本文關(guān)鍵詞：雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾對小鼠黑色素瘤B16細胞株的影響

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【摘要】：目的:黑色素瘤惡性程度高,易發(fā)生轉(zhuǎn)移且手術(shù)切除后復(fù)發(fā)率高。目前,其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)不斷地增加。現(xiàn)在的醫(yī)療手段對其并沒有理想的治療方法。為尋找治療惡性黑色素瘤的有效藥物,本文探討雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾對小鼠黑色素瘤B16細胞株的影響及部分作用機制,為臨床治療提供基礎(chǔ)實驗依據(jù)。方法:1 細胞培養(yǎng)2 采用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法繪制B16細胞的生長曲線,了解B16細胞生長特征,為后續(xù)試驗做準備。3 采用MTT法檢測兩種藥物在不同時間和不同濃度下對B16細胞的影響。4 應(yīng)用倒置顯微鏡和HE染色法觀察B16細胞在藥物干預(yù)前后相關(guān)因素的變化。5 應(yīng)用流式細胞技術(shù)(FCM)檢測B16細胞周期和凋亡情況。6 采用免疫細胞技術(shù)檢測血管內(nèi)皮生長因子表達情況。7 應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS16.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:1 MTT法繪制B16細胞生長曲線細胞在96孔板中培養(yǎng)不同時間后,用酶標儀測OD值,繪制成的生長曲線近似“S”型。2 MTT檢測結(jié)果隨著雷公藤內(nèi)酯醇濃度的增高、藥物作用時間的延長,其對細胞的抑制作用越大(P0.05)。隨著美托洛爾濃度的增高、藥物作用時間延長,其對細胞的抑制作用越大(P0.05)。雷公藤內(nèi)酯醇組與美托洛爾組比較,兩種藥物干預(yù)細胞24小時后,2.5ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組的抑制率與15.63ug/ml濃度的美托洛爾組的抑制率無顯著差異(P0.05);5.0ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組的抑制率與31.25ug/ml濃度的美托洛爾組的抑制率無顯著差異(P0.05),其余不同濃度組間相比有顯著差異(P0.05)。兩種藥物干預(yù)細胞48小時后,2.5ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組的抑制率與15.63ug/ml濃度的美托洛爾組的抑制率無顯著差異(P0.05);5.0ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組的抑制率與31.25ug/ml濃度的美托洛爾組的抑制率無顯著差異(P0.05),其余不同濃度組間相比有顯著差異(P0.05)。兩種藥物干預(yù)細胞72小時后,兩藥物不同濃度組間相比較均有顯著差異(P0.05),且25ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組對B16細胞抑制作用最大。3 倒置顯微鏡下細胞形態(tài)特征及培養(yǎng)基顏色觀察藥物干預(yù)前,B16細胞生長良好,呈多角形或菱形,貼壁生長,單層均勻分布,細胞間可見細絲連接,細胞膜完整,可見細胞核,折光性好,培養(yǎng)基澄清透明。藥物干預(yù)后,細胞貼壁能力下降,部分細胞呈漂浮生長狀態(tài),細胞變小、變圓、皺縮,細胞間連接消失,核折光性下降,隨著藥物濃度的增高及藥物作用時間的延長,細胞的形態(tài)變化越大,且雷公藤內(nèi)酯醇組對細胞形態(tài)影響強于美托洛爾組。雷公藤內(nèi)酯醇組培養(yǎng)基的顏色隨著藥物濃度的變大、作用時間的延長,各濃度組間呈現(xiàn)由暗黃色到粉紅色的梯度顏色變化。美托洛爾各濃度組間培養(yǎng)基顏色無明顯變化。4 HE染色觀察B16細胞形態(tài)學(xué)特征藥物干預(yù)前,鏡下可見細胞質(zhì)呈粉紅色,細胞核呈藍色,可見核分裂,多個細胞核,細胞膜完整,細胞貼壁數(shù)目較多,細胞間連接緊密,細胞分布均勻。藥物干預(yù)后,貼壁細胞數(shù)目少,細胞間連接消失,可見孤立、成團的細胞,細胞膜部分破裂,可見細胞核萎縮、碎裂。比倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)更清晰。相對于美托洛爾組而言,雷公藤內(nèi)酯醇對細胞形態(tài)影響更大。5藥物對B16細胞的細胞周期及凋亡的影響兩藥物組分別與對照組比較,G0/G1期隨著藥物濃度增高,處于該周期的細胞比例增加(P0.05),S期隨著藥物濃度的增高,處于該期的細胞比例減少(P0.05)。兩種藥物干預(yù)細胞48小時后,在B16細胞DNA直方圖上沒有發(fā)現(xiàn)明顯的亞G1峰(細胞凋亡峰)。6藥物對B16細胞VEGF蛋白表達影響兩種藥物組分別與對照組比較,VEGF蛋白量表達均下降(P0.05),且雷公藤內(nèi)酯醇組隨著藥物濃度的增加VEGF表達量下降(P0.05),美托洛爾組隨著藥物濃度的增加VEGF表達量無明顯下降(P0.05)。雷公藤內(nèi)酯醇組與美托洛爾組比較,雷公藤內(nèi)酯醇使VEGF蛋白表達量的下降更顯著。結(jié)論:1 雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾均可抑制小鼠黑色素瘤B16細胞的增殖,且在一定范圍內(nèi)具有濃度依賴性和時間依賴性。2 雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾可將細胞周期抑制在G0/G1期,且在一定范圍內(nèi)有濃度依賴性。本實驗未檢測到兩種藥物引起的凋亡現(xiàn)象,可能是被干預(yù)的細胞正處于凋亡的早期階段等原因,故不能排除兩種藥物通過凋亡機制抑制B16細胞的可能性,需進一步探討。3 雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾均能使B16細胞中VEGF表達量下降,且雷公藤內(nèi)酯醇的抑制作用強于美托洛爾并具有濃度依賴性。故可以推斷抑制VEGF表達可能是兩種藥物抗腫瘤的作用機制之一。4 雷公藤內(nèi)酯醇對B16細胞的抑制增殖作用強于美托洛爾。
【關(guān)鍵詞】：黑色素瘤 雷公藤內(nèi)酯醇 美托洛爾 B16細胞 周期
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-35
• 附表35-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-46
• 綜述 晚期惡性黑色素瘤的治療進展46-57
• 參考文獻53-57
• 致謝57-58
• 個人簡歷58

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊春欣,周庭川,秦萬章;雷公藤內(nèi)酯醇不同季節(jié)的含量變化[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2001年01期

2 胡可斌,劉志紅,劉棟,黎磊石;雷公藤內(nèi)酯醇抑制血管內(nèi)皮細胞生長因子的表達與合成[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2001年18期

3 王曙東,滕英博,謝虞;不同吸附條件對雷公藤內(nèi)酯醇含量的影響[J];南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2005年05期

4 王瑜;張U，

本文編號：519986