發(fā)布時間：2017-08-29 20:38

  本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用等位基因特異性PCR方法研究東北住院人群MPLW515突變情況

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【摘要】：JAK2V617F突變的發(fā)現(xiàn)使得費城染色體陰性(Ph-)骨髓增殖性腫瘤(MPNs)發(fā)病機制的研究獲得了重大突破,明確了JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的磷酸化以及下游多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活,都可能是JAK2V617F突變引發(fā)的,并最終誘發(fā)疾病。繼JAK2V617F突變發(fā)現(xiàn)后,MPL基因的多種突變的發(fā)現(xiàn)對進一步揭示MPNs發(fā)病機制有著重要的意義。MPLW515L/K突變已經(jīng)成為MPNs發(fā)病機制研究的新熱點。骨髓組織持續(xù)增殖而引起的一組疾病稱為骨髓增殖性腫瘤(MPNs),常表現(xiàn)為一系或多系造血干細胞惡性增生。根據(jù)增生的細胞系不同,常將該疾病分為PV(真性紅細胞增多癥)、ET(原發(fā)性血小板增多癥)、PMF(原發(fā)性骨髓纖維化)及CML(慢性髓細胞樣白血病)。其中,前三者屬于費城染色體陰性MPNs,CML則為費城染色體陽性。在中國,有95%左右的真性紅細胞增多癥患者發(fā)生JAK2V617F突變,而有約50%的原發(fā)性血小板增多癥和50%左右的原發(fā)性骨髓纖維化患者發(fā)生JAK2V617F突變。JAK2V617F突變的發(fā)現(xiàn)為研究MPNs發(fā)病機制提供了重要的理論依據(jù)。通過以往的研究報道可知,約50%的ET和約50%的PMF患者是JAK2V617F陰性,而只有不到5%的PV患者是JAK2V617F陰性。這一結(jié)論讓某些研究工作者產(chǎn)生了一種假設(shè):有一種新的突變發(fā)生在這些JAK2V617F陰性患者中,從而激活了JAK-STAT信號通路。因此,在之后的研究中就發(fā)現(xiàn)JAK2V617F陰性真性紅細胞增多癥患者的JAK2基因外顯子12上發(fā)生了插入或缺失突變,但在JAK2V617F陰性的ET和PMF患者中并沒有相同突變的發(fā)生。在JAK2基因外顯子12上發(fā)生突變的大多數(shù)患者都有紅細胞增多的癥狀出現(xiàn),卻沒有出現(xiàn)血小板增多的癥狀。以上發(fā)現(xiàn)說明了發(fā)生在同一基因上的不同突變最終會產(chǎn)生不同的臨床癥狀。既然在JAK2V617F陰性的ET與PMF患者的JAK2基因上沒有發(fā)現(xiàn)其他突變,那么一些研究人員開始推測:在JAK-STAT信號通路中,是否有突變存在于與JAK2基因發(fā)生相互作用的細胞因子受體上。經(jīng)過一段時間的研究,在2006年有研究小組發(fā)現(xiàn)了JAK2V617F陰性的ET與PMF患者的TPOR(血小板生成素受體蛋白)上存在MPLW515L/K突變。隨后的研究又發(fā)現(xiàn)在JAK2V617F陰性MPNs患者的MPL基因上還存在除第515位氨基酸以外,發(fā)生在其他位點上的突變,也有在同一患者的MPL基因上兩個不同位點都發(fā)生突變的情況。在這些存在于MPL基因上的不同突變中,MPLW515L突變所占的比重最大,有68%左右。通過骨髓移植小鼠模型可以發(fā)現(xiàn),表達MPLW515L突變的小鼠癥狀與表達JAK2V617F突變的癥狀有所差異,MPLW515L突變小鼠表現(xiàn)出白細胞增多、骨髓纖維化以及血小板增多的癥狀,卻沒有紅細胞增多的癥狀發(fā)生。通過觀察體外培養(yǎng)的MPLW515L突變陽性患者的細胞,可以發(fā)現(xiàn)有內(nèi)源性巨核細胞集落形成,但是沒有內(nèi)源性紅細胞集落的形成。這說明MPLW515突變可能導(dǎo)致更加嚴重的白血病的發(fā)生,因此,研究MPLW515突變對于白血病的早期診斷、治療和預(yù)后具有重要的指導(dǎo)意義。目前的研究表明,在約10%的JAK2V617F陰性PMF患者中存在MPLW515L突變,而有8.5%左右的JAK2V617F陰性ET患者發(fā)生MPLW515L突變。但是,在東北人群中關(guān)于MPLW515L突變發(fā)生率的研究還未見報道。本文應(yīng)用了AS-PCR(等位基因特異性聚合酶鏈式反應(yīng))技術(shù)和DNA序列測序分析,從收集的住院患者外周血液樣本中選取了血常規(guī)檢測結(jié)果中白細胞數(shù)值相對較高的患者,對1018例血液樣本進行篩選檢測,發(fā)現(xiàn)2例MPLW515L突變陽性患者,陽性率接近2‰。我們的研究為MPLW515突變潛在的致病風(fēng)險的研究奠定了理論基礎(chǔ),也為MPNs乃至白血病的臨床診斷和靶向治療提供了新的方向。
【關(guān)鍵詞】：MPL MPLW515L突變 MPNs
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• abstract6-12
• 第一章 緒論12-28
• 第一節(jié) 癌基因與原癌基因13-17
• 1.1 癌基因與原癌基因的簡介13
• 1.2 細胞癌基因的分類13-14
• 1.3 激活原癌基因的機制14-17
• 第二節(jié) c-Mpl基因相關(guān)內(nèi)容介紹17-23
• 2.1 c-Mpl基因的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)17-18
• 2.2 c-Mpl信號通路的作用機理18-19
• 2.3 TPO簡介及相關(guān)生物學(xué)功能19-21
• 2.4 JAK-STAT信號通路的作用機理21-23
• 第三節(jié) MPLW515L/K突變與疾病發(fā)展的聯(lián)系23-27
• 3.1 MPLW515L/K突變23-24
• 3.2 MPLW515L/K突變的發(fā)展近況24-27
• 第四節(jié) 研究目的和理論意義27-28
• 4.1 研究目的27
• 4.2 理論意義27-28
• 第二章 AS-PCR檢測MPLW515L/K突變28-41
• 第一節(jié) 實驗材料28-30
• 1 實驗儀器28
• 2 主要試劑28-29
• 3 溶液制備29
• 4 血液樣本29-30
• 5 引物的設(shè)計與合成30
• 第二節(jié) 實驗方法30-36
• 1 基因組DNA的提取30-31
• 2 構(gòu)建pKS-MPL與pKS-MPLW515L/K31-34
• 3 AS-PCR檢測MPLW515L/K突變34-36
• 第三節(jié) 結(jié)果與討論36-41
• 1 構(gòu)建pKS-MPL與pKS-MPLW515L36-37
• 2 AS-PCR檢測MPLW515L/K突變的靈敏度37-38
• 3 檢測MPLW515L/K突變的頻率38-39
• 4 血液樣本的血常規(guī)檢測結(jié)果39-41
• 第三章 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-46
• 附錄46-49
• 致謝49

【相似文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王嘉欣;應(yīng)用等位基因特異性PCR方法研究東北住院人群MPLW515突變情況[D];吉林大學(xué);2016年

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本文編號：755337