本文關鍵詞：ANG通過HMGA2調(diào)控肺鱗狀細胞癌細胞遷移、侵襲功能機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:作為一種惡性腫瘤,肺癌在全球范圍內(nèi)的死亡率高居第一,雖然近年來針對其的診治方法已取得了長足的進展,但是其預后仍不甚理想。而降低肺癌細胞細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力仍是降低肺癌發(fā)病率及致死率的重要一環(huán)。而肺鱗癌作為肺癌的第二大病理分型,占全部病理分型的40%。血管生成素(ANG)作為血管核糖核酸酶RNase A家族的一員,在多種腫瘤細胞中高表達,它具有33%的氨基酸成分及56%的RNase-A同源性。ANG被認為在腫瘤血管生成的過程中起著關鍵的作用。而近些年的研究發(fā)現(xiàn),ANG可以直接刺激rRNA的轉(zhuǎn)錄從而促進細胞的增殖,并與腫瘤的預后不良具有一定的相關性。ANG還可以裂解tRNA來影響腫瘤細胞中的各種反應,包括細胞的增殖、浸潤以及細胞核中管道的形成等,而在正常的非內(nèi)皮細胞的細胞核中,ANG卻鮮有表達。高遷移率族蛋白-2(HMGA2)被報道參與了多種生物學發(fā)展過程,包括胚胎的形成及腫瘤的發(fā)展。因為它可以通過改變?nèi)旧|(zhì)的結構來調(diào)節(jié)多種靶基因的表達,HMGA2常被稱為是”建筑轉(zhuǎn)錄因子”。他被報道與多種惡性腫瘤的不良預后具有相關性�；诖�,本研究擬探究ANG-HMGA2通路對肺鱗癌細胞增殖、遷移及侵襲能力的影響,并探討其可能的作用機制。并為今后ANG介導的相關靶向治療提供科學的依據(jù)。方法:本研究分為以下三個部分:1、檢測肺鱗癌組織和正常癌旁組織中ANG和HMGA的表達:收集肺鱗癌患者的腫瘤病灶組織與患者癌旁正常的肺組織,利用RT-PCR、Western Blot及免疫組織化學實驗技術在mRNA及蛋白水平檢測ANG及HMGA2在正常肺組織與肺鱗癌組織中的表達有無差異,利用免疫組織化學染色實驗對比正常癌旁肺組織標本和肺鱗癌腫瘤組織標本中ANG及HMGA2表達情況。2、ANG及HMGA2在肺鱗癌細胞中表達的關聯(lián)性及對肺鱗癌細胞功能的影響:培養(yǎng)人肺鱗癌細胞株SK-MES-1,并構建包有ANG及干擾ANG的RNA腺病毒。用Ad-ANG及ShHMGA2轉(zhuǎn)染細胞株SK-MES-1,以Ad-GFP及shScramble作為轉(zhuǎn)染對照,采用RT-PCR及Western Blot技術分別對比過表達及沉默ANG后HMGA2的表達差異。對比過表達及沉默HMGA2后SK-MES-1的增殖、遷移及侵襲等功能學改變。3、ANG直接調(diào)控HMGA2表達的機制研究:培養(yǎng)培養(yǎng)人肺鱗癌細胞株SK-MES-1,構建Ad-ANG及shHMGA2,轉(zhuǎn)染SK-MES-1,以同種細胞株轉(zhuǎn)染Ad-GFP及shScramble作對照,驗證過表達ANG但沉默HMGA2后兩組細胞間遷移、侵襲及增殖等功能的差異。然后采用染色體免疫共沉淀方法(CHIP)技術驗證HMGA2是否結合在ANG啟動子區(qū)。結果:1、通過qPCR在12對肺鱗癌及癌旁組織對ANG和HMGA2進行mRNA層面的檢測,我們得出肺鱗癌組織中的ANG及HMGA2的mRNA表達相對于對照組明顯升高(P0.05),同樣的趨勢也出現(xiàn)在Western Blot及免疫組化中。2、在細胞層面上,我們對肺鱗癌細胞系SK-MES-1轉(zhuǎn)染了包有ANG的腺病毒,分別在mRNA水平及Western Blot水平驗證轉(zhuǎn)染效率后,隨后利用RT-PCR檢測實驗和對照組的ANG及HMGA2的mRNA的量,結果示,實驗組HMGA2mRNA表達水平高于對照組(P0.05)。而肺鱗狀細胞癌細胞系SK-MES-1中轉(zhuǎn)染Ad-ANG后行Transwell遷移及侵襲試驗后遷移及侵襲細胞數(shù)經(jīng)高倍顯微鏡計數(shù)后與對照組相比具有顯著增多(*P0.05)。而轉(zhuǎn)染后的細胞系在CCK8增殖實驗在450nm處的OD值與對照組相比其具有顯著差異(*P0.05)。3、在共轉(zhuǎn)染Ad-ANG及shHMGA2后,經(jīng)PCR和Western Blot實驗檢測,HMGA2在mRNA和蛋白層面的表達相對于對照組差異明顯。Transwell遷移及侵襲試驗結果示在HMGA2干擾組中,高倍鏡下觀察,透膜遷移及侵襲的細胞明顯減少。CCK8細胞增殖試驗示HMGA2干擾組的細胞相對于對照組在OD450的吸光值明顯降低。接下來,染色體免疫共沉淀結果示ANG確實與HMGA2啟動子序列有結合。結論:ANG及其潛在下游調(diào)控蛋白HMGA2在肺鱗狀細胞癌組織中高表達,過表達了ANG后,HMGA2在mRNA層面及蛋白層面均顯著提高,且細胞的增殖、遷移及侵襲能力均有顯著提高。同樣過表達ANG,HMGA2抑制組細胞的增殖、遷移及增殖功能明顯降低,這進一步證實了ANG與HMGA2在肺鱗癌細胞中的關聯(lián)。最后,我們用染色體免疫共沉淀的實驗方法證實ANG是結合于HMGA2啟動子序列,表明ANG對HMGA2的直接調(diào)控作用。
【關鍵詞】：血管生成素 肺鱗狀細胞癌 高遷移率族蛋白A-2
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 縮略詞表11-12
• 前言12-16
• 參考文獻14-16
• 第一部分 檢測肺鱗癌組織和正常癌旁組織中ANG和HMGA2的表達16-29
• 一、材料和方法16-25
• 二、結果25-27
• 三、討論27-28
• 參考文獻28-29
• 第二部分 ANG及HMGA2的表達在肺鱗癌細胞中的聯(lián)系及對其功能學的影響29-40
• 一、材料29-31
• 二、方法31-34
• 三、結果34-38
• 參考文獻38-40
• 第三部分 ANG通過調(diào)控HMGA2誘導肺鱗癌細胞侵襲遷移的機制研究40-50
• 一、材料和方法40-45
• 二、結果與討論45-48
• 參考文獻48-50
• 全文總結50-52
• 綜述 肺癌中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究進展52-67
• 參考文獻60-67
• 在讀期間發(fā)表論文和參加科研工作情況67-68
• 致謝68

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4 張海生;付月云;彭燕;馬勝喜;劉德義;;血清蛋白雙向電泳圖譜早期診斷肺鱗狀細胞癌價值[J];中華實用診斷與治療雜志;2010年05期

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6 劉寶東，李士昌;肺鱗狀細胞癌和肺原發(fā)性惡性纖維組織細胞瘤并存一例[J];中華腫瘤雜志;1994年03期

7 賀盛光,葉乃瑤;92例原發(fā)性肺鱗狀細胞癌放療療效分析[J];四川腫瘤防治;1998年04期

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10 閆繼東,王躍,王巖,遲瑞鋒,李洪軍;肺鱗狀細胞癌定量測定和胞核形態(tài)分析的臨床意義[J];中國實驗診斷學;2004年03期

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1 梁一;趙辰光;仝鑫;齊義鵬;孫慧;;楊樹菇蛋白對誘發(fā)性大鼠肺鱗狀細胞癌的抑制作用[A];湖北省生物工程學會2004年年會學術報告及論文摘要匯編[C];2004年

2 戴志強;張素胤;許建一;胥彬;;人肺鱗狀細胞癌裸小鼠移植模型的超微結構觀察[A];第四次全國電子顯微學會議論文摘要集[C];1986年

3 李萃;肖志強;章曉鵬;陳主初;吳曉英;馮雪萍;張鵬飛;李建玲;梁宋平;;人肺鱗狀細胞癌的蛋白質(zhì)組學研究[A];中國蛋白質(zhì)組學第二屆學術大會論文摘要論文集[C];2004年

4 黃受方;白逸秋;付治鋒;李云生;崔萍;童潔;任加強;;肺鱗狀細胞癌超微結構的研究[A];第四次全國電子顯微學會議論文摘要集[C];1986年

5 徐軼;王璽;馬靖;聶立功;符浩;遲春花;闕呈立;王廣發(fā);;同期原發(fā)肺鱗狀細胞癌及胃低分化腺癌伴支氣管內(nèi)轉(zhuǎn)移一例報告[A];中華醫(yī)學會呼吸病學年會——2011（第十二次全國呼吸病學學術會議）論文匯編[C];2011年

6 王秀蘭;薛景峰;;早期肺鱗狀細胞癌的CT與病理相關性研究[A];第十二屆全國臨床醫(yī)學影像學術會議、第四屆東北三省放射學術會議論文匯編[C];2002年

7 龐俊偉;陳東;王偉;石鳳茹;肖磊;;E2F1在肺腺癌及肺鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義[A];中華醫(yī)學會病理學分會2009年學術年會論文匯編[C];2009年

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  本文關鍵詞：ANG通過HMGA2調(diào)控肺鱗狀細胞癌細胞遷移、侵襲功能機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：497885