造血干細(xì)胞可以產(chǎn)生所有譜系的血液細(xì)胞,它主要存在于骨髓內(nèi),骨髓壁龕可以為其提供靜息、增殖和分化所必需的調(diào)節(jié)信號(hào)。骨髓基質(zhì)細(xì)胞是骨髓的主要成分,越來(lái)越多的證據(jù)表明它是造血干細(xì)胞的“沉默伴侶”,可以分泌多種造血過(guò)程中所需的正負(fù)調(diào)控因子,發(fā)揮高效的調(diào)控作用,另一方面它也能為造血干細(xì)胞的增殖、分化與成熟構(gòu)筑良好的空間環(huán)境。它還可以分泌生長(zhǎng)因子以促進(jìn)克隆細(xì)胞生存、招募內(nèi)皮細(xì)胞及間充質(zhì)干細(xì)胞。黑色素瘤細(xì)胞黏附分子(MCAM)被認(rèn)為是骨髓壁龕的標(biāo)志物,也是骨髓基質(zhì)細(xì)胞命運(yùn)的決策者。糖基化是存在較為廣泛的蛋白翻譯后修飾之一,與蛋白的表達(dá)、定位和半衰期密切相關(guān),還影響細(xì)胞的增殖或凋亡等。糖鏈由糖基轉(zhuǎn)移酶和糖苷酶共同作用產(chǎn)生。其中,N-乙酰氨基葡萄糖氨基轉(zhuǎn)移酶III(MGAT3)負(fù)責(zé)將N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)的β-1,4糖苷鍵連接到N-聚糖上的β-甘露糖上,形成平分型GlcNAc結(jié)構(gòu)。平分型GlcNAc可以抑制細(xì)胞之間以及細(xì)胞與胞外基質(zhì)之間的黏附從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移,但其對(duì)于骨髓微環(huán)境以及其中的克隆細(xì)胞的影響尚未有深入研究。骨髓基質(zhì)細(xì)胞與惡性克隆細(xì)胞共培養(yǎng)的模型,常被用于研究骨髓微環(huán)境中基質(zhì)細(xì)胞與惡...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 骨髓微環(huán)境
    1.2 骨髓微環(huán)境中的黏附分子MCAM
    1.3 糖基化修飾及平分型GlcNAc
    1.4 蛋白糖基化位點(diǎn)鑒定
    1.5 共培養(yǎng)模型及其應(yīng)用
    1.6 高爾基體、溶酶體與蛋白加工
    1.7 立題根據(jù)與意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株與質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 試劑及培養(yǎng)基的配制
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞中蛋白質(zhì)的提取
        2.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.2.4 凝集素印跡
        2.2.5 免疫共沉淀
        2.2.6 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定
        2.2.7 細(xì)胞免疫熒光染色
        2.2.8 Edu標(biāo)記檢測(cè)細(xì)胞增殖
        2.2.9 平分型GlcNAc的檢測(cè)
        2.2.10 RNA提取
        2.2.11 RT-PCR
        2.2.12 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.13 蛋白在高爾基體及溶酶體中的定位檢測(cè)
        2.2.14 慢病毒濃縮
        2.2.15 原代骨髓基質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.16 NHS-LC-Biotin生物素標(biāo)記膜蛋白實(shí)驗(yàn)
        2.2.17 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞分離與培養(yǎng)
        2.2.18 蛋白糖基化位點(diǎn)鑒定
        2.2.19 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 臨床樣本中MGAT3、MCAM以及平分型GlcNAc的表達(dá)
        3.1.1 臨床樣本骨髓基質(zhì)細(xì)胞中MGAT3、平分型GlcNAc以及MCAM的表達(dá)
        3.1.2 MDS與對(duì)照組骨髓基質(zhì)細(xì)胞中MGAT3和MCAM的 m RNA表達(dá)水平
        3.1.3 小結(jié)
    3.2 共培養(yǎng)后骨髓基質(zhì)細(xì)胞中平分型GlcNAc修飾的變化
        3.2.1 與惡性克隆細(xì)胞共培養(yǎng)后HS27a細(xì)胞中平分型GlcNAc表達(dá)的變化
        3.2.2 與惡性克隆細(xì)胞共培養(yǎng)后HS5 細(xì)胞中平分型GlcNAc表達(dá)的變化
        3.2.3 小結(jié)
    3.3 基質(zhì)細(xì)胞中修飾平分型GlcNAc對(duì)惡性克隆細(xì)胞增殖的影響
        3.3.1 HS27a、HS27a-MGAT3 細(xì)胞對(duì)惡性克隆細(xì)胞增殖的影響
        3.3.2 HS5、HS5-sh MGAT3 細(xì)胞對(duì)惡性克隆細(xì)胞增殖的影響
        3.3.3 小結(jié)
    3.4 HS27a與 HS27a-MGAT3 細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路、CAF相關(guān)marker以及細(xì)胞因子的檢測(cè)
        3.4.1 HS27a與 HS27a-MGAT3 細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路的檢測(cè)
        3.4.2 HS27a與 HS27a-MGAT3 細(xì)胞中CAF相關(guān)marker的檢測(cè)
        3.4.3 HS27a與 HS27a-MGAT3 條件培養(yǎng)基中細(xì)胞因子的檢測(cè)
    3.5 過(guò)表達(dá)MGAT3 及沉默MGAT3 細(xì)胞株的構(gòu)建
        3.5.1 HS27a-Tet One-MGAT3 細(xì)胞株的構(gòu)建
        3.5.2 MSC-MGAT3、MSC-sh MGAT3 細(xì)胞株的構(gòu)建
        3.5.3 小結(jié)
    3.6 平分型GlcNAc影響MCAM表達(dá)的機(jī)制研究
        3.6.1 平分型GlcNAc修飾MCAM
        3.6.2 MCAM上N-糖基化修飾位點(diǎn)預(yù)測(cè)
        3.6.3 MCAM蛋白上平分型GlcNAc位點(diǎn)的鑒定
        3.6.4 生物素標(biāo)記膜蛋白檢測(cè)MCAM在膜內(nèi)外的表達(dá)
        3.6.5 免疫熒光染色檢測(cè)HS27a和 HS27a-MGAT3中MCAM的表達(dá)
        3.6.6 小結(jié)
    3.7 小鼠模型驗(yàn)證基質(zhì)細(xì)胞中過(guò)表達(dá)MGAT3對(duì)惡性克隆細(xì)胞增殖及生存期的影響
主要結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3971906