胃癌(Gastric cancer)的發(fā)病率和死亡率均位于我國所有癌癥發(fā)病和死因順位的第二位,患者的5年生存率低于20%。目前,胃鏡是診斷胃癌最常用的技術(shù),但因其具有侵襲性而不適用于大規(guī)模無癥狀高危人群的篩查。腫瘤相關(guān)抗原(Tumor associated antigen,TAA)自身抗體能夠在腫瘤患者血清中穩(wěn)定存在并可以在出現(xiàn)癥狀數(shù)月甚至數(shù)年之前就可以被檢測(cè)到,因此,可作為一種新興的非侵入性的腫瘤早期免疫診斷標(biāo)志物。目的本研究的目的是通過檢測(cè)研究對(duì)象血清中的9種TAAs(p53,p62,c-Myc,PTEN,IMP1,p16,14-3-3 ξ,MDM2和NPM1)自身抗體的含量,旨在篩選出一組可用于胃癌診斷的抗-TAA自身抗體組合,并構(gòu)建相應(yīng)的胃癌患病預(yù)測(cè)模型,用另一組獨(dú)立人群驗(yàn)證該患病預(yù)測(cè)模型對(duì)胃癌的診斷價(jià)值,從而為構(gòu)建一種新的適用于早期胃癌篩查的非侵襲性診斷方法提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。方法1.PTEN重組蛋白的表達(dá)與純化:將pET-30a(+)-PTEN重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),采用鎳離子親和層分析法對(duì)PTEN蛋白進(jìn)行純化。2.單個(gè)自身抗體指標(biāo)對(duì)...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１表達(dá)質(zhì)粒ｐＥＴ－３０ａ（＋）圖譜??９??

大腸桿菌ＢＬ２１（ＤＥ３）化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞作為純化ＰＴＥＮ重組蛋白的宿主，購??自北京全式金生物公司。??表達(dá)質(zhì)粒為ｐＥＴ－３０ａ（＋），其圖譜見圖２．１。??Ｘｈｏ?１（１５８）??Ｎｏｔ?１（１６６）??Ｅａｇ?１（１６６）??Ｈｉｎｄ?１１１（１７３）??Ｓａｌ?１（１７９）....

圖３．１?ＰＴＥＮ重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)??Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ；?１：誘導(dǎo)前；２：誘導(dǎo)后??

蛋白溶解于含有尿素的上清中，采用鎳離子親和層柱離心上清，用Ｂｕｆｆｅｒ?Ｃ洗??脫雜蛋白，然后再用Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ和Ｂｕｆｆｅｒ?Ｅ洗脫目的蛋白，同時(shí)收集Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ和??Ｂｕｆｆｅｒ?Ｅ的洗脫峰處的流出液，進(jìn)行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝膠電泳分析。圖３．１表明，力口??入０．５ｍＭ....

圖３．２?ＰＴＥＮ重組蛋白表達(dá)純化的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ結(jié)果??

蛋白溶解于含有尿素的上清中，采用鎳離子親和層柱離心上清，用Ｂｕｆｆｅｒ?Ｃ洗??脫雜蛋白，然后再用Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ和Ｂｕｆｆｅｒ?Ｅ洗脫目的蛋白，同時(shí)收集Ｂｕｆｆｅｒ?Ｄ和??Ｂｕｆｆｅｒ?Ｅ的洗脫峰處的流出液，進(jìn)行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝膠電泳分析。圖３．１表明，力口??入０．５ｍＭ....

圖３．４受試組中單個(gè)抗－ＴＡＡ自身抗體對(duì)胃癌的診斷價(jià)值??

圖３．４受試組中單個(gè)抗－ＴＡＡ自身抗體對(duì)胃癌的診斷價(jià)值??

本文編號(hào)：4047253