隨著蛋白質(zhì)化學(xué)技術(shù)的突破性進(jìn)展,雙/多特異性抗體的構(gòu)建方法和表達(dá)技術(shù)不斷創(chuàng)新。目前絕大多數(shù)雙/多特異性抗體是靶向T細(xì)胞并強(qiáng)化T細(xì)胞功能為原理設(shè)計(jì)的,已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)和臨床實(shí)用的產(chǎn)品展示出誘人前景。NK細(xì)胞是機(jī)體T細(xì)胞之外抗腫瘤的二大利器之一,本身具有廣譜的腫瘤殺傷能力,尤其在對抗冷腫瘤時(shí)展現(xiàn)出獨(dú)到的優(yōu)勢,近期被廣泛關(guān)注。同時(shí),NK細(xì)胞具有強(qiáng)大的增強(qiáng)T細(xì)胞抗腫瘤免疫應(yīng)答的能力,是T細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤的功能基礎(chǔ)。由于NK細(xì)胞在體內(nèi)存活時(shí)間較短,極大地限制了它在免疫治療中的作用。我們構(gòu)建了三特異性抗體用于再導(dǎo)向NK細(xì)胞,以此來研究它對NK細(xì)胞抗腫瘤作用的增強(qiáng)效應(yīng)。1、雙/三特異性抗體構(gòu)建、表達(dá)與鑒定我們設(shè)計(jì)并構(gòu)建了三特異性抗體161519,它是由一段抗人CD16單鏈抗體、修飾人IL-15細(xì)胞因子和抗人CD19單鏈抗體組成。通過原核表達(dá)載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),之后通過包涵體變、復(fù)性獲得了可溶形式的蛋白,利用SDS-PAGE和質(zhì)譜鑒定了純度和精確分子量。我們也將161519分子構(gòu)建到真核表達(dá)載體,通過CHO細(xì)胞表達(dá)并利用親和層析純化獲得了純度較高的蛋白。作為對照,我們也設(shè)計(jì)了雙特異性抗體1619(在161...

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【學(xué)位級別】：博士

圖１．２雙特異性抗體作用機(jī)制模式圖（ＡｒａｎＦ．?Ｌａｂｒｉｊｎｅｔａｌ．，２０１９）??

圖１．３?ＮＫ細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷的治療策略示意圖（Ｌａｕｒａ?Ｃｈｉｏｓｓｏｎｅ?ｅｔ?ａｌ．，２０１８）?

圖４．１?１６１５１９原核表達(dá)載體構(gòu)建??圖注：（Ａ）?１６１５１９基因元件設(shè)計(jì)模式圖，１６１５１９分子包含一段抗ＣＤ１６ｓｃＦｖ，人ＩＬ－??－

圖４．２?１６１５１９抗體表達(dá)條件和包涵體變復(fù)性條件探討??

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