本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用等位基因特異性PCR方法研究東北住院人群MPLW515突變情況

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【摘要】：JAK2V617F突變的發(fā)現(xiàn)使得費(fèi)城染色體陰性(Ph-)骨髓增殖性腫瘤(MPNs)發(fā)病機(jī)制的研究獲得了重大突破,明確了JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的磷酸化以及下游多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活,都可能是JAK2V617F突變引發(fā)的,并最終誘發(fā)疾病。繼JAK2V617F突變發(fā)現(xiàn)后,MPL基因的多種突變的發(fā)現(xiàn)對(duì)進(jìn)一步揭示MPNs發(fā)病機(jī)制有著重要的意義。MPLW515L/K突變已經(jīng)成為MPNs發(fā)病機(jī)制研究的新熱點(diǎn)。骨髓組織持續(xù)增殖而引起的一組疾病稱為骨髓增殖性腫瘤(MPNs),常表現(xiàn)為一系或多系造血干細(xì)胞惡性增生。根據(jù)增生的細(xì)胞系不同,常將該疾病分為PV(真性紅細(xì)胞增多癥)、ET(原發(fā)性血小板增多癥)、PMF(原發(fā)性骨髓纖維化)及CML(慢性髓細(xì)胞樣白血病)。其中,前三者屬于費(fèi)城染色體陰性MPNs,CML則為費(fèi)城染色體陽(yáng)性。在中國(guó),有95%左右的真性紅細(xì)胞增多癥患者發(fā)生JAK2V617F突變,而有約50%的原發(fā)性血小板增多癥和50%左右的原發(fā)性骨髓纖維化患者發(fā)生JAK2V617F突變。JAK2V617F突變的發(fā)現(xiàn)為研究MPNs發(fā)病機(jī)制提供了重要的理論依據(jù)。通過(guò)以往的研究報(bào)道可知,約50%的ET和約50%的PMF患者是JAK2V617F陰性,而只有不到5%的PV患者是JAK2V617F陰性。這一結(jié)論讓某些研究工作者產(chǎn)生了一種假設(shè):有一種新的突變發(fā)生在這些JAK2V617F陰性患者中,從而激活了JAK-STAT信號(hào)通路。因此,在之后的研究中就發(fā)現(xiàn)JAK2V617F陰性真性紅細(xì)胞增多癥患者的JAK2基因外顯子12上發(fā)生了插入或缺失突變,但在JAK2V617F陰性的ET和PMF患者中并沒(méi)有相同突變的發(fā)生。在JAK2基因外顯子12上發(fā)生突變的大多數(shù)患者都有紅細(xì)胞增多的癥狀出現(xiàn),卻沒(méi)有出現(xiàn)血小板增多的癥狀。以上發(fā)現(xiàn)說(shuō)明了發(fā)生在同一基因上的不同突變最終會(huì)產(chǎn)生不同的臨床癥狀。既然在JAK2V617F陰性的ET與PMF患者的JAK2基因上沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其他突變,那么一些研究人員開(kāi)始推測(cè):在JAK-STAT信號(hào)通路中,是否有突變存在于與JAK2基因發(fā)生相互作用的細(xì)胞因子受體上。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的研究,在2006年有研究小組發(fā)現(xiàn)了JAK2V617F陰性的ET與PMF患者的TPOR(血小板生成素受體蛋白)上存在MPLW515L/K突變。隨后的研究又發(fā)現(xiàn)在JAK2V617F陰性MPNs患者的MPL基因上還存在除第515位氨基酸以外,發(fā)生在其他位點(diǎn)上的突變,也有在同一患者的MPL基因上兩個(gè)不同位點(diǎn)都發(fā)生突變的情況。在這些存在于MPL基因上的不同突變中,MPLW515L突變所占的比重最大,有68%左右。通過(guò)骨髓移植小鼠模型可以發(fā)現(xiàn),表達(dá)MPLW515L突變的小鼠癥狀與表達(dá)JAK2V617F突變的癥狀有所差異,MPLW515L突變小鼠表現(xiàn)出白細(xì)胞增多、骨髓纖維化以及血小板增多的癥狀,卻沒(méi)有紅細(xì)胞增多的癥狀發(fā)生。通過(guò)觀察體外培養(yǎng)的MPLW515L突變陽(yáng)性患者的細(xì)胞,可以發(fā)現(xiàn)有內(nèi)源性巨核細(xì)胞集落形成,但是沒(méi)有內(nèi)源性紅細(xì)胞集落的形成。這說(shuō)明MPLW515突變可能導(dǎo)致更加嚴(yán)重的白血病的發(fā)生,因此,研究MPLW515突變對(duì)于白血病的早期診斷、治療和預(yù)后具有重要的指導(dǎo)意義。目前的研究表明,在約10%的JAK2V617F陰性PMF患者中存在MPLW515L突變,而有8.5%左右的JAK2V617F陰性ET患者發(fā)生MPLW515L突變。但是,在東北人群中關(guān)于MPLW515L突變發(fā)生率的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本文應(yīng)用了AS-PCR(等位基因特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)和DNA序列測(cè)序分析,從收集的住院患者外周血液樣本中選取了血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果中白細(xì)胞數(shù)值相對(duì)較高的患者,對(duì)1018例血液樣本進(jìn)行篩選檢測(cè),發(fā)現(xiàn)2例MPLW515L突變陽(yáng)性患者,陽(yáng)性率接近2‰。我們的研究為MPLW515突變潛在的致病風(fēng)險(xiǎn)的研究奠定了理論基礎(chǔ),也為MPNs乃至白血病的臨床診斷和靶向治療提供了新的方向。
【關(guān)鍵詞】：MPL MPLW515L突變 MPNs
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R733.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• abstract6-12
• 第一章 緒論12-28
• 第一節(jié) 癌基因與原癌基因13-17
• 1.1 癌基因與原癌基因的簡(jiǎn)介13
• 1.2 細(xì)胞癌基因的分類13-14
• 1.3 激活原癌基因的機(jī)制14-17
• 第二節(jié) c-Mpl基因相關(guān)內(nèi)容介紹17-23
• 2.1 c-Mpl基因的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)17-18
• 2.2 c-Mpl信號(hào)通路的作用機(jī)理18-19
• 2.3 TPO簡(jiǎn)介及相關(guān)生物學(xué)功能19-21
• 2.4 JAK-STAT信號(hào)通路的作用機(jī)理21-23
• 第三節(jié) MPLW515L/K突變與疾病發(fā)展的聯(lián)系23-27
• 3.1 MPLW515L/K突變23-24
• 3.2 MPLW515L/K突變的發(fā)展近況24-27
• 第四節(jié) 研究目的和理論意義27-28
• 4.1 研究目的27
• 4.2 理論意義27-28
• 第二章 AS-PCR檢測(cè)MPLW515L/K突變28-41
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料28-30
• 1 實(shí)驗(yàn)儀器28
• 2 主要試劑28-29
• 3 溶液制備29
• 4 血液樣本29-30
• 5 引物的設(shè)計(jì)與合成30
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法30-36
• 1 基因組DNA的提取30-31
• 2 構(gòu)建pKS-MPL與pKS-MPLW515L/K31-34
• 3 AS-PCR檢測(cè)MPLW515L/K突變34-36
• 第三節(jié) 結(jié)果與討論36-41
• 1 構(gòu)建pKS-MPL與pKS-MPLW515L36-37
• 2 AS-PCR檢測(cè)MPLW515L/K突變的靈敏度37-38
• 3 檢測(cè)MPLW515L/K突變的頻率38-39
• 4 血液樣本的血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果39-41
• 第三章 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 附錄46-49
• 致謝49

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王嘉欣;應(yīng)用等位基因特異性PCR方法研究東北住院人群MPLW515突變情況[D];吉林大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：755337