目的:揭示氧化型ATM在低氧三陰性乳腺癌干細(xì)胞(TNBC-CSCs)富集和干性維持中的作用及分子機(jī)制。方法:(1)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)比分析常氧和低氧培養(yǎng)條件下,低氧對(duì)三陰性乳腺癌(TNBC)Hs578T和BT549細(xì)胞中CD44⁺/CD24^-的干細(xì)胞樣細(xì)胞的比例影響;乳腺癌干細(xì)胞微球體(mammospheres)形成實(shí)驗(yàn)對(duì)比分析常氧和低氧培養(yǎng)條件下,低氧對(duì)干細(xì)胞微球體形成能力的影響;qRT-PCR和Western blot檢測富集得到的干細(xì)胞微球體CSCs標(biāo)志物的表達(dá)情況。(2)Western blot檢測常氧和低氧條件下干細(xì)胞微球體形成實(shí)驗(yàn)富集得到的干細(xì)胞微球體中ATM、p-ATM(s1981)和γH2AX(s139)蛋白表達(dá)量;qRT-PCR和Western blot分析ATM特異抑制劑KU60019處理、shRNA穩(wěn)定敲低ATM表達(dá),對(duì)TNBC-CSCs富集和干性標(biāo)志物表達(dá)的影響。(3)2DG、二甲雙胍分別或聯(lián)合處理低氧TNBC-CSCs,應(yīng)用ATM檢測試劑盒檢測ATP產(chǎn)量。ATM特異抑制劑KU60019處理或未處理低氧培養(yǎng)的TNBC-CSC...

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1流式細(xì)胞術(shù)檢測低氧處理24h后Hs578T和BT549干細(xì)胞群

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文2結(jié)果2.1低氧增加三陰性乳腺癌細(xì)胞株中CD44+/CD24-干細(xì)胞群比例為明確低氧是否對(duì)三陰性乳腺癌干細(xì)胞特征具有調(diào)控作用，我們首先利用干乳腺腫瘤干細(xì)胞表面分子標(biāo)志CD44+/CD24-，使用流式細(xì)胞檢測常氧或低氧處理24h后的TNBC....

圖1.2低氧促進(jìn)TNBC-CSCs干細(xì)胞微球體形成并上調(diào)干性標(biāo)志物的mRNA和蛋白表達(dá)(A)RepresentativeimagesofmammospheresformedfromHs578TandBT549cellsculturedunder1%O2condition.Scalebar,100μm.ThequantificationofmammosphereformingefficienciesofbothHs578TandBT549cellswereshown(rightpanel,**P<0.01).(B,C)

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文檢測常氧和低氧條件下培養(yǎng)的干細(xì)胞微球體干細(xì)胞標(biāo)志物SOX2、OCT4、KLF4及c-MYC的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，低氧條件下培養(yǎng)的乳腺癌干細(xì)胞微球體中，干細(xì)胞標(biāo)志物的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著高于常氧條件下培養(yǎng)的干細(xì)胞微球體（圖1.2B....

圖2.1蛋白印跡檢測三陰性乳腺癌干細(xì)胞中ATM氧化激活

圖2.1蛋白印跡檢測三陰性乳腺癌干細(xì)胞中AesternblottingtochecktheoxidizedATMactivhypoxia.ATM促進(jìn)TNBC-CSCs富集是一種常用的ATM激酶特異性抑制劑，研究氧化型ATM對(duì)TNBC-CSC....

圖2.2氧化型ATM促進(jìn)TNBC-CSCs富集Figure2.2OxidizedATMpromotesTNBC-CSCsenrichment.(A)KU60019suppressesmammosphereenrichmentofHs578TandBT549cellsinadose-dependentmanner.Scalebar,500μm.Hs578TandBT549cellsweresuspensioncultureinCSCspecialmediumunder

39圖2.2氧化型ATM促進(jìn)TNBC-CSCs富集Figure2.2OxidizedATMpromotesTNBC-CSCsenrichment.(A)KU60019suppressesmammosphereenrichmentofHs578T....

本文編號(hào)：3958730