本文關鍵詞：PML（ΔNLS）和氯化鋰對白血病NB4細胞增殖與凋亡影響的研究

  更多相關文章： PML(ΔNLS) NB4細胞 重組慢病毒 增殖 凋亡 氯化鋰 NB4細胞 增殖 凋亡

【摘要】：第一部分重組慢病毒LV5-PML(?NLS)的構建及其對NB4細胞增殖與凋亡的影響目的:通過重組慢病毒介導的PML(ΔNLS)過表達,研究其對白血病NB4細胞增殖與凋亡的影響,并對其作用機制進行探討。方法:以真核質粒p CMV-HA-PML(?NLS)為PCR反應模板,體外擴增PML(?NLS)基因,克隆入慢病毒載體LV5-EF1a-GFP/puro,與包裝輔助質粒p Helper 1.0、p Helper 2.0在脂質體2000的作用下共轉染293T細胞,包裝病毒。利用重組慢病毒LV5-PML(ΔNLS)感染NB4細胞,RT-PCR法驗證PML(?NLS)m RNA的轉錄程度,Western blot檢測PML(?NLS)、Akt、p-Akt(ser473)、S6和p-S6(ser235/236)蛋白表達的變化。CCK-8實驗觀察各組細胞增殖活力;100 nmol/L雷帕霉素處理各組細胞,24h后流式細胞術分析細胞凋亡和周期的變化。結果:成功構建攜帶PML(?NLS)的慢病毒,病毒感染NB4細胞,感染效率達82.74%,LV5-PML(?NLS)攜帶的PML(?NLS)能夠在NB4細胞中穩(wěn)定表達;感染LV5-PML(?NLS)的NB4細胞中p-Akt(ser473)和p-S6(ser235/236)蛋白表達上升(P0.05),而Akt和S6蛋白表達無明顯變化;CCK-8結果顯示,與未感染組和感染LV5-NC組相比,感染LV5-PML(ΔNLS)組NB4細胞增殖活力明顯上升(P0.05);流式細胞術結果顯示,感染重組慢病毒PML(ΔNLS)組G1期細胞比例下降,進入S期細胞比例增多,且凋亡率明顯低于感染LV5-NC組和未感染組(P0.05)。結論:成功構建了重組慢病毒PML(?NLS),PML(?NLS)過表達可通過活化Akt信號通路促進NB4細胞體外增殖,降低其凋亡率,并影響S6蛋白磷酸化。第二部分氯化鋰對NB4細胞增殖與凋亡的作用目的:利用氯化鋰處理NB4細胞,探討其對NB4細胞增殖與凋亡的影響。方法:以0-40 mmol/L濃度的氯化鋰作用于NB4細胞,培養(yǎng)24 h,CCK-8實驗觀察細胞增殖情況,Western blot檢測各種細胞Akt1蛋白表達水平。以20 mmol/L濃度的氯化鋰作用于NB4細胞,培養(yǎng)24 h,FCM法分析細胞凋亡與周期變化,Western blot檢測各組細胞b-catenin,p-GSK-3,GSK-3 and c-Myc蛋白表達水平。結果:0-40 mmol/L氯化鋰抑制NB4細胞增殖,使Akt1蛋白表達下降。20 mmol/L氯化鋰作用于NB4細胞后,細胞凋亡率上升,細胞周期阻滯在G2/M期,c-Myc蛋白表達下降,p-GSK-3,b-catenin蛋白表達上調,GSK-3β蛋白表達無明顯變化。結論:氯化鋰可通過抑制GSK-3b促進NB4凋亡,誘導細胞周期阻滯在G2/M期;同時影響Akt1,b-catenin,c-Myc蛋白表達水平。
【關鍵詞】：PML(ΔNLS) NB4細胞 重組慢病毒 增殖 凋亡 氯化鋰 NB4細胞 增殖 凋亡
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.7;R730.43
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 參考文獻13-15
• 第一部分:重組慢病毒LV5-PML(ΔNLS)的構建及其對NB4細胞增殖與凋亡的影響15-28
• 1 材料與方法15-20
• 2 結果20-25
• 3 討論25-27
• 參考文獻27-28
• 第二部分：氯化鋰對NB4細胞增殖與凋亡的影響28-36
• 1 材料與方法28-30
• 2 結果30-32
• 3 討論32-34
• 參考文獻34-36
• 全文總結36-37
• 文獻綜述37-45
• 參考文獻41-45
• 致謝45-46
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章46

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陽小群;王慧;蔣開玲;朱新瑜;馬鵬鵬;劉北忠;;腺病毒介導的PML(NLS~-)過表達對白血病NB4細胞增殖和凋亡的影響[J];基礎醫(yī)學與臨床;2014年10期

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本文編號：779148