發(fā)布時間：2017-09-02 15:34

  本文關(guān)鍵詞：下調(diào)JAK-STAT信號通路中STAT3的表達在食管鱗癌發(fā)生和治療中的作用

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【摘要】：目的食管癌是胃腸道中最常見的惡性腫瘤之一。在中國,食管癌被認為是第四大最致命的癌癥,對人類的身心健康存在著嚴重的威脅。食管癌的病理類型主要有兩種,即食管鱗癌和食管腺癌。在我國,食管鱗癌是最主要的食管癌類型,大約占90%以上。食管鱗癌的發(fā)生以及發(fā)展是一個長期復雜多變的過程。與其它惡性腫瘤一樣,食管鱗癌的發(fā)生是由多種基因、多種因素相互作用的結(jié)果,而且其發(fā)病機制也是一個多階段的發(fā)展過程,但其分子機制尚不清楚,在診斷和治療上也缺乏有效的手段。隨著腫瘤分子靶向治療的不斷進展,深入研究食管鱗癌的發(fā)病機制,以及尋找新的腫瘤治療靶標與標志物將具有非常重要的意義。信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducers and activators of transcription,STAT)是Fu等人在1992年研究干擾素誘導基因轉(zhuǎn)錄時首次鑒定的一個蛋白家族。STAT蛋白家族成員,參與了各種腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展過程,包括細胞周期進展、血管生成、細胞凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移和免疫逃避。目前已發(fā)現(xiàn)STAT家族存在7個成員,包括STATl、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b和STAT6。作為STAT蛋白的家族成員之一,在人體中STAT3編碼基因定位于第12號染色體上,是于1994年作為IL-6信號傳遞中的急性期反應因子而被純化的。STAT3廣泛地存在于不同類型的細胞和組織中,最初發(fā)現(xiàn)STAT3與腫瘤的關(guān)系是在v-Src轉(zhuǎn)染的細胞系中發(fā)現(xiàn)了STAT3信號通路的激活,活化的STAT3蛋白突變體能轉(zhuǎn)化培養(yǎng)的成纖維細胞,最終使小鼠致癌;而阻斷STAT3信號后,成纖維細胞的轉(zhuǎn)化則受到抑制。在多發(fā)性骨髓瘤和頭頸部腫瘤細胞的生長過程中發(fā)現(xiàn)了激活的STAT3信號,首次揭示了STAT3與人類惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。己有較多文獻報道了STAT3在頭頸部腫瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌以及胃癌等多種惡性腫瘤中存在異常的表達,并參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。STAT3在多種人體腫瘤中存在異常的表達,而阻斷STAT3信號通路能夠抑制腫瘤細胞的增殖,并誘導腫瘤細胞凋亡。隨著對STAT3信號通路研究的不斷深入,STAT3信號通路在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中所扮演的角色越來越受到重視,以STAT3為靶點的治療策略有望為某些惡性腫瘤的治療開辟出一條新的途徑。本文以小分子抑制劑stattic作為抑制STAT3磷酸化的藥物,以研究STAT3在食管鱗癌的發(fā)生及發(fā)展中的作用。第一部分阻斷STAT3信號對食管鱗癌細胞增殖和抗凋亡的影響方法1.利用Western blotting檢測多種不同來源的食管鱗癌細胞株中p-STAT3的激活情況。2.利用細胞毒性實驗檢測不同濃度(DMSO、1、3、10和30μM)的stattic在24h和48h對食管鱗癌細胞的毒性作用,并篩選出用于細胞增殖實驗的stattic濃度。3.根據(jù)細胞毒性實驗的結(jié)果選取用于細胞增殖實驗的最大藥物濃度,設(shè)置細胞增殖實驗的stattic濃度(DMSO、1、2、3和4μM),檢測不同濃度的stattic在不同時間點(0、24、48、72和96h)對食管鱗癌細胞的增殖抑制作用,并觀察其抑制作用與STAT3表達是否相關(guān)。4.利用軟瓊脂克隆形成實驗檢測不同濃度stattic(DMSO、1、2、3和4μM)對食管鱗癌細胞的克隆形成能力的影響。5.利用Western blotting檢測不同濃度(DMSO、5、10和20μM)stattic對食管鱗癌細胞中的STAT3及相關(guān)基因表達的影響。6.利用Western blotting檢測不同濃度(DMSO、5、10和20μM)stattic+IL-6(30ng/ml)對食管鱗癌細胞中的STAT3活化及阻斷情況的影響。7.利用Annexin V、PI和Hoechst合染以及DAPI染色來檢測不同濃度的stattic(DMSO、1、2、3和4μM)對食管鱗癌細胞凋亡及周期的影響。結(jié)果1.在多例食管鱗癌細胞系中,STAT3均呈現(xiàn)出不同程度的表達,但是其磷酸化水平存在差異,Eca109、EC9706、TE1、TE13和KYSE450中都呈現(xiàn)出STAT3異常的激活狀態(tài),而EC1、KYSE70和KYSE140中無STAT3的磷酸化。2.stattic對食管鱗癌細胞的毒性作用很明顯,并抑制STAT3組成型激活的食管鱗癌細胞的增殖,且這種抑制能力隨著stattic的藥物濃度增加而增強。3.在無毒性的作用濃度下,stattic不能抑制無STAT3組成型激活的食管鱗癌細胞的增殖。4.軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)果顯示,在具有STAT3組成型激活的食管鱗癌細胞中,隨著stattic藥物濃度的增加,細胞克隆數(shù)量減少。5.stattic可抑制STAT3的磷酸化及Cox2的表達,上調(diào)NOS和Pentraxin 3的表達,這種調(diào)節(jié)作用顯現(xiàn)出了藥物濃度依賴的趨勢。6.IL-6可激活食管鱗癌細胞中STAT3,而stattic可終止這種激活作用,且這種調(diào)節(jié)作用與stattic的作用濃度有依賴關(guān)系。7.Stattic可以促進具有STAT3組成型激活的食管鱗癌細胞(EC9706)的凋亡,并將其細胞周期阻斷在S期。第二部分阻斷STAT3信號在食管鱗癌PDX模型移植瘤小鼠中的治療作用方法1.利用Western blotting檢測多例食管鱗癌組織中STAT3的激活狀況。2.篩選出STAT3高磷酸化的食管鱗癌組織(EG30),用SCID小鼠PDX模型檢測STAT3抑制劑stattic和化療藥物5-FU的抗癌效果。3.采用Western blotting檢測stattic和5-FU單獨或聯(lián)合治療對腫瘤組織中STAT3信號通路及i NOS、Cox2和Pentraxin-3表達的影響。4.通過免疫組織化學檢測stattic和5-FU單獨或聯(lián)合治療對腫瘤組織中目標蛋白p-STAT3、Cox2、Pentraxin-3和caspase-3表達的影響。5.利用TUNEL試劑盒檢測stattic和5-FU單獨或聯(lián)合治療后,腫瘤組織中細胞的凋亡情況。結(jié)果1.在STAT3組成型激活的食管鱗癌異種移植瘤小鼠中,stattic可顯著抑制小鼠皮下腫瘤的生長,而化療藥物5-FU呈現(xiàn)出了耐藥性,療效并不顯著;但當5-FU聯(lián)合stattic時,與stattic單獨治療組相比,其對腫瘤生長的抑制作用更強。2.在腫瘤組織中,stattic治療組中STAT3和Cox2的激活水平下降,但i NOS和Pentraxin 3的表達增強。3.免疫組化結(jié)果顯示,stattic可以下調(diào)STAT3的磷酸化水平及Cox2的表達,并促進NOS和Pentraxin 3的表達。4.TUNEL結(jié)果表明,在STAT3組成型激活的食管鱗癌中,stattic可以顯著誘導腫瘤細胞的凋亡,而5-FU聯(lián)合stattic時會導致更為顯著的細胞凋亡。結(jié)論1.在食管鱗癌細胞系及腫瘤組織中普遍存在STAT3信號通路的異常激活,但是其磷酸化水平存在差異。2.小分子抑制劑stattic可以抑制組成型活化及因IL-6誘導的STAT3的激活,并導致腫瘤細胞的增殖及克隆形成受到抑制,促進細胞凋亡,這與Cox2表達水平的下降以及i NOS和Pentraxin-3表達水平的升高密切相關(guān)。3.在SCID小鼠PDX模型體內(nèi)研究中,stattic可以有效地抑制STAT3組成型激活食管腫瘤的生長,并增加5-FU的藥物敏感性,促進食管鱗癌細胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：食管鱗癌 信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子3 抑制劑 stattic 5-FU 耐藥性
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-15
• 引言15-17
• 第一部分 阻斷STAT3信號對食管鱗癌細胞增殖及抗凋亡的影響17-44
• 前言17
• 1 實驗材料17-22
• 2 實驗方法22-32
• 3 結(jié)果32-40
• 4 討論40-44
• 第二部分 阻斷STAT3信號在食管鱗癌PDX模型移植瘤小鼠中的治療作用44-66
• 前言44
• 1 實驗材料44-46
• 2 實驗方法46-50
• 3 結(jié)果50-62
• 4 討論62-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻67-75
• 綜述75-91
• 參考文獻83-91
• 個人簡歷91-92
• 附錄一 碩士研究生期間發(fā)表的論文、參加的國內(nèi)學術(shù)會議92-93
• 附錄二 英文縮略詞（Abbreviation）93-94
• 致謝94

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1 董淑曉;訾力;亓健;;原發(fā)性胃鱗癌的臨床病理特點[J];中國臨床醫(yī)生;2011年11期

2 趙鎮(zhèn)清;張熙曾;劉亦庸;;賁門鱗癌[J];中國腫瘤臨床;1987年04期

3 王懷娥,任德印,崔允峰;肺炎樣鱗癌誤診原因探討(附5例報告)[J];醫(yī)學影像學雜志;1994年03期

4 劉建良,周鑫官,張勤;賁門鱗癌的外科治療[J];江蘇醫(yī)藥;1995年08期

5 ;中咽部鱗癌前壁型的治療[J];國外醫(yī)學(耳鼻咽喉科學分冊);1998年01期

6 ;鱗癌中人類乳頭狀瘤病毒的表達及P~(53)突變[J];國外醫(yī)學(耳鼻咽喉科學分冊);1999年01期

7 張地君,許速,徐小珂;表皮內(nèi)鱗癌2例報告[J];皮膚病與性病;1999年01期

8 錢偉明;原發(fā)性附睪鱗癌1例[J];診斷病理學雜志;2002年04期

9 崔云龍,李強;膽囊鱗癌6例報告[J];天津醫(yī)科大學學報;2003年04期

10 劉永祥;龜頭部鱗癌誤診一例[J];臨床誤診誤治;2004年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡偉漢;徐韜;伍國號;郭朱明;高遠紅;王芳;蔡修宇;;151例下咽鱗癌的治療與預后[A];2007第六屆全國放射腫瘤學學術(shù)年會論文集[C];2007年

2 俞新民;;鱗癌1例[A];2009年浙江省皮膚病學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

3 高明陽;;頭部鱗癌伴嗜酸性粒細胞增多一例[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2003年

4 徐致祥;譚家駒;陳風蘭;司建華;韓建英;;農(nóng)家肥料污染水源誘發(fā)大小鼠前胃鱗癌[A];全國腫瘤流行病學和腫瘤病因?qū)W學術(shù)會議論文集[C];2007年

5 李梅嬌;王鵬;符磊;吳偉偉;;伴有多臟器功能損害的老年鱗癌(翻花瘡)患者的處理體會[A];2012全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

6 曾蕾;曾珠;趙瓊;;EGFR突變的女性鱗癌臀肌轉(zhuǎn)移1例并文獻復習[A];中國腫瘤內(nèi)科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 賈軍;楊世勇;張志明;;血管內(nèi)皮生長因子在食管鱗癌中的表達及臨床意義[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

8 賈志新;;西黃丸配合化療治療下咽鱗癌1例[A];西黃丸臨床應用研究論文集[C];2009年

9 姜玉章;熊化生;郭偉;胡傳賢;金云;錢強;潘漢胤;;具家族史食管鱗癌及癌旁組織基因表達譜的初步研究[A];中國遺傳學會功能基因組學研討會論文集[C];2006年

10 溫登瑰;王士杰;張立瑋;王小玲;魏麗珍;鄒文娣;秦鵬;;食管鱗癌家族性病例比散發(fā)病例發(fā)生年齡早、雙灶同發(fā)率高以及預后差的特點提示抑癌基因第一次打擊可作為遺傳易感性的分子基礎(chǔ)[A];中國第九屆全國食管癌學術(shù)會議論文集[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 上海龍華醫(yī)院腫瘤科 王菊勇 副研究員;胃鱗癌的治療[N];上海中醫(yī)藥報;2010年

2 記者 王丹 通訊員 高翠峰;食管鱗癌基因組研究告別“盲人摸象”[N];健康報;2014年

3 記者 譚嘉;中國人食管鱗癌重要突變基因被揭示[N];健康報;2014年

4 楊國平;食管鱗癌非手術(shù)治療取得新進展[N];健康報;2014年

5 黃春燕;50歲以上男性易發(fā)頭皮鱗癌[N];健康時報;2007年

6 吳一福;HSP70異常表達與外陰鱗癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 東南大學附屬中大醫(yī)院臨床腫瘤中心主任 李蘇宜　整理 本報記者程守勤;食管鱗癌化療釋疑[N];健康報;2010年

8 記者 劉傳書;我科學家發(fā)現(xiàn)食管鱗癌相關(guān)基因突變[N];科技日報;2014年

9 記者 白毅;8個重要基因突變與食管鱗癌相關(guān)[N];中國醫(yī)藥報;2014年

10 記者 田雅婷;8個與食管鱗癌相關(guān)基因突變被發(fā)現(xiàn)[N];光明日報;2014年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 范虹;TRPC6通道對食管鱗癌的增殖及放療增敏作用的研究[D];復旦大學;2013年

2 王娜娜;RACK1在食管鱗癌預后及進展中的作用及與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性研究[D];山東大學;2015年

3 孟慧;miR-330-3p和miR-26b在食管鱗癌中的功能及其調(diào)控機制探討[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

4 周韶梅;miR-100在食管鱗癌中的調(diào)控作用及機制研究[D];北京工業(yè)大學;2015年

5 曾薇;食管鱗癌中Survivin對NF-κB p65調(diào)控機制的研究[D];新疆醫(yī)科大學;2015年

6 楊宏麗;PRKDC、XRCC4多態(tài)性與中國安陽地區(qū)食管鱗癌發(fā)生風險關(guān)聯(lián)性研究[D];山東大學;2015年

7 崔瑤;STAT3對缺氧誘導食管鱗癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的調(diào)控作用[D];鄭州大學;2016年

8 楊璇;miR-1207-5p對食管鱗癌發(fā)生的影響[D];鄭州大學;2016年

9 江亞南;T-LAK細胞來源的蛋白激酶(TOPK)在食管鱗癌增殖中的功能研究[D];鄭州大學;2016年

10 寧忠華;系統(tǒng)性炎癥和臨床病理因素對食管鱗癌的預后影響[D];蘇州大學;2016年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉建平;MTA1、VEGF-C在食管鱗癌中的表達及與臨床病理、腫瘤淋巴管生成的關(guān)系[D];川北醫(yī)學院;2015年

2 范玉宏;Caveolin-1在食管鱗癌浸潤進展中的作用研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 聞朋浩;同期放化療聯(lián)合DC-CIK對Ⅰ~Ⅱ期食管鱗癌的療效分析[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

4 王春麗;食管鱗癌高頻擴增基因IGHMBP2的鑒定及其功能的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

5 劉嬌;GPRC5A和STAT3在食管鱗癌中的表達及意義[D];鄭州大學;2015年

6 朱毓卉;江蘇省泰興地區(qū)食管癌時空分布特征分析及女性生殖因素研究[D];山東大學;2015年

7 孫智;黏蛋白1在食管鱗癌中的表達及其與臨床病理及預后的關(guān)系[D];山東大學;2015年

8 楊蕾;熱休克蛋白HSP32、HSP27在食管鱗癌轉(zhuǎn)移中作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

9 楚旭;CDC2及PFTK1在食管鱗癌中的表達及其臨床意義[D];河南科技大學;2015年

10 范俊利;EZH2、BMI-1、FBXW7在食管鱗癌中表達的臨床意義[D];河南科技大學;2015年

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本文編號：779421