目的分析GSG2在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)水平及其與患者臨床病理特征的相關(guān)性。研究GSG2敲減對肝癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移以及細(xì)胞周期的影響。構(gòu)建荷瘤模型,研究GSG2敲減對小鼠體內(nèi)腫瘤生長發(fā)育的影響。方法1.獲取患者知情同意,收集患者肝癌及癌旁樣本。同時記錄患者臨床病理資料,主要包括患者年齡、性別、TNM分期、腫瘤病理分級以及腫瘤分期。應(yīng)用免疫組化測得肝癌及癌旁組織中GSG2的表達(dá)水平,并應(yīng)用統(tǒng)計軟件分析GSG2表達(dá)水平與病人臨床資料的相關(guān)性。2.應(yīng)用MTT法檢測GSG2敲減后肝癌細(xì)胞增殖情況,克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測GSG2敲減對肝癌細(xì)胞克隆能力的影響,劃痕實(shí)驗(yàn)檢測GSG2敲減對肝癌細(xì)胞遷移的影響,流式細(xì)胞法檢測GSG2敲減對肝癌細(xì)胞凋亡的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測出細(xì)胞DNA含量,最后軟件分析計算出細(xì)胞所處周期。3.腫瘤在體內(nèi)的生長發(fā)育:在小鼠前肢腋下注射腫瘤細(xì)胞建立荷瘤模型后,定期記錄并計算出腫瘤大小、體積及小鼠重量,應(yīng)用小動物活體成像儀測量腫瘤的熒光強(qiáng)度。處死小鼠獲得腫瘤組織后,使用免疫組化檢測腫瘤樣本Ki-67表達(dá)水平。結(jié)果1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:179例原發(fā)性肝癌標(biāo)本中GSG2表達(dá)水...

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圖３．?１?ＧＳＧ２在原發(fā)性肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)水平??

????３結(jié)果??３．?１?ＧＳＧ２在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)??免疫組化檢測ＧＳＧ２在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)水平。ＧＳＧ２是胞漿和胞核??染色，陽性細(xì)胞可呈淡黃色或棕黃色。免疫組化結(jié)果：ＧＳＧ２在肝癌組織中的表??達(dá)水平較癌旁組織增高（放大倍數(shù)２００Ｘ），詳見圖３．?１。??ｍ?....

圖３．?３轉(zhuǎn)染７２小時后細(xì)胞感染效率??

????３．２?ＧＳＧ２在肝癌細(xì)胞系中的敲減效率??檢測ＧＳＧ２在４種肝癌細(xì)胞系內(nèi)本底表達(dá)水平，定量ＰＣＲ結(jié)果顯示，??Ｈｅｐ３Ｂ２．１－７，?ＳＫ－ＨＥＰ－１和ＨＣＣＬＭ３細(xì)胞系中ＧＳＧ２的表達(dá)較ｈｕｈ－７細(xì)胞系顯著??增高〇〇＜０．?０５），詳見圖３．?２。后續(xù)試驗(yàn)將選用Ｈｅ....

圖３．?４通過ＰＣＲ測得的ＧＳＧ２的敲減效率，通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ測得ＧＳＧ２蛋白的水??平

????為?８９．?２?％?（戶＜０．?０１）和?８３．?４?％?（戶＜０．?００１）（圖?３．?４?Ａ，Ｂ）。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?分析顯示，??與ｓｈＣｔｒ丨組相比，ｓｈＧＳＧ２組中ＧＳＧ２的蛋白水平顯著下調(diào)（圖３．?４?Ｃ，Ｄ）。由此??可見，我們成功建立了?ＧＳＧ２的....

圖３．?６克隆形成實(shí)驗(yàn)表明ｓｈＧＳＧ２組克隆形成下降??

????圖３．?５?ＧＳＧ２敲減對肝癌細(xì)胞增殖的影響??ＳＫ－ＨＥＰ－１細(xì)胞系的克隆形成試驗(yàn)表明，與ｓｈＣｔｒｌ組相比，ｓｈＧＳＧ２組的克隆??形成明顯減少（戶＜〇．?００１）�？寺�(shí)驗(yàn)結(jié)果說明ＧＳＧ２敲減后，肝癌細(xì)胞克隆形成??能力受到抑制，詳見圖３．?６。??１５０１?■ｓｈ....

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