目的:揭示氧化型ATM在低氧三陰性乳腺癌干細胞(TNBC-CSCs)富集和干性維持中的作用及分子機制。方法:(1)流式細胞術(shù)對比分析常氧和低氧培養(yǎng)條件下,低氧對三陰性乳腺癌(TNBC)Hs578T和BT549細胞中CD44⁺/CD24^-的干細胞樣細胞的比例影響;乳腺癌干細胞微球體(mammospheres)形成實驗對比分析常氧和低氧培養(yǎng)條件下,低氧對干細胞微球體形成能力的影響;qRT-PCR和Western blot檢測富集得到的干細胞微球體CSCs標志物的表達情況。(2)Western blot檢測常氧和低氧條件下干細胞微球體形成實驗富集得到的干細胞微球體中ATM、p-ATM(s1981)和γH2AX(s139)蛋白表達量;qRT-PCR和Western blot分析ATM特異抑制劑KU60019處理、shRNA穩(wěn)定敲低ATM表達,對TNBC-CSCs富集和干性標志物表達的影響。(3)2DG、二甲雙胍分別或聯(lián)合處理低氧TNBC-CSCs,應(yīng)用ATM檢測試劑盒檢測ATP產(chǎn)量。ATM特異抑制劑KU60019處理或未處理低氧培養(yǎng)的TNBC-CSC...

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1流式細胞術(shù)檢測低氧處理24h后Hs578T和BT549干細胞群

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文2結(jié)果2.1低氧增加三陰性乳腺癌細胞株中CD44+/CD24-干細胞群比例為明確低氧是否對三陰性乳腺癌干細胞特征具有調(diào)控作用，我們首先利用干乳腺腫瘤干細胞表面分子標志CD44+/CD24-，使用流式細胞檢測常氧或低氧處理24h后的TNBC....

圖1.2低氧促進TNBC-CSCs干細胞微球體形成并上調(diào)干性標志物的mRNA和蛋白表達(A)RepresentativeimagesofmammospheresformedfromHs578TandBT549cellsculturedunder1%O2condition.Scalebar,100μm.ThequantificationofmammosphereformingefficienciesofbothHs578TandBT549cellswereshown(rightpanel,**P<0.01).(B,C)

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文檢測常氧和低氧條件下培養(yǎng)的干細胞微球體干細胞標志物SOX2、OCT4、KLF4及c-MYC的表達水平。結(jié)果顯示，低氧條件下培養(yǎng)的乳腺癌干細胞微球體中，干細胞標志物的mRNA和蛋白表達水平均顯著高于常氧條件下培養(yǎng)的干細胞微球體（圖1.2B....

圖2.1蛋白印跡檢測三陰性乳腺癌干細胞中ATM氧化激活

圖2.1蛋白印跡檢測三陰性乳腺癌干細胞中AesternblottingtochecktheoxidizedATMactivhypoxia.ATM促進TNBC-CSCs富集是一種常用的ATM激酶特異性抑制劑，研究氧化型ATM對TNBC-CSC....

圖2.2氧化型ATM促進TNBC-CSCs富集Figure2.2OxidizedATMpromotesTNBC-CSCsenrichment.(A)KU60019suppressesmammosphereenrichmentofHs578TandBT549cellsinadose-dependentmanner.Scalebar,500μm.Hs578TandBT549cellsweresuspensioncultureinCSCspecialmediumunder

39圖2.2氧化型ATM促進TNBC-CSCs富集Figure2.2OxidizedATMpromotesTNBC-CSCsenrichment.(A)KU60019suppressesmammosphereenrichmentofHs578T....

本文編號：3958730