本文關(guān)鍵詞：環(huán)氧合酶2在胃癌血管生成擬態(tài)形成中的作用及其分子機(jī)制

  更多相關(guān)文章： COX-2 胃癌 血管生成擬態(tài) 侵襲 遷移 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換

【摘要】：研究背景和目的:胃癌是常見(jiàn)惡性腫瘤之一,近幾年其發(fā)病率呈下降趨勢(shì),但在癌癥相關(guān)的死亡統(tǒng)計(jì)中,其死亡率仍居高不下。血管生成擬態(tài)(Vasculogenic mimicry)VM是一種全新的腫瘤微循環(huán)供給模式,它與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和患者較差的生存預(yù)后密切相關(guān)。已有研究報(bào)道在多種惡性腫瘤中存在VM,如乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌等,但VM在胃癌中的報(bào)道卻很少見(jiàn)。本研究的主要目的是研究胃癌中是否存在VM,并分析VM與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,并進(jìn)一步探Cyclooxygenase-2參與胃癌VM形成的可能性及相關(guān)機(jī)制。研究方法:1)通過(guò)CD31/PAS雙染實(shí)驗(yàn)標(biāo)記VM,并分析VM與胃癌患者病理資料、生存預(yù)后的關(guān)系。2)免疫組化染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌標(biāo)本COX-2、PGE2、Snail的表達(dá)情況,分析COX-2與臨床病理資料、生存預(yù)后的關(guān)系,并探討COX-2、PGE2、Snail與VM存在的關(guān)系及COX-2與PGE2、Snail表達(dá)的相關(guān)性。3)根據(jù)COX-2的表達(dá)情況,選擇低表達(dá)COX-2的MKN74胃癌細(xì)胞系和高表達(dá)COX-2的MKN45胃癌細(xì)胞系。對(duì)MKN74細(xì)胞構(gòu)建COX-2上調(diào)模型,對(duì)MKN45細(xì)胞構(gòu)建COX-2下調(diào)模型。利用Western-Blotting及RT-PCR鑒定COX-2轉(zhuǎn)染效果。4)通過(guò)體外三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分析COX-2過(guò)表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞系MKN74細(xì)胞形成VM管狀結(jié)構(gòu)能力的影響;COX-2降表達(dá)對(duì)MKN45細(xì)胞形成VM管狀結(jié)構(gòu)能力的影響;并檢測(cè)VE-Cadherin的變化。5)細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)COX-2表達(dá)的變化對(duì)胃癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響。6)Western Blotting檢測(cè)過(guò)表達(dá)COX-2對(duì)MKN74細(xì)胞PGE2、Snail、EMT相關(guān)蛋白(E-Cadherin、Vimentin)表達(dá)的影響;降表達(dá)COX-2對(duì)MKN45細(xì)胞中PGE2、Snail、EMT相關(guān)蛋白(E-Cadherin、Vimentin)表達(dá)的影響。7)對(duì)MKN74細(xì)胞構(gòu)建Snail上調(diào)模型,對(duì)MKN45細(xì)胞構(gòu)建Snail下調(diào)模型。利用Western Blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果。Western Blotting檢測(cè)過(guò)表達(dá)Snail對(duì)MKN74細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白(E-Cadherin、Vimentin)表達(dá)的影響;降表達(dá)Snail對(duì)MKN45細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白(E-Cadherin、Vimentin)表達(dá)的影響。8)通過(guò)體外三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分析Snail過(guò)表達(dá)對(duì)MKN74細(xì)胞形成VM管狀結(jié)構(gòu)能力的影響;Snail降表達(dá)對(duì)MKN45細(xì)胞形成VM管狀結(jié)構(gòu)能力的影響。9)細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Snail的變化對(duì)胃癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響。結(jié)果:1)通過(guò)CD31/PAS染色證實(shí)胃癌中存在VM,100例胃癌組織中有35例存在VM結(jié)構(gòu),(35/100,35%)。VM的存在與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、TNM分期無(wú)關(guān)(p=0.284;p=0.946;p=0.850;p=0.232),VM的存在與胃癌患者的Lauren,s分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.029;p=0.020;p=0.018)。單因素生存分析表明,有VM組平均生存期為54.9個(gè)月,無(wú)VM組平均生存期為25.7個(gè)月,同一生存率下,有VM組比無(wú)VM組生存期短,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.001)。2)胃癌中COX-2的表達(dá)與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、Lauren,s分型、TNM分期未見(jiàn)明顯差別(p=0.191;p=0.480;p=0.368;p=0.462;p=0.514),但COX-2的陽(yáng)性表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.025);有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組COX-2的陽(yáng)性率(75%,27/36)明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(53.2%,33/62),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.022)。Kaplan-Meier單因素生存曲線比較胃癌中COX-2陽(yáng)性組與COX-2陰性組的生存率,結(jié)果表明COX-2陽(yáng)性組平均生存時(shí)間為61.9個(gè)月,COX-2陰性組平均生存時(shí)間為31.9個(gè)月,COX-2陽(yáng)性組比COX-2陰性組生存期短,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.002)。3)免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在胃癌中,有VM組COX-2、PGE2、Snail的陽(yáng)性率均高于無(wú)VM組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.032;p=0.013;p=0.012);Spearman相關(guān)分析表明,COX-2的表達(dá)與PGE2、Snail的表達(dá)呈正相關(guān)(p0.05)。4)檢測(cè)MKN74、MKN45兩種胃癌細(xì)胞系,MKN74在mRNA和蛋白水平低表達(dá)COX-2,MKN45在m RNA和蛋白水平高表達(dá)COX-2。5)感染LV-COX-2慢病毒后,MKN74細(xì)胞的COX-2蛋白表達(dá)明顯上調(diào),感染LV-sh COX-2慢病毒后,MKN45細(xì)胞的COX-2蛋白表達(dá)明顯下調(diào)。6)體外三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明,過(guò)表達(dá)COX-2能夠促進(jìn)MKN74細(xì)胞管腔樣結(jié)構(gòu)的形成,沉默COX-2表達(dá)可抑制MKN45細(xì)胞管腔樣結(jié)構(gòu)的形成。上調(diào)COX-2表達(dá)可以上調(diào)MKN74細(xì)胞VE-Cadherin蛋白的表達(dá),下調(diào)COX-2表達(dá)可抑制MKN45細(xì)胞VE-Cadherin的表達(dá)。7)MKN74細(xì)胞上調(diào)COX-2后,其遷移、侵襲能力明顯增強(qiáng);MKN45細(xì)胞下調(diào)COX-2后,其遷移、侵襲能力明顯減弱。8)隨著COX-2表達(dá)的變化,細(xì)胞表型出現(xiàn)相應(yīng)的變化;WB結(jié)果表明,MKN74胞上調(diào)COX-2表達(dá)后,E-Cadherin蛋白表達(dá)的表達(dá)下調(diào),Vimentin、Snail、PGE2的表達(dá)上調(diào)。MKN45細(xì)胞下調(diào)COX-2表達(dá)后,E-Cadherin表達(dá)上調(diào),Vimentin、Snail、PGE2表達(dá)隨之下調(diào)。9)MKN74細(xì)胞感染LV-Snail慢病毒后,其Snail表達(dá)明顯上調(diào);MKN45細(xì)胞感染LV-sh Snail慢病毒后,可以顯著下調(diào)Snail的表達(dá)。10)WB結(jié)果表明,上調(diào)Snail可促進(jìn)MKN74細(xì)胞EMT的發(fā)生,下調(diào)Snail可以抑制MKN45細(xì)胞EMT的發(fā)生。11)三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明,上調(diào)Snail能夠促進(jìn)MKN74細(xì)胞管腔樣結(jié)構(gòu)的形成,下調(diào)Snail表達(dá)可抑制MKN45細(xì)胞管腔樣結(jié)構(gòu)的形成;MKN74上調(diào)Snail表達(dá)后,可以促進(jìn)MKN74細(xì)胞的遷移和侵襲,下調(diào)Snail表達(dá)的MKN45胃癌細(xì)胞其遷移、侵襲能力明顯減弱。結(jié)論:1)胃癌中存在VM這種微循環(huán)模式,VM的存在與胃癌患者的Lauren,s分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān),VM是評(píng)估胃癌患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。2)在100例胃癌中有60例COX-2表達(dá)陽(yáng)性;COX-2與其胃癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān),COX-2的陽(yáng)性表達(dá)是評(píng)估胃癌患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。3)上調(diào)Snail表達(dá)后,可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞EMT的發(fā)生,同時(shí)促進(jìn)胃癌細(xì)胞VM的形成,并促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移。4)COX-2可以通過(guò)誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT、上調(diào)VE-Cadherin的表達(dá)促進(jìn)胃癌細(xì)胞VM的形成,并增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲、遷移能力。
【關(guān)鍵詞】：COX-2 胃癌 血管生成擬態(tài) 侵襲 遷移 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語(yǔ)13-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、COX-2 在胃癌中的表達(dá)及其與VM及EMT的關(guān)系18-35
• 1.1 對(duì)象與方法18-21
• 1.1.1 臨床資料18-19
• 1.1.2 免疫組化染色19-21
• 1.1.3 免疫組化判讀21
• 1.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法21
• 1.2 結(jié)果21-29
• 1.2.1 所選取胃癌患者的基本情況21
• 1.2.2 胃癌中VM的形態(tài)學(xué)觀察21-23
• 1.2.3 胃癌中VM與臨床病理資料的關(guān)系23-24
• 1.2.4 胃癌中有VM組與無(wú)VM組的生存分析24-25
• 1.2.5 胃癌組織中COX-2 表達(dá)與臨床病理資料的關(guān)系25-27
• 1.2.6 胃癌中COX-2 陽(yáng)性組與COX-2 陰性組的生存分析27
• 1.2.7 胃癌組織中VM、COX-2 的多因素分析27-28
• 1.2.8 胃癌組織中VM與COX-2、PGE2、Snail表達(dá)的關(guān)系28
• 1.2.9 胃癌中COX-2 的表達(dá)與PGE2、Snail表達(dá)的相關(guān)性分析28-29
• 1.3 討論29-34
• 1.3.1 胃癌中VM存在的臨床意義29-31
• 1.3.2 胃癌中COX-2 的表達(dá)及臨床意義31-32
• 1.3.3 COX-2、PGE2、Snail在胃癌VM形成中的作用32-34
• 1.4 小結(jié)34-35
• 二 COX-2 增強(qiáng)胃癌細(xì)胞遷移、侵襲和VM形成的體外研究35-63
• 2.1 對(duì)象和方法35-46
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料35-38
• 2.1.2 研究方法38-45
• 2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45-46
• 2.2 結(jié)果46-56
• 2.2.1 COX-2 過(guò)表達(dá)、降表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞的影響46-52
• 2.2.2 Snail過(guò)表達(dá)、降表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞的影響52-56
• 2.3 討論56-62
• 2.4 小結(jié)62-63
• 全文結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-72
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明72-73
• 綜述 COX-2 在癌癥中的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展73-90
• 綜述參考文獻(xiàn)82-90
• 致謝90-91
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷91

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本文編號(hào)：774746