目的:WDR重復(fù)(WD40 repeat)結(jié)構(gòu)域蛋白家族參與細(xì)胞的多種活動(dòng),如:G蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、DNA損傷感知和修復(fù)、細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂等。本文旨在對(duì)其家族成員之一WDR54(WD repeat domain 54)在結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)中的生物學(xué)功能進(jìn)行研究。方法:(1)應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)945例結(jié)直腸癌組織、36例癌旁組織、17例肝轉(zhuǎn)移標(biāo)本中WDR54的表達(dá)情況;(2)應(yīng)用qRT-PCR、WB技術(shù)檢測(cè)WDR54在FHC、RKO、Caco-2、SW480中mRNA和蛋白的表達(dá)情況;(3)siRNA下調(diào)WDR54的表達(dá),觀察對(duì)CRC細(xì)胞株增殖、侵襲、遷移能力的影響;(4)在WDR54過(guò)表達(dá)(亞型a,b,c)株中分別轉(zhuǎn)染siRNA后與對(duì)照組相比,觀察CRC細(xì)胞增殖表型的變化;(5)將穩(wěn)敲細(xì)胞株植入裸鼠背部構(gòu)建移植瘤模型,探索WDR54下調(diào)是否對(duì)體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)產(chǎn)生影響。結(jié)果:(1)免疫組化顯示W(wǎng)DR54在CRC中的表達(dá)是升高的,WDR54高表達(dá)的腫瘤患者相對(duì)于WDR54低表達(dá)的患者通常有一個(gè)較低的疾病特異性生存率(DSS),尤其是高度分化的腫瘤組。多...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞中英文對(duì)照
第一章 前言
第二章 材料與方法
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 組織標(biāo)本
        1.3 細(xì)胞株
        1.4 主要試驗(yàn)儀器
        1.5 主要試劑與耗材
        1.6 試劑配置
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 WDR54的生物信息學(xué)分析
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 免疫組化
        2.4 WDR54的qPCR檢測(cè)
        2.5 WB檢測(cè)WDR54的蛋白表達(dá)水平
        2.6 細(xì)胞瞬轉(zhuǎn)
        2.7 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的構(gòu)建
        2.8 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.9 侵襲遷移實(shí)驗(yàn)(24孔板)
        2.10 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.11 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1 生物信息學(xué)分析WDR54在CRC中高表達(dá)
    2 qPCR、WB驗(yàn)證WDR54在結(jié)直腸癌中表達(dá)上調(diào)
    3 IHC檢測(cè)WDR54在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及生存分析
    4 下調(diào)WDR54基因抑制CRC細(xì)胞的生長(zhǎng)
    5 WDR54下調(diào)抑制CRC細(xì)胞的侵襲遷移能力
    6 WDR54-shRNA抑制裸鼠體內(nèi)移植瘤的生長(zhǎng)
    7 過(guò)表達(dá)WDR54亞型回復(fù)siWDR54對(duì)CRC細(xì)胞的抑制作用
第四章 討論
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3908269