發(fā)布時間：2024-02-24 01:03

　　目的:WDR重復(WD40 repeat)結構域蛋白家族參與細胞的多種活動,如:G蛋白偶聯(lián)受體信號轉(zhuǎn)導、DNA損傷感知和修復、細胞生長和分裂等。本文旨在對其家族成員之一WDR54(WD repeat domain 54)在結直腸癌(colorectal cancer,CRC)中的生物學功能進行研究。方法:(1)應用免疫組化技術檢測945例結直腸癌組織、36例癌旁組織、17例肝轉(zhuǎn)移標本中WDR54的表達情況;(2)應用qRT-PCR、WB技術檢測WDR54在FHC、RKO、Caco-2、SW480中mRNA和蛋白的表達情況;(3)siRNA下調(diào)WDR54的表達,觀察對CRC細胞株增殖、侵襲、遷移能力的影響;(4)在WDR54過表達(亞型a,b,c)株中分別轉(zhuǎn)染siRNA后與對照組相比,觀察CRC細胞增殖表型的變化;(5)將穩(wěn)敲細胞株植入裸鼠背部構建移植瘤模型,探索WDR54下調(diào)是否對體內(nèi)的腫瘤生長產(chǎn)生影響。結果:(1)免疫組化顯示W(wǎng)DR54在CRC中的表達是升高的,WDR54高表達的腫瘤患者相對于WDR54低表達的患者通常有一個較低的疾病特異性生存率(DSS),尤其是高度分化的腫瘤組。多...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞中英文對照
第一章 前言
第二章 材料與方法
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 組織標本
        1.3 細胞株
        1.4 主要試驗儀器
        1.5 主要試劑與耗材
        1.6 試劑配置
    2 實驗方法
        2.1 WDR54的生物信息學分析
        2.2 細胞培養(yǎng)
        2.3 免疫組化
        2.4 WDR54的qPCR檢測
        2.5 WB檢測WDR54的蛋白表達水平
        2.6 細胞瞬轉(zhuǎn)
        2.7 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的構建
        2.8 細胞增殖實驗
        2.9 侵襲遷移實驗(24孔板)
        2.10 動物實驗
        2.11 統(tǒng)計分析
第三章 實驗結果
    1 生物信息學分析WDR54在CRC中高表達
    2 qPCR、WB驗證WDR54在結直腸癌中表達上調(diào)
    3 IHC檢測WDR54在結直腸癌組織中的表達及生存分析
    4 下調(diào)WDR54基因抑制CRC細胞的生長
    5 WDR54下調(diào)抑制CRC細胞的侵襲遷移能力
    6 WDR54-shRNA抑制裸鼠體內(nèi)移植瘤的生長
    7 過表達WDR54亞型回復siWDR54對CRC細胞的抑制作用
第四章 討論
附錄
參考文獻
致謝



本文編號：3908269