本文關(guān)鍵詞：負載胚胎干細胞抗原的DC疫苗對肝癌小鼠皮下移植瘤的抗腫瘤免疫治療作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的:以樹突狀細胞(dendritic cell,DC)為基礎(chǔ)的抗腫瘤免疫療法已成為研究熱點。腫瘤組織表達多種胚胎期抗原,與胚胎干細胞之間存在共同的抗原或細胞表面分子。本研究通過制備胚胎干細胞抗原且用其致敏樹突狀細胞制備DC疫苗,旨在觀察負載胚胎干細胞抗原的DC疫苗在小鼠肝癌皮下移植瘤模型中的抗腫瘤免疫治療作用。研究方法:1.通過聯(lián)合rm GM-CSF、rm IL-4,培養(yǎng)C57BL/6J小鼠骨髓來源的DC,胚胎干細胞抗原或肝癌細胞抗原誘導(dǎo)其成熟,制成DC疫苗;流式細胞術(shù)分析胚胎干細胞抗原致敏的DC疫苗、肝癌細胞抗原致敏的DC疫苗表面分子CD11c、CD80、CD86表達情況;2.小鼠肝癌細胞株(Hepa1-6)4×10^6/只接種于小鼠腹部皮下,建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型。根據(jù)不同抗原致敏的DC疫苗,設(shè)ESC-DC疫苗組、Hepa1-6-DC疫苗組、DC疫苗組和對照組(PBS組),每組10只小鼠,每周1次接種疫苗(2×10^6/只)或PBS(0.1ml/只),共3個治療周期。每5天觀察并記錄各組小鼠皮下腫瘤的橫徑、長徑,在任意腫瘤直徑≥15mm,或開始出現(xiàn)腫瘤潰瘍時處死所有小鼠,稱量并比較各組腫瘤的質(zhì)量。在治療結(jié)束后5天ELISA法檢測小鼠外周血清Ig G含量;LDH法檢測小鼠脾臟淋巴細胞對Hepa1-6的細胞毒性殺傷能力;流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟淋巴細胞中CD4+CD25+Fox P3+T細胞含量。結(jié)果:1.成功培養(yǎng)小鼠骨髓來源的DC,經(jīng)流式表型檢測,DC表面分子CD11c約占78%,ESC-DC表面分子CD80、CD86表達率(53.81%±4.48%、52.63%±5.83%)高于Hepa1-6-DC(46.57%±5.93%、42.88%±3.90%)、DC(35.04%±9.91%、34.67%±5.10%),p0.05;2.動態(tài)監(jiān)測各治療組和對照組小鼠皮下腫瘤的生長情況,結(jié)果顯示:腫瘤平均生長速度ESC-DC組Hepa1-6-DC組DC組PBS組;選擇完成治療周期后21天處死小鼠,稱重并比較各組腫瘤的平均質(zhì)量,ESC-DC組腫瘤重量低于Hepa1-6-DC組、DC組、PBS組,p0.05,分別為0.1573克、0.2387克、0.2620克、0.3633克;3.于治療結(jié)束后5天,對荷瘤小鼠進行免疫學(xué)指標(biāo)檢測,結(jié)果顯示:ESC-DC組外周血Ig G分泌水平高于Hepa1-6-DC組、DC組、PBS組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,分別為77.99±6.43ng/ml、49.47±4.36ng/ml、40.61±5.17ng/ml、17.21±2.55ng/ml;ESC-DC組荷瘤小鼠脾臟淋巴細胞對Hepa1-6的細胞毒殺能力高于Hepa1-6-DC組、DC組、PBS組,在不同的效靶比例中差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;流式檢測脾臟CD4+CD25+Fox P3+T細胞占CD4+T細胞的比例,結(jié)果顯示:ESC-DC組(5.94%±0.98%)明顯低于Hepa1-6-DC組(8.39%±0.60%)、DC組(10.65%±1.06%)、PBS組(13.27%±0.96%),p0.05。結(jié)論:1.胚胎干細胞抗原在體外能有效刺激小鼠骨髓來源的DC成熟,效果優(yōu)于肝癌細胞(Hepa1-6)抗原;2.ESC-DC疫苗、Hepa1-6-DC疫苗能夠誘導(dǎo)荷瘤小鼠產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng),減緩肝癌小鼠皮下移植瘤的生長速度;3.ESC-DC疫苗對肝癌小鼠的抗腫瘤免疫保護作用優(yōu)于Hepa1-6-DC疫苗及未經(jīng)抗原致敏的DC疫苗,為ES C-DC疫苗的臨床應(yīng)用提供理論和實驗基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：DC疫苗 胚胎干細胞 肝癌皮下移植瘤模型 腫瘤免疫治療
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照2-3
• 摘要3-5
• 英文摘要5-7
• 前言7-9
• 第一部分 小鼠骨髓來源樹突狀細胞分離、培養(yǎng)及DC疫苗的制備9-20
• 材料與方法9-16
• 結(jié)果16-20
• 第二部分 負載不同抗原的DC疫苗在肝癌小鼠的免疫治療作用20-31
• 材料與方法20-26
• 結(jié)果26-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-41
• 綜述41-50
• 參考文獻47-50
• 致謝50

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本文編號：498071