本文關(guān)鍵詞：雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾對(duì)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞株的影響

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【摘要】：目的:黑色素瘤惡性程度高,易發(fā)生轉(zhuǎn)移且手術(shù)切除后復(fù)發(fā)率高。目前,其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)不斷地增加�，F(xiàn)在的醫(yī)療手段對(duì)其并沒(méi)有理想的治療方法。為尋找治療惡性黑色素瘤的有效藥物,本文探討雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾對(duì)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞株的影響及部分作用機(jī)制,為臨床治療提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1 細(xì)胞培養(yǎng)2 采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法繪制B16細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,了解B16細(xì)胞生長(zhǎng)特征,為后續(xù)試驗(yàn)做準(zhǔn)備。3 采用MTT法檢測(cè)兩種藥物在不同時(shí)間和不同濃度下對(duì)B16細(xì)胞的影響。4 應(yīng)用倒置顯微鏡和HE染色法觀察B16細(xì)胞在藥物干預(yù)前后相關(guān)因素的變化。5 應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測(cè)B16細(xì)胞周期和凋亡情況。6 采用免疫細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)情況。7 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1 MTT法繪制B16細(xì)胞生長(zhǎng)曲線細(xì)胞在96孔板中培養(yǎng)不同時(shí)間后,用酶標(biāo)儀測(cè)OD值,繪制成的生長(zhǎng)曲線近似“S”型。2 MTT檢測(cè)結(jié)果隨著雷公藤內(nèi)酯醇濃度的增高、藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng),其對(duì)細(xì)胞的抑制作用越大(P0.05)。隨著美托洛爾濃度的增高、藥物作用時(shí)間延長(zhǎng),其對(duì)細(xì)胞的抑制作用越大(P0.05)。雷公藤內(nèi)酯醇組與美托洛爾組比較,兩種藥物干預(yù)細(xì)胞24小時(shí)后,2.5ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組的抑制率與15.63ug/ml濃度的美托洛爾組的抑制率無(wú)顯著差異(P0.05);5.0ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組的抑制率與31.25ug/ml濃度的美托洛爾組的抑制率無(wú)顯著差異(P0.05),其余不同濃度組間相比有顯著差異(P0.05)。兩種藥物干預(yù)細(xì)胞48小時(shí)后,2.5ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組的抑制率與15.63ug/ml濃度的美托洛爾組的抑制率無(wú)顯著差異(P0.05);5.0ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組的抑制率與31.25ug/ml濃度的美托洛爾組的抑制率無(wú)顯著差異(P0.05),其余不同濃度組間相比有顯著差異(P0.05)。兩種藥物干預(yù)細(xì)胞72小時(shí)后,兩藥物不同濃度組間相比較均有顯著差異(P0.05),且25ng/ml濃度的雷公藤內(nèi)酯醇組對(duì)B16細(xì)胞抑制作用最大。3 倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)特征及培養(yǎng)基顏色觀察藥物干預(yù)前,B16細(xì)胞生長(zhǎng)良好,呈多角形或菱形,貼壁生長(zhǎng),單層均勻分布,細(xì)胞間可見(jiàn)細(xì)絲連接,細(xì)胞膜完整,可見(jiàn)細(xì)胞核,折光性好,培養(yǎng)基澄清透明。藥物干預(yù)后,細(xì)胞貼壁能力下降,部分細(xì)胞呈漂浮生長(zhǎng)狀態(tài),細(xì)胞變小、變圓、皺縮,細(xì)胞間連接消失,核折光性下降,隨著藥物濃度的增高及藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞的形態(tài)變化越大,且雷公藤內(nèi)酯醇組對(duì)細(xì)胞形態(tài)影響強(qiáng)于美托洛爾組。雷公藤內(nèi)酯醇組培養(yǎng)基的顏色隨著藥物濃度的變大、作用時(shí)間的延長(zhǎng),各濃度組間呈現(xiàn)由暗黃色到粉紅色的梯度顏色變化。美托洛爾各濃度組間培養(yǎng)基顏色無(wú)明顯變化。4 HE染色觀察B16細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征藥物干預(yù)前,鏡下可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)呈粉紅色,細(xì)胞核呈藍(lán)色,可見(jiàn)核分裂,多個(gè)細(xì)胞核,細(xì)胞膜完整,細(xì)胞貼壁數(shù)目較多,細(xì)胞間連接緊密,細(xì)胞分布均勻。藥物干預(yù)后,貼壁細(xì)胞數(shù)目少,細(xì)胞間連接消失,可見(jiàn)孤立、成團(tuán)的細(xì)胞,細(xì)胞膜部分破裂,可見(jiàn)細(xì)胞核萎縮、碎裂。比倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)更清晰。相對(duì)于美托洛爾組而言,雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)細(xì)胞形態(tài)影響更大。5藥物對(duì)B16細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡的影響兩藥物組分別與對(duì)照組比較,G0/G1期隨著藥物濃度增高,處于該周期的細(xì)胞比例增加(P0.05),S期隨著藥物濃度的增高,處于該期的細(xì)胞比例減少(P0.05)。兩種藥物干預(yù)細(xì)胞48小時(shí)后,在B16細(xì)胞DNA直方圖上沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的亞G1峰(細(xì)胞凋亡峰)。6藥物對(duì)B16細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)影響兩種藥物組分別與對(duì)照組比較,VEGF蛋白量表達(dá)均下降(P0.05),且雷公藤內(nèi)酯醇組隨著藥物濃度的增加VEGF表達(dá)量下降(P0.05),美托洛爾組隨著藥物濃度的增加VEGF表達(dá)量無(wú)明顯下降(P0.05)。雷公藤內(nèi)酯醇組與美托洛爾組比較,雷公藤內(nèi)酯醇使VEGF蛋白表達(dá)量的下降更顯著。結(jié)論:1 雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾均可抑制小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞的增殖,且在一定范圍內(nèi)具有濃度依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性。2 雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾可將細(xì)胞周期抑制在G0/G1期,且在一定范圍內(nèi)有濃度依賴(lài)性。本實(shí)驗(yàn)未檢測(cè)到兩種藥物引起的凋亡現(xiàn)象,可能是被干預(yù)的細(xì)胞正處于凋亡的早期階段等原因,故不能排除兩種藥物通過(guò)凋亡機(jī)制抑制B16細(xì)胞的可能性,需進(jìn)一步探討。3 雷公藤內(nèi)酯醇和美托洛爾均能使B16細(xì)胞中VEGF表達(dá)量下降,且雷公藤內(nèi)酯醇的抑制作用強(qiáng)于美托洛爾并具有濃度依賴(lài)性。故可以推斷抑制VEGF表達(dá)可能是兩種藥物抗腫瘤的作用機(jī)制之一。4 雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)B16細(xì)胞的抑制增殖作用強(qiáng)于美托洛爾。
【關(guān)鍵詞】：黑色素瘤 雷公藤內(nèi)酯醇 美托洛爾 B16細(xì)胞 周期
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮寫(xiě)11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-35
• 附表35-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 綜述 晚期惡性黑色素瘤的治療進(jìn)展46-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 致謝57-58
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷58

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊春欣,周庭川,秦萬(wàn)章;雷公藤內(nèi)酯醇不同季節(jié)的含量變化[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2001年01期

2 胡可斌,劉志紅,劉棟,黎磊石;雷公藤內(nèi)酯醇抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)與合成[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2001年18期

3 王曙東,滕英博,謝虞;不同吸附條件對(duì)雷公藤內(nèi)酯醇含量的影響[J];南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2005年05期

4 王瑜;張U，

本文編號(hào)：519986