本文關(guān)鍵詞：PML（ΔNLS）和氯化鋰對白血病NB4細(xì)胞增殖與凋亡影響的研究

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【摘要】：第一部分重組慢病毒LV5-PML(?NLS)的構(gòu)建及其對NB4細(xì)胞增殖與凋亡的影響目的:通過重組慢病毒介導(dǎo)的PML(ΔNLS)過表達(dá),研究其對白血病NB4細(xì)胞增殖與凋亡的影響,并對其作用機(jī)制進(jìn)行探討。方法:以真核質(zhì)粒p CMV-HA-PML(?NLS)為PCR反應(yīng)模板,體外擴(kuò)增PML(?NLS)基因,克隆入慢病毒載體LV5-EF1a-GFP/puro,與包裝輔助質(zhì)粒p Helper 1.0、p Helper 2.0在脂質(zhì)體2000的作用下共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,包裝病毒。利用重組慢病毒LV5-PML(ΔNLS)感染NB4細(xì)胞,RT-PCR法驗(yàn)證PML(?NLS)m RNA的轉(zhuǎn)錄程度,Western blot檢測PML(?NLS)、Akt、p-Akt(ser473)、S6和p-S6(ser235/236)蛋白表達(dá)的變化。CCK-8實(shí)驗(yàn)觀察各組細(xì)胞增殖活力;100 nmol/L雷帕霉素處理各組細(xì)胞,24h后流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡和周期的變化。結(jié)果:成功構(gòu)建攜帶PML(?NLS)的慢病毒,病毒感染NB4細(xì)胞,感染效率達(dá)82.74%,LV5-PML(?NLS)攜帶的PML(?NLS)能夠在NB4細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá);感染LV5-PML(?NLS)的NB4細(xì)胞中p-Akt(ser473)和p-S6(ser235/236)蛋白表達(dá)上升(P0.05),而Akt和S6蛋白表達(dá)無明顯變化;CCK-8結(jié)果顯示,與未感染組和感染LV5-NC組相比,感染LV5-PML(ΔNLS)組NB4細(xì)胞增殖活力明顯上升(P0.05);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,感染重組慢病毒PML(ΔNLS)組G1期細(xì)胞比例下降,進(jìn)入S期細(xì)胞比例增多,且凋亡率明顯低于感染LV5-NC組和未感染組(P0.05)。結(jié)論:成功構(gòu)建了重組慢病毒PML(?NLS),PML(?NLS)過表達(dá)可通過活化Akt信號通路促進(jìn)NB4細(xì)胞體外增殖,降低其凋亡率,并影響S6蛋白磷酸化。第二部分氯化鋰對NB4細(xì)胞增殖與凋亡的作用目的:利用氯化鋰處理NB4細(xì)胞,探討其對NB4細(xì)胞增殖與凋亡的影響。方法:以0-40 mmol/L濃度的氯化鋰作用于NB4細(xì)胞,培養(yǎng)24 h,CCK-8實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞增殖情況,Western blot檢測各種細(xì)胞Akt1蛋白表達(dá)水平。以20 mmol/L濃度的氯化鋰作用于NB4細(xì)胞,培養(yǎng)24 h,FCM法分析細(xì)胞凋亡與周期變化,Western blot檢測各組細(xì)胞b-catenin,p-GSK-3,GSK-3 and c-Myc蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:0-40 mmol/L氯化鋰抑制NB4細(xì)胞增殖,使Akt1蛋白表達(dá)下降。20 mmol/L氯化鋰作用于NB4細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率上升,細(xì)胞周期阻滯在G2/M期,c-Myc蛋白表達(dá)下降,p-GSK-3,b-catenin蛋白表達(dá)上調(diào),GSK-3β蛋白表達(dá)無明顯變化。結(jié)論:氯化鋰可通過抑制GSK-3b促進(jìn)NB4凋亡,誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯在G2/M期;同時(shí)影響Akt1,b-catenin,c-Myc蛋白表達(dá)水平。
【關(guān)鍵詞】：PML(ΔNLS) NB4細(xì)胞 重組慢病毒 增殖 凋亡 氯化鋰 NB4細(xì)胞 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.7;R730.43
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 參考文獻(xiàn)13-15
• 第一部分:重組慢病毒LV5-PML(ΔNLS)的構(gòu)建及其對NB4細(xì)胞增殖與凋亡的影響15-28
• 1 材料與方法15-20
• 2 結(jié)果20-25
• 3 討論25-27
• 參考文獻(xiàn)27-28
• 第二部分：氯化鋰對NB4細(xì)胞增殖與凋亡的影響28-36
• 1 材料與方法28-30
• 2 結(jié)果30-32
• 3 討論32-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 全文總結(jié)36-37
• 文獻(xiàn)綜述37-45
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 致謝45-46
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陽小群;王慧;蔣開玲;朱新瑜;馬鵬鵬;劉北忠;;腺病毒介導(dǎo)的PML(NLS~-)過表達(dá)對白血病NB4細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2014年10期

2 ;Lithium inhibits proliferation of human esophageal cancer cell line Eca-109 by inducing a G_2/M cell cycle arrest[J];World Journal of Gastroenterology;2008年25期

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本文編號：779148