-62
• 4 討論62-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-75
• 綜述75-91
• 參考文獻(xiàn)83-91
• 個(gè)人簡歷91-92
• 附錄一 碩士研究生期間發(fā)表的論文、參加的國內(nèi)學(xué)術(shù)會(huì)議92-93
• 附錄二 英文縮略詞（Abbreviation）93-94
• 致謝94

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董淑曉;訾力;亓健;;原發(fā)性胃鱗癌的臨床病理特點(diǎn)[J];中國臨床醫(yī)生;2011年11期

2 趙鎮(zhèn)清;張熙曾;劉亦庸;;賁門鱗癌[J];中國腫瘤臨床;1987年04期

3 王懷娥,任德印,崔允峰;肺炎樣鱗癌誤診原因探討(附5例報(bào)告)[J];醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志;1994年03期

4 劉建良,周鑫官,張勤;賁門鱗癌的外科治療[J];江蘇醫(yī)藥;1995年08期

5 ;中咽部鱗癌前壁型的治療[J];國外醫(yī)學(xué)(耳鼻咽喉科學(xué)分冊);1998年01期

6 ;鱗癌中人類乳頭狀瘤病毒的表達(dá)及P~(53)突變[J];國外醫(yī)學(xué)(耳鼻咽喉科學(xué)分冊);1999年01期

7 張地君,許速,徐小珂;表皮內(nèi)鱗癌2例報(bào)告[J];皮膚病與性病;1999年01期

8 錢偉明;原發(fā)性附睪鱗癌1例[J];診斷病理學(xué)雜志;2002年04期

9 崔云龍,李強(qiáng);膽囊鱗癌6例報(bào)告[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年04期

10 劉永祥;龜頭部鱗癌誤診一例[J];臨床誤診誤治;2004年11期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡偉漢;徐韜;伍國號(hào);郭朱明;高遠(yuǎn)紅;王芳;蔡修宇;;151例下咽鱗癌的治療與預(yù)后[A];2007第六屆全國放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

2 俞新民;;鱗癌1例[A];2009年浙江省皮膚病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 高明陽;;頭部鱗癌伴嗜酸性粒細(xì)胞增多一例[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

4 徐致祥;譚家駒;陳風(fēng)蘭;司建華;韓建英;;農(nóng)家肥料污染水源誘發(fā)大小鼠前胃鱗癌[A];全國腫瘤流行病學(xué)和腫瘤病因?qū)W學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

5 李梅嬌;王鵬;符磊;吳偉偉;;伴有多臟器功能損害的老年鱗癌(翻花瘡)患者的處理體會(huì)[A];2012全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

6 曾蕾;曾珠;趙瓊;;EGFR突變的女性鱗癌臀肌轉(zhuǎn)移1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 賈軍;楊世勇;張志明;;血管內(nèi)皮生長因子在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

8 賈志新;;西黃丸配合化療治療下咽鱗癌1例[A];西黃丸臨床應(yīng)用研究論文集[C];2009年

9 姜玉章;熊化生;郭偉;胡傳賢;金云;錢強(qiáng);潘漢胤;;具家族史食管鱗癌及癌旁組織基因表達(dá)譜的初步研究[A];中國遺傳學(xué)會(huì)功能基因組學(xué)研討會(huì)論文集[C];2006年

10 溫登瑰;王士杰;張立瑋;王小玲;魏麗珍;鄒文娣;秦鵬;;食管鱗癌家族性病例比散發(fā)病例發(fā)生年齡早、雙灶同發(fā)率高以及預(yù)后差的特點(diǎn)提示抑癌基因第一次打擊可作為遺傳易感性的分子基礎(chǔ)[A];中國第九屆全國食管癌學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 上海龍華醫(yī)院腫瘤科 王菊勇 副研究員;胃鱗癌的治療[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2010年

2 記者 王丹 通訊員 高翠峰;食管鱗癌基因組研究告別“盲人摸象”[N];健康報(bào);2014年

3 記者 譚嘉;中國人食管鱗癌重要突變基因被揭示[N];健康報(bào);2014年

4 楊國平;食管鱗癌非手術(shù)治療取得新進(jìn)展[N];健康報(bào);2014年

5 黃春燕;50歲以上男性易發(fā)頭皮鱗癌[N];健康時(shí)報(bào);2007年

6 吳一福;HSP70異常表達(dá)與外陰鱗癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

7 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院臨床腫瘤中心主任 李蘇宜　整理 本報(bào)記者程守勤;食管鱗癌化療釋疑[N];健康報(bào);2010年

8 記者 劉傳書;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)食管鱗癌相關(guān)基因突變[N];科技日報(bào);2014年

9 記者 白毅;8個(gè)重要基因突變與食管鱗癌相關(guān)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2014年

10 記者 田雅婷;8個(gè)與食管鱗癌相關(guān)基因突變被發(fā)現(xiàn)[N];光明日報(bào);2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 范虹;TRPC6通道對(duì)食管鱗癌的增殖及放療增敏作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 王娜娜;RACK1在食管鱗癌預(yù)后及進(jìn)展中的作用及與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2015年

3 孟慧;miR-330-3p和miR-26b在食管鱗癌中的功能及其調(diào)控機(jī)制探討[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 周韶梅;miR-100在食管鱗癌中的調(diào)控作用及機(jī)制研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2015年

5 曾薇;食管鱗癌中Survivin對(duì)NF-κB p65調(diào)控機(jī)制的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

6 楊宏麗;PRKDC、XRCC4多態(tài)性與中國安陽地區(qū)食管鱗癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)性研究[D];山東大學(xué);2015年

7 崔瑤;STAT3對(duì)缺氧誘導(dǎo)食管鱗癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的調(diào)控作用[D];鄭州大學(xué);2016年

8 楊璇;miR-1207-5p對(duì)食管鱗癌發(fā)生的影響[D];鄭州大學(xué);2016年

9 江亞南;T-LAK細(xì)胞來源的蛋白激酶(TOPK)在食管鱗癌增殖中的功能研究[D];鄭州大學(xué);2016年

10 寧忠華;系統(tǒng)性炎癥和臨床病理因素對(duì)食管鱗癌的預(yù)后影響[D];蘇州大學(xué);2016年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉建平;MTA1、VEGF-C在食管鱗癌中的表達(dá)及與臨床病理、腫瘤淋巴管生成的關(guān)系[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

2 范玉宏;Caveolin-1在食管鱗癌浸潤進(jìn)展中的作用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 聞朋浩;同期放化療聯(lián)合DC-CIK對(duì)Ⅰ~Ⅱ期食管鱗癌的療效分析[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

4 王春麗;食管鱗癌高頻擴(kuò)增基因IGHMBP2的鑒定及其功能的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 劉嬌;GPRC5A和STAT3在食管鱗癌中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2015年

6 朱毓卉;江蘇省泰興地區(qū)食管癌時(shí)空分布特征分析及女性生殖因素研究[D];山東大學(xué);2015年

7 孫智;黏蛋白1在食管鱗癌中的表達(dá)及其與臨床病理及預(yù)后的關(guān)系[D];山東大學(xué);2015年

8 楊蕾;熱休克蛋白HSP32、HSP27在食管鱗癌轉(zhuǎn)移中作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 楚旭;CDC2及PFTK1在食管鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];河南科技大學(xué);2015年

10 范俊利;EZH2、BMI-1、FBXW7在食管鱗癌中表達(dá)的臨床意義[D];河南科技大學(xué);2015年

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